毛玉山，　陳軼塵，　趙亞榮，　車曉航，　陶　金，　葉小磊△

(1寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科, 2寧波市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所藥物與藥理研究室，浙江 寧波 315020)

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參麥注射液改善3T3-L1細(xì)胞的胰島素抵抗*

毛玉山1▲，陳軼塵2▲，趙亞榮2，車曉航2，陶金2，葉小磊2△

(1寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科,2寧波市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所藥物與藥理研究室，浙江 寧波 315020)

[摘要]目的： 探討參麥注射液改善3T3-L1脂肪前體細(xì)胞胰島素抵抗模型的效果及其作用機(jī)制。方法：使用地塞米松等將3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞，使用油紅O染色法檢測(cè)脂肪細(xì)胞分化情況；用胰島素誘導(dǎo)3T3-L1脂肪細(xì)胞以建立胰島素抵抗模型，并使用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)細(xì)胞上清液中葡萄糖濃度，以評(píng)價(jià)模型建立情況。將建立胰島素抵抗的細(xì)胞分為空白對(duì)照組、10 μmol/L羅格列酮陽性對(duì)照組、25 g/L參麥組和50 g/L參麥組。MTT檢測(cè)各組藥物作用8、16、24和36 h后的細(xì)胞活力。藥物作用8、16和24 h后測(cè)定細(xì)胞上清液葡萄糖濃度。免疫印跡檢測(cè)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)在各組中的蛋白水平。結(jié)果：成功建立3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型，葡萄糖濃度數(shù)據(jù)顯示參麥注射液(25、50 g/L)可以改善胰島素抵抗并可以明顯增加3T3-L1細(xì)胞GLUT4、PI3K及p-AKT的蛋白水平。結(jié)論：參麥注射液可以改善3T3-L1胰島素抵抗細(xì)胞的葡萄糖利用，并且與增加GLUT4、PI3K及p-AKT的蛋白水平有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]胰島素抵抗； 參麥注射液； 3T3-L1前脂肪細(xì)胞

糖尿病是一種以高血糖為特征的代謝性疾病，分為1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus，T1DM)和2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)，我國(guó)糖尿病人口已超過1億人，其中2型糖尿病占90%～95%。2型糖尿病是由多種因素共同作用所引發(fā)的，包括遺傳和多種環(huán)境的綜合作用，其中胰島素抵抗(insulin resistance，IR)是T2DM發(fā)病的主要原因[1]。胰島素抵抗是指胰島素的靶器官對(duì)胰島素的敏感性下降，即正常劑量的胰島素不能產(chǎn)生正常生物學(xué)效應(yīng)的一種狀態(tài)。糖尿病的治療以有效控制血糖、預(yù)防和減少并發(fā)癥、改善患者生活質(zhì)量以及延長(zhǎng)壽命為目標(biāo)。在2型糖尿病的治療中，要針對(duì)其發(fā)病機(jī)制，改善患者的胰島素抵抗，增加患者對(duì)胰島素的敏感性[2]。鑒于西藥治療存在副作用以及耐藥問題，從傳統(tǒng)中醫(yī)藥中尋找解決的途徑具有重要意義[3]。

