何順福

（西寧野生動物園，青海西寧 810000）

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雪豹大腸桿菌與沙門氏菌混合感染的分離及鑒定

何順福

（西寧野生動物園，青海西寧 810000）

2014年8月，西寧野生動物園繁育的2只3月齡雪豹出現(xiàn)腹瀉，經過抗生素藥物對癥治療數(shù)天后效果不佳，隨后青海大學農牧學院動物醫(yī)學系傳染病實驗室對患病雪豹的腹瀉糞便進行了采集，采取常規(guī)的病原分離及藥敏試驗技術進行微生物學診斷，最后，確診為大腸桿菌與沙門氏菌混合感染，藥敏試驗結果顯示此次分離的病菌對左氧氟沙星、頭孢曲松、依諾沙星敏感。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料 采集發(fā)病雪豹的糞便，待檢。

1.1.2 培養(yǎng)基 伊紅亞甲藍平板、SS平板、TSA平板和TSB肉湯培養(yǎng)基。

1.1.3 試驗動物 健康小白鼠10只。

1.1.4 藥敏紙片 14種藥敏紙片。

1.2 方法

1.2.1 病料的采集 采集西寧野生動物園發(fā)病雪豹糞便無菌種到TSB肉湯中37℃培養(yǎng)18～24h。

1.2.5 藥敏試驗 分別用滅菌棉拭子蘸取動物致病性試驗中選取的濃度為3.0×109個/ml的菌懸液均勻涂布于MH平板培養(yǎng)基上（培養(yǎng)基厚度為4mm）進行藥敏試驗。判定標準參照美國臨床實驗室標準委員會（NCCLS）藥敏試驗紙片擴散法法規(guī)[2]。

2 結果

2.1 涂片、染色及鏡檢

觀察到大量革蘭氏陰性的小桿菌。

2.2 病料分離、純化、生化試驗結果

2.3 致病性試驗結果

試驗組小白鼠于18h全部死亡。剖檢可見大量心包積液和腹腔積液，腎臟腫大，肝臟出血，十二指腸出血明顯。采集實質臟器，分別分離到了與上述一致的革蘭氏陰性小桿菌，對照組小白鼠飼喂一周后仍健活。

2.4 藥敏試驗結果

應用14種藥敏紙片對禽霍亂病原菌進行藥物篩選后，發(fā)現(xiàn)3種藥物左氧氟沙星、頭孢曲松、依諾沙星敏感，對阿奇霉素、紅霉素、環(huán)丙沙星、妥布霉素4種藥物中介，對諾佛沙星、氨芐西林、慶大霉素、青霉素、磺胺、四環(huán)素、氟羅沙星7種藥物耐藥。

3 討論

（1）嚴格科學的日常飼養(yǎng)管理是預防本病的主要途徑，我園在2012年成功繁殖雪豹2只，但是在飼養(yǎng)7個月后因腹瀉治療無效相繼死亡，2014年8月份時隔一年后又成功繁殖雪豹2只，即發(fā)病的兩只幼年雪豹，在對癥治療一周后也相繼死亡，兩只健康的雪豹突然開始腹瀉，究其原因在于飼養(yǎng)三個月的關鍵時期，雪豹3個月時跟隨成年母雪豹開始進食羊肉等飼料，直將羊肉投喂與未經消毒沖洗的地面上，飼喂精瘦肉過多，幼年雪豹無法自行控制食量采食過多導致消化不良或者進食污染的肉類是誘發(fā)本病的主要原因。因此在繁殖育幼過程中，要密切觀察幼年雪豹的采食情況，在幼年雪豹開始自主進食時，應將成年雪豹和幼年雪豹的食物分開飼喂，尤其幼年雪豹不應過多飼喂精瘦肉，帶骨肉少的新鮮脊梁骨是最好的選擇，同時，飼喂場地要干凈清潔，避免食物被污染。

（2）目前，動物園任何疾病首先使用大量抗生素導致的耐藥性是疾病成功治愈的一大障礙，同類抗生素的長期使用產生的耐藥性，往往會耽誤疾病的最佳治療時間，因此，珍稀動物尤其是面對瀕危動物發(fā)生疾病后，要第一時間進行實驗室診斷，進行藥敏試驗，篩選出最佳治療藥物進行治療，雖然本次實驗完成前發(fā)病2只雪豹未經敏感藥物治療死亡，但是在2015年度西寧野生動物園成功繁殖的雪豹在4月齡出現(xiàn)腹瀉癥狀后，第一時間用左氧氟沙星進行了肌注治療，在用藥第2天有效地控制住了病情，截至發(fā)稿，未再出現(xiàn)任何疾病，這次治療的成功為今后雪豹繁殖育幼的成功提供了寶貴的經驗。

（3）從藥敏試驗結果來看菌株對14種常用藥物中的7種藥物有耐藥性，占14種藥敏試驗的50%，4種藥物中介，僅有3種藥物敏感，西寧野生動物園在治療腹瀉類疾病治療過程中長期使用的常用藥物慶大霉素、氨芐西林、諾否沙星、青霉素、磺胺均已產生耐藥性，因此，通過本次對禽霍亂病原的分離及藥敏試驗分析，最終篩選出左氧氟沙星、頭孢曲松、依諾沙星作為本疾病的治療藥物。在發(fā)生類似混合感染疾病的治療過程中，同一種藥物用藥2天癥狀未見好轉，篩選出的敏感藥物應輪換使用，以收到良好的治療效果。

參考文獻

[1] 趙艷紅.貓科動物的感染性腹瀉及治療[J].中國畜禽種業(yè)，2014，（3）：119.

[2] 胡繼紅，高振翔，尹銘芳，等.美國NCCLS2002年版抗生素藥敏試驗操作標準更新內容[J].中華醫(yī)學檢驗雜志，2002，（6）：13-14.

作者簡介：何順福（1981-），男，農學學士學位，助理獸醫(yī)師。