王亞男　師　偉　呂姝菡　劉好宇　劉金星

1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東　濟(jì)南　250014；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東　濟(jì)南　250014

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盆腔炎后遺癥動物模型的研究進(jìn)展

王亞男1師偉1呂姝菡1劉好宇1劉金星2*

1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟(jì)南250014；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東濟(jì)南250014

【摘要】盆腔炎性疾病后遺癥動物模型作為盆腔炎后遺癥發(fā)病機(jī)制、預(yù)防、治療、開發(fā)新藥的重要載體，在盆腔炎性疾病后遺癥的研究中發(fā)揮著極為重要的作用。筆者通過對目前SPID動物造模方法進(jìn)行總結(jié)，從手術(shù)及非手術(shù)方面對其建立的方法進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】盆腔炎性后遺癥；動物模型；研究進(jìn)展；綜述

盆腔炎性疾病后遺癥[1](sequelae of pelvic inflammatory disease,SPID)SPID)是盆腔炎性疾病未得到及時(shí)正確的診斷治療，而發(fā)生的女性上生殖道及周圍組織破壞、粘連、增生、瘢痕、積水及腫物形成等一系列的后遺癥，既往稱慢性盆腔炎?？梢鸩辉?、異位妊娠、慢性盆腔痛，常反復(fù)發(fā)作，從而嚴(yán)重影響婦女的生殖健康及生活質(zhì)量。動物模型對于全面深入系統(tǒng)的研究SPID 具有重要意義，隨著科研技術(shù)的不斷進(jìn)步發(fā)展，SPID 的造模方法也在逐漸完善，現(xiàn)總結(jié)如下。

1手術(shù)法

1.1異物置入誘發(fā)的模型將異物置入子宮體內(nèi)，可引發(fā)局部炎性反應(yīng)及機(jī)體的免疫反應(yīng)。吳虓飛等[2]將大鼠麻醉后做背部縱切口，暴露右側(cè)子宮，在卵巢下1cm處作一切口，將消毒后的塑料管放入子宮內(nèi)，并與子宮切口縫合固定，觀察子宮明顯紅腫，子宮壁增厚，較左側(cè)的子宮明顯變粗，子宮明顯腫脹，即完成造模。

1.2化學(xué)性燒傷誘發(fā)的模型目前通常采用苯酚膠漿法，因該法操作簡單，造模成功率高，因而在SPID大鼠模型中應(yīng)用較廣泛，通過苯酚對局部組織的化學(xué)性燒傷而達(dá)致炎目的，建立慢性盆腔炎動物模型。研究中常用苯酚膠漿( 苯酚、西黃芪膠、甘油加水制成或由液化苯酚、蒸餾水以及羧甲基纖維素鈉配置而成)。馬云等[3]采用一側(cè)子宮注入，麻醉大鼠后，于下腹部正中切口2cm，暴露子宮，用注射器，于子宮分岔處進(jìn)針入子宮腔內(nèi)，朝右側(cè)方向緩慢推注苯酚膠漿，術(shù)畢，逐層關(guān)腹，造模完成。呂曉軍等[4]亦采取開腹單側(cè)注入苯酚膠漿法,使子宮內(nèi)膜腔壁結(jié)構(gòu)改變，上皮細(xì)胞增生、變性及壞死，慢性炎癥細(xì)胞浸潤，造模成功。劉慶等[5]采用鹽酸致炎法，麻醉大鼠后,行剖腹術(shù),暴露子宮,向雙側(cè)宮腔注入0.3mol/L鹽酸,以管腔充盈為度,關(guān)腹。鏡下可見管壁變薄,部分上皮變性、脫落,黏膜下層充血、水腫,炎細(xì)胞浸潤,造模成功。

1.3器械損傷聯(lián)合細(xì)菌感染誘發(fā)的模型機(jī)械損傷和慢性刺激也是誘發(fā)盆腔炎的主要原因之一。流行病學(xué)研究指出[6],使用宮內(nèi)節(jié)育器者較不使用者患盆腔炎的危險(xiǎn)提高,有宮腔操作史的患盆腔炎的危險(xiǎn)率明顯增高。臨床研究者在細(xì)菌感染致炎造模方法基礎(chǔ)上加入了機(jī)械損傷這一操作，造模成功率高，故被越來越多的采納運(yùn)用。而手術(shù)法與細(xì)菌法相結(jié)合方便了模型的建立，臨床上常采用單一細(xì)菌聯(lián)合機(jī)械損傷法盆腔炎模型和混合細(xì)菌聯(lián)合機(jī)械損傷法盆腔炎模型兩種。