參麥注射液是由中藥人參、麥冬等經(jīng)化學(xué)提取精制而成的中藥注射液，其主要活性成分為Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1以及麥冬皂苷D，具有抗休克、抗心衰、抗炎等作用[4]。其中，人參作為參麥注射液的主要成分，其可以影響糖脂代謝通路，增加能量消耗，調(diào)節(jié)過氧化物酶體增殖物活化受體γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ)的活性和表達(dá)，改善胰島素抵抗并促進(jìn)胰島素合成和釋放[5]。人參皂苷Rb1能夠通過上調(diào)脂肪組織周脂素(perilipin)的表達(dá)，減少游離脂肪酸的釋放和甘油三酯的沉積，進(jìn)而改善胰島素抵抗和糖代謝異常[6]。另有研究表明，參麥注射液中的麥冬成分可以減少大鼠胰島β細(xì)胞凋亡[7]。參麥注射液在用于糖尿病時(shí)，可以改善患者胰島素抵抗的狀況[8]。但是目前參麥注射液改善IR的機(jī)制尚未明確，而且缺少合適的IR細(xì)胞藥理模型。在本實(shí)驗(yàn)中使用3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞，構(gòu)建胰島素抵抗模型，對(duì)IR相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測(cè)。本研究對(duì)于參麥注射液改善胰島素抵抗機(jī)制的探索不僅有利于明確參麥注射液改善胰島素抵抗的具體作用因素，而且為挖掘我國(guó)傳統(tǒng)中藥的新用途和新價(jià)值，提供具體案例。

材料和方法

1材料

3T3-L1前脂肪細(xì)胞(ATCC)；DMEM培養(yǎng)液(Gibco)；胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司)；羅格列酮(rosiglitazone)、胰島素和3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX)購自Sigma；參麥注射液(正大青春寶藥業(yè)有限公司)；24孔培養(yǎng)板及T25培養(yǎng)瓶(Corning)；葡萄糖氧化酶試劑盒(Invitrogen)；PI3K、GLUT4、AKT和p-AKT等抗體、β-actin抗體、特異性 II 抗(Abcam)。

2方法

參考文獻(xiàn)2.13T3-L1前脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)和分化 3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化中所用方法[9]。先將3T3-L1細(xì)胞復(fù)蘇，用含有10% 胎牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液重懸于T25培養(yǎng)瓶中，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2 d換液1次。將3T3-L1前脂肪細(xì)胞分至24孔板中，待細(xì)胞融合度達(dá)到80%，加入含有IBMX(0.5 mmol/L)、胰島素(1 g/L)、地塞米松(1 μmol/L)的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)48 h。棄去上清，加入含有胰島素的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)48 h。棄去上清，換成DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)至第8天。細(xì)胞使用4%多聚甲醛室溫固定10 min，用0.5%油紅O染液染色10 min，用PBS洗2遍。倒置顯微鏡下拍照，有紅色油滴產(chǎn)生即證明脂肪細(xì)胞分化成功。

2.2胰島素抵抗模型的建立3T3-L1分化完成后，分別用1 μmol/L、100 nmol/L、10 nmol/L和1 nmol/L胰島素誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞。各組加胰島素后分別在8、16和24 h時(shí)，用葡萄糖氧化酶法分別測(cè)定各組的細(xì)胞上清葡萄糖水平，同時(shí)在顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。最后計(jì)算不同胰島素濃度和時(shí)間點(diǎn)下各組與正常對(duì)照組中上清液葡萄糖濃度的差值，差值越大，胰島素抵抗越明顯。

2.3不同濃度參麥注射液對(duì)細(xì)胞活力的測(cè)定將IR細(xì)胞于實(shí)驗(yàn)前24 h，以每孔1×104個(gè)接種于96孔培養(yǎng)板中。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將IR細(xì)胞分為空白組、10 μmol/L羅格列酮組、25 g/L參麥注射液組和50 g/L參麥注射液組，每組3個(gè)復(fù)孔。按照上述分組，通過MTT方法分別檢測(cè)IR細(xì)胞在8、16、24和36 h時(shí)570 nm處的吸光度值。

2.4葡萄糖濃度測(cè)定將最佳造模條件下獲得的IR細(xì)胞分為空白組、10 μmol/L羅格列酮組、25 g/L參麥注射液組和50 g/L參麥注射液組，每組3個(gè)復(fù)孔。按照上述分組，分別收取各組不同藥物在作用細(xì)胞8、16和24 h的上清液。細(xì)胞上清液葡萄糖濃度使用試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，簡(jiǎn)述如下：配制0、10、20、40、80、160和200 μmol/L葡萄糖溶液。將各實(shí)驗(yàn)組上清用試劑盒自帶1×reaction buffer 稀釋1倍。配制葡萄糖濃度測(cè)定所需反應(yīng)液。將葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、空白對(duì)照上清液和各實(shí)驗(yàn)組上清液各取50 μL至96孔板中，再加入50 μL反應(yīng)液，室溫避光反應(yīng)30 min。用酶標(biāo)儀測(cè)定560 nm處吸光度。

2.5免疫印跡檢測(cè)取出CO2培養(yǎng)箱中的細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液后將培養(yǎng)皿放置于冰上，使用冷的PBS淋洗細(xì)胞2遍，吸干凈殘留的PBS，在RIPA裂解液中冰上裂解細(xì)胞，用槍頭或者細(xì)胞刮刮下細(xì)胞后，用1 mL注射器吹打細(xì)胞使DNA斷裂，100 ℃孵育5～10 min后，取3 μL用于BCA定量。煮沸后的蛋白-20 ℃保存?zhèn)溆?。制?0%的SDS-PAGE膠，蛋白樣品加入上樣buffer后，電泳分離蛋白。小心分離SDS-PAGE膠，恒流1.5 h電轉(zhuǎn)移到PVDF膜，使用含5%脫脂牛奶的封閉液封閉1 h，與特異性抗體室溫孵育1 h或者4 ℃過夜后，加入內(nèi)參照抗體β-actin室溫孵育1 h，加入HRP標(biāo)記 II 抗室溫孵育1 h，TBST洗膜3次，取出膜后加入ECL發(fā)光液，暗室中壓片顯影。使用ImageJ軟件對(duì)條帶灰度值進(jìn)行量化分析。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布且方差齊性的均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(means±SD)表示。多組間比較使用單因素方差分析(one-way ANOVA)，兩兩比較采用Bonferroni校正的t檢驗(yàn);如果方差不齊，采用Dunnett’s T3方法分析。使用GraphPad Prism 5.0進(jìn)行作圖，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1前脂肪細(xì)胞分化

3T3-L1細(xì)胞通過IBMX、地塞米松和胰島素誘導(dǎo)后細(xì)胞逐漸變圓，并有脂滴出現(xiàn)。油紅O染色顯示細(xì)胞中已經(jīng)產(chǎn)生紅色的圓形脂肪滴，提示脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)成功，見圖1。

Figure 1.3T3-L1 cells before and after differentiation into adipocytes (×200). The scale bar is 50 μm. A: 3T3-L1 preadipocytes; B: 3T3-L1 adipocytes; C: 3T3-L1 adipocytes after red oil O staining.

圖13T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞前后的鏡下對(duì)比

2胰島素抵抗模型的建立

在脂肪細(xì)胞中加入不同濃度的胰島素，然后在8、16和24 h時(shí)收取細(xì)胞上清。用葡萄糖氧化酶法測(cè)定葡萄糖濃度。計(jì)算得到葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.002 7x+0.0114，R2=0.995。然后計(jì)算得出各組經(jīng)過胰島素誘導(dǎo)后細(xì)胞上清液葡萄糖濃度。與空白對(duì)照比較，1 μmol/L胰島素作用16 h時(shí)細(xì)胞上清液葡萄糖濃度與正常組相差最大，說明建立細(xì)胞胰島素模型效果為最好，相比于其它胰島素誘導(dǎo)組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖2。

Figure 2.The effects of insulin concentration and treatment time on glucose concentration in supernatant of adipocytes. Comparison with control group, the 1 μmol/L insulin 16 h group showed the highest concentration of glucose. Mean±SD.n=3.*P<0.05vscontrol.