1.3.1單一細(xì)菌聯(lián)合機(jī)械損傷法盆腔炎模型目前臨床[7-9]多采用大腸桿菌所致大鼠慢性盆腔炎模型，造模方法是開腹后暴露并固定右側(cè)子宮,用注射器抽取大腸桿菌懸液,用機(jī)械損傷子宮內(nèi)膜組織后注入菌液，按照病理觀察指標(biāo)及積分標(biāo)準(zhǔn)評判，實(shí)驗(yàn)組與空白組指標(biāo)差異性顯著提高，造模成功。

1.3.2混合細(xì)菌聯(lián)合機(jī)械損傷法盆腔炎模型法楊林波等[10]將大鼠子宮暴露后，將混合細(xì)菌懸液(按大腸桿菌與金黃色葡萄球菌2∶1的比例)在注射器機(jī)械損傷子宮內(nèi)膜組織后注入宮腔，肉眼觀察到模型組盆腔充血，纖維組織粘連明顯，即成功制備動物模型。孫晶等[11]用烏拉坦進(jìn)行腹腔麻醉，麻醉滿意后，動物取俯臥位，固定頭和四肢于操作臺上。背部碘伏消毒，分別取雙側(cè)子宮、輸卵管、卵巢體表投射區(qū)切口，長約1cm，用眼科手術(shù)器械找出子宮，用注射器抽取混合細(xì)菌懸液(按大腸桿菌、乙型溶血性鏈球菌和金黃色葡萄球菌2∶1∶1比例)，沿輸卵管-卵巢方向于宮腔內(nèi)緩慢注射，每側(cè)注入0.1ml菌液，縫合切口處肌肉組織及皮膚，局部組織充血、水腫，提示造模成功。師偉等[12]亦使用混合菌加機(jī)械損傷造模法造模成功。

2非手術(shù)法

因臨床多數(shù)盆腔炎患者是由病原體從外生殖器上行感染所致，主要包括外源性病原體(沙眼衣原體、淋病奈瑟菌和支原體等)和內(nèi)源性病原體(需氧菌和厭氧菌)，當(dāng)女性生殖道的自然防御功能遭破壞，或機(jī)體免疫功能降低、內(nèi)分泌發(fā)生變化時(shí)，下生殖道的病原體上行，或外源性病原體侵入，均可導(dǎo)致盆腔炎發(fā)生，因而非手術(shù)即病原體下行感染所誘發(fā)的動物模型更接近人類盆腔炎。

2.1沙眼衣原體感染小鼠模型陳木開等[13]通過對小鼠陰道內(nèi)接種小鼠肺炎沙眼衣原體,21d內(nèi)輸卵管發(fā)生急性炎癥,21d后輸卵管出現(xiàn)扭曲、積水等慢性炎癥，提示造模成功。Jalal H等[14]在沙眼衣原體接種前，將小鼠皮下注射醋酸甲羥孕酮 2.5mg，實(shí)驗(yàn)組分別于陰道內(nèi)接種30μl E型Ct懸液( 約2.5×107IFU/ml) ，對照組接種 30μl SPG，空白組不做任何處理。35d后實(shí)驗(yàn)組小鼠雙側(cè)子宮增粗，呈氣球樣腫脹，質(zhì)硬，宮腔內(nèi)積膿積液，證明造模成功。韓建德等[15]通過對小鼠陰道內(nèi)接種肺炎沙眼衣原體,3周后輸卵管出現(xiàn)扭曲、阻塞、積水等慢性炎癥,提示造模成功。

2.2解脲支原體感染模型因人是支原體的唯一宿主，Taylor Robinson 等[16]發(fā)現(xiàn)用雌激素將小鼠預(yù)處理的方法，可以成功的建立生殖道解脲支原體的感染模型，而沒有經(jīng)過雌激素預(yù)處理過的小鼠，無法在生殖道完成定植。這種造模方法一直在解脲支原體研究中廣泛的借鑒、應(yīng)用。Zhu GX等[17]將小鼠用E2預(yù)處理后，在陰道注射解脲支原體懸液，3周后肉眼可見子宮及輸卵管一定程度的水腫,光鏡下觀察間質(zhì)中性粒細(xì)胞不同程度的浸潤,腺體擴(kuò)張?jiān)錾?，提示造模成功。Shkarupeta 等[18]參照 Taylor Robinson 的造模方法，用 BALB /c 小鼠建立了人型支原體感染的模型。劉弘等[19]采用雌性小鼠制模,造模前小鼠陰道分泌物解脲支原體培養(yǎng)均為陰性,然后將小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇注射液,每周1次,共4次。第二次注射后在陰道接種解脲支原體感染液,待液體被陰道載膜完全吸收后放回籠內(nèi),分籠喂養(yǎng)。每天接種1次,連續(xù)3次。1周后再加強(qiáng)接種感染液1次。造模結(jié)束后1周取小鼠陰道分泌物進(jìn)行解脲支原體液體培養(yǎng)。模型組肉眼可見輸卵管水腫,光鏡下觀察載膜層及間質(zhì)中性粒細(xì)胞的不同程度的浸潤,腺體擴(kuò)張或增生，間質(zhì)疏松水腫，提示造模成功。