圖2不同濃度胰島素作用于脂肪細(xì)胞不同時(shí)間后的葡萄糖濃度

3不同濃度藥物對(duì)細(xì)胞活力的影響

10 μmol/L的羅格列酮組及 25 g/L參麥注射液作用于IR細(xì)胞 36 h 以內(nèi)，其吸光度值與正常對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)細(xì)胞活力沒有抑制作用。50 g/L的參麥注射液36 h 時(shí)其吸光度值與正常對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，對(duì)細(xì)胞活力產(chǎn)生抑制作用，見表1。

表1　不同藥物對(duì)IR細(xì)胞活力的影響

*P<0.05vscontrol.

4參麥注射液對(duì)葡萄糖利用的效果

檢測(cè)空白對(duì)照組、10 μmol/L羅格列酮組、25 g/L參麥注射液組和50 g/L參麥注射液組8、16和24 h時(shí)的細(xì)胞上清中葡萄糖的濃度。結(jié)果顯示，10 μmol/L羅格列酮24 h作用后上清葡萄糖濃度與空白對(duì)照組的差值最小，說明羅格列酮能增加葡萄糖的攝取量，并接近于正常細(xì)胞水平。其次是50 g/L參麥注射液24 h組，上述結(jié)果顯示羅格列酮改善胰島素抵抗的效果最好，其次為50 g/L參麥注射液組，相比于其它給藥組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖3。

5胰島素抵抗相關(guān)蛋白的檢測(cè)

免疫印跡檢法測(cè)定4組藥物作用IR細(xì)胞48 h后的蛋白樣品可見，以IR作為空白對(duì)照組的樣品中，PI3K和GLUT4呈現(xiàn)低表達(dá)，但在加入不同濃度的參麥和羅格列酮后，這2個(gè)蛋白的表達(dá)量均較對(duì)照組表達(dá)增加。同時(shí)，高濃度參麥實(shí)驗(yàn)組中，GLUT4和PI3K表達(dá)量最高(P<0.05)，見圖4。同時(shí)，我們也檢測(cè)了AKT及p-AKT蛋白，發(fā)現(xiàn)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組AKT的蛋白水平與空白對(duì)照組相比無明顯變化，但高濃度的參麥組中p-AKT的蛋白水平明顯上升，與空白對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖5。

Figure 3.The effects of Shenmai injection and rosiglitazone on glucose concentration in 3T3-L1 IR model cells. The concentration of glucose in 10 μmol/L rosiglitazone group and high concentration of Shenmai group were decreased after 24 h and almost close to the normal level. Mean±SD.n=3.*P<0.05vscontrol.

圖3不用濃度參麥注射液及羅格列酮作用IR模型細(xì)胞不同時(shí)間后的葡萄糖濃度變化

Figure 4.The protein expression of GLUT4 and PI3K after treatment with Shenmai injection. Mean±SD.n=5.*P<0.05vscontrol.

圖4GLUT4及PI3K蛋白表達(dá)的變化

Figure 5.The protein levels of AKT and p-AKT after treatment with Shenmai injection. Mean±SD.n=5.*P<0.05vscontrol.

圖5 AKT總蛋白水平及p-AKT蛋白的變化情況

討論

合適的胰島素抵抗細(xì)胞模型將有助于從細(xì)胞水平研究胰島素抵抗的作用機(jī)制，可以輔助體外篩選改善胰島素抵抗的藥物[9-10]。3T3-L1前脂肪細(xì)胞是Swiss小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，能在誘導(dǎo)劑作用下分化為脂肪細(xì)胞，被廣泛應(yīng)用于糖、脂代謝相關(guān)的基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)研究及胰島素增敏劑藥物作用的評(píng)價(jià)中[11]。而且有研究證明完全分化的3T3-L1前脂肪細(xì)胞中胰島素可通過增加葡萄糖攝取、脂質(zhì)分解和糖原的合成充分發(fā)揮作用，因此3T3-L1前脂肪細(xì)胞可作為涵蓋上述3種降糖途徑的細(xì)胞模型[12]。因此本實(shí)驗(yàn)采用不同濃度胰島素誘導(dǎo)3T3-L1脂肪細(xì)胞建立IR模型，觀察參麥注射液對(duì)IR的影響。

脂肪的代謝和胰島素抵抗有密切的關(guān)系，脂肪組織是胰島素抵抗發(fā)生的最主要靶組織[13]，有研究顯示，內(nèi)臟脂肪性肥胖在胰島素抵抗方面起著特別重要的作用，其與2型糖尿病人胰島素介導(dǎo)的葡萄糖利用率顯著相關(guān)[14]。目前胰島素模型主要分為脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞IR模型[15]。構(gòu)建3T3-L1 IR細(xì)胞模型的方法，除了有采用高糖、高胰島素聯(lián)合誘導(dǎo)建模；還有采用IL-6[16]、地塞米松[17]、游離脂肪酸等誘導(dǎo)細(xì)胞IR模型[18]。體內(nèi)高濃度胰島素的刺激是脂肪細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗的主要因素之一[19]。本實(shí)驗(yàn)中將3T3-L1完全分化后，使用在1 μmol/L胰島素作用16 h時(shí)，IR誘導(dǎo)效果最好。葡萄糖濃度的經(jīng)典檢測(cè)方法是通過[3H]或[14C]標(biāo)記的葡萄糖攝取實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)葡萄糖的攝取，需要特殊的工作環(huán)境和儀器，而在本研究中驗(yàn)證模型時(shí)使用商品化試劑盒，檢測(cè)方便，無需特殊儀器，整體而言，誘導(dǎo)條件簡(jiǎn)單，檢測(cè)便捷，可以作為較穩(wěn)定的IR細(xì)胞模型用于研究。

胰島素通過與受體特異性結(jié)合后發(fā)揮生物學(xué)作用，最后激活A(yù)KT，引起細(xì)胞對(duì)葡萄糖攝取的增加以及GLUT4向胞膜的移位，PI3K/AKT是胰島素主要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[19]。在本實(shí)驗(yàn)中，高濃度的參麥注射液作用后，PI3K、GLUT4和p-AKT的表達(dá)均高于羅格列酮組。說明參麥注射液可以改善胰島素抵抗，高濃度時(shí)可能優(yōu)于羅格列酮的降糖效果。當(dāng)AKT表達(dá)下調(diào)時(shí)，小鼠胰島素刺激后的肝糖異生明顯減弱[20]，相反，當(dāng)AKT過度表達(dá)時(shí)，可使3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取量以及GLUT4向胞膜的轉(zhuǎn)位[21]。有研究顯示，人參提取物如人參皂苷Rg1等有效成分，能通過抑制胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中JNK 和NF-κB等的活性，而激活A(yù)MPK途徑，活化胰島素受體亞單位1，促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4的移位，提高脂肪、肌肉等外周組織對(duì)葡萄糖的攝取利用，從而改善胰島素抵抗[22]。另外，人參皂苷能促進(jìn)胰島素抵抗大鼠模型GLUT4和PI3K的表達(dá)[23]。因此在本實(shí)驗(yàn)中我們比較了參麥注射液給藥前后PI3K、GLUT4、AKT及p-AKT的蛋白水平，相比于對(duì)照組，兩個(gè)基因表達(dá)增加說明參麥注射液存在改善IR的藥理作用。

目前研究顯示，不少中藥單體能夠影響糖代謝，如黃芪對(duì)醛糖還原酶有明顯抑制作用[24]。另外，葛根[25]、西洋參[26]和小檗堿[27]可以有效改善胰島素抵抗，增加胰島素的敏感性。有研究顯示，參麥注射液短期治療對(duì)2型糖尿病患者有改善胰島素抵抗作用。另外，參麥湯可能通過上調(diào)大鼠骨骼肌GLUT4 mRNA來改善胰島素抵抗[28]。在本實(shí)驗(yàn)中，使用3T3-L1前脂肪細(xì)胞構(gòu)建同時(shí)涵蓋脂肪和葡萄糖利用的IR模型，并給與參麥注射液，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，參麥注射液可以明顯改善胰島素抵抗，并且高濃度參麥注射液改善IR的效果可以接近羅格列酮。羅格列酮是臨床常用的抗糖尿病藥物，可以明顯改善胰島素抵抗。但在近年來的臨床應(yīng)用中，羅格列酮也可導(dǎo)致部分患者的液體潴留和充血性心力衰竭，其心血管的安全性也引起了國(guó)內(nèi)外藥品監(jiān)管部門的高度警惕，歐盟將其作為二線治療藥使用，美國(guó)也多次修改產(chǎn)品說明書，將心衰風(fēng)險(xiǎn)加入了黑框警告[29]。而對(duì)傳統(tǒng)中藥而言，由于經(jīng)歷了無數(shù)代人的論證而沿用至今，部分藥方被證明具有一定的安全性，如參麥注射液在臨床廣泛用于多種原因引起的心衰治療[30-31]，且罕見發(fā)生不良反應(yīng)[32]。傳統(tǒng)中藥在改善IR方面的應(yīng)用和研究尚處于起步階段，對(duì)中藥組分中部分活性成分的深入探索，可以彌補(bǔ)現(xiàn)有臨床抗糖尿病藥物的不足。

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*[基金項(xiàng)目]國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81460001)

Shenmai injection improves insulin resistance in 3T3-L1 cellsMAO Yu-shan1, CHEN Yi-chen2, ZHAO Ya-rong2, CHE Xiao-hang2, TAO Jin2, YE Xiao-lei2

(1DepartmentofEndocrinology,TheAffiliatedHospitalofNingboUniversitySchoolofMedicine,2DepartmentofDrugsandPharmacology,NingboInstituteofMedicalSciences,Ningbo315020,China.E-mail:yexiaolei@gmail.com)

[ABSTRACT]AIM: To discuss the effect of Shenmai injection on insulin resistance (IR) in 3T3-L1 cells and its mechanisms. METHODS: 3T3-L1 preadipocytes were induced by chemical reagents to differentiate into fully differentiated adipocytes. Oil red O staining was used to detect the differentiation level of the adipocytes. The insulin-resistant 3T3-L1 cell model was demonstrated using insulin, which was confirmed by glucose concentration in cell supernatant. The IR cell model was given 10 μmol/L rosiglitazone, 25 and 50 g/L Shenmai injection and normal saline for comparison. MTT assay was used to assess the cell activity of 3T3-L1 cells which was treated with drugs for 8, 16, 24 and 36 h. Glucose oxidase method was used to detect the glucose concentration in the cell supernatant at 8, 16 and 24 h. The protein levels of glucose transporter-4 (GLUT4), phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K), AKT and p-AKT were determined by Western blot. RESULTS: 3T3-L1 adipocytes were successfully induced as shown by the positive oil red O staining. The IR cell model was demonstrated, and glucose concentration in the cell supernatant after treatment with Shenmai injection showed that Shenmai injection reduced the IR in 3T3-L1 cell model. The protein levels of GLUT4, PI3K and p-AKT increased compared to control group. CONCLUSION: Shenmai injection reduces the IR in 3T3-L1 cell model, which functions by increasing the protein levels of GLUT4, PI3K and p-AKT.

[KEY WORDS]Insulin resistance; Shenmai injection; 3T3-L1 preadipocytes

通訊作者△Tel: 0433-2435165; E-mail: cuihong@ybu.edu.cn

[收稿日期]2015- 08- 06[修回日期] 2015- 09- 19

[文章編號(hào)](責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅森)1000- 4718(2015)12- 2239- 05

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.12.020

[中圖分類號(hào)]R587； R589; R363

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A