2.3解脲脲原體感染小鼠模型鄭冰潔[20]在研究解脲脲原體14血清型BALB/C小鼠感染模型中發(fā)現(xiàn)，將小鼠經(jīng)雌激素預(yù)處理后經(jīng)陰道接種無菌Uu液體培養(yǎng)基及顏色改變單位濃度為1×107CCU/ml的各型標(biāo)準(zhǔn)菌液，21d后送病理，1/3/11/8以慢性炎癥為主，表現(xiàn)為漿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，宮腔腺體擴(kuò)張粘連等。為進(jìn)一步準(zhǔn)確建立盆腔炎性疾病后遺癥動物模型做了準(zhǔn)備。

2.4淋病奈瑟菌感染大鼠模型淋病奈瑟菌的唯一宿主是人類,淋病研究一直為缺乏有效的動物模型所困擾。人類細(xì)胞膜上存在多種參與淋病奈瑟菌黏附定植的特異性受體,如菌毛受體hCD46、Opa蛋白受體hCEACAM1等。因此,表達(dá)hCD46和hCEACAM1的轉(zhuǎn)基因小鼠可望成為淋病研究的理想動物模型。Jerse[21]將雌二醇緩釋藥丸植入小鼠的真皮內(nèi)，同時(shí)再注射抗生素,取淋病奈瑟菌混懸液接種于小鼠陰道內(nèi),成功建立了較好的淋病奈瑟菌小鼠感染模型,并利用該模型進(jìn)行了疫苗研究方面的深入探討。劉海鵬等[22]利用 17-β-雌二醇將小鼠預(yù)處理后,取淋病奈瑟菌混懸液用加樣槍接種于小鼠陰道內(nèi),動態(tài)監(jiān)測小鼠陰道分泌物，發(fā)現(xiàn)小鼠感染時(shí)間并不是很長，需進(jìn)一步研究。

2.5非手術(shù)化學(xué)燒傷法誘發(fā)的模型付桂香等[23]用錐形靜脈切開針，進(jìn)入陰道深部注入苯酚膠漿，模型組左側(cè)子宮內(nèi)膜腺上皮明顯增生增厚,上皮層次明顯增多,核分裂相較多見,上皮細(xì)胞有變性壞死,呈扁平狀,上皮下增生的淋巴細(xì)胞較多,成功制作了大鼠陰道及宮頸炎模型。

3小結(jié)

隨著對盆腔炎后遺癥發(fā)病機(jī)制的不斷深入研究和探討,動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ鸵嘣诓粩嗟匮葑儭Ｖ挥羞x擇與人類盆腔炎相近的感染源、感染途徑、病變特點(diǎn)的動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?才能提高動物模型與臨床疾病的一致性，進(jìn)一步較客觀地評價(jià)出藥物的療效。臨床上，盆腔炎性疾病后遺癥多是有盆腔炎性疾病未得到及時(shí)正確的診斷或治療引發(fā)的，屬于一個(gè)慢性遷延的過程，而目前，國內(nèi)絕大多數(shù)盆腔炎性后遺癥動物模型所采用的造模方法為手術(shù)聯(lián)合細(xì)菌感染或單純化學(xué)燒傷的方法，國外多采用支原體與衣原體感染所致的陰道上行感染動物模型，所復(fù)制的模型大多是在急性感染階段，并不符合盆腔炎性疾病后遺癥的病變特點(diǎn)。而下生殖道長期上行感染病原菌及手術(shù)急性感染期后的慢性遷延期，較符合臨床發(fā)病情況與診段。國內(nèi)盆腔炎性疾病后遺癥主要通過陰道上行感染需氧菌，如大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，支原體、衣原體而致的疾病，建議應(yīng)進(jìn)一步開展不同感染源陰道上行感染致炎模型的研究,如能造模成功,其藥物療效就更有針對性,治療盆腔炎后遺癥的中藥新藥的藥效學(xué)評價(jià)體系將更科學(xué)、規(guī)范和完善。

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基金項(xiàng)目：國家自然基金項(xiàng)目(81373675)；山東省基金編號(ZR2010HL063)。

作者簡介：王亞男(1990-)，女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向：中醫(yī)婦科疾病的臨床研究。 通信作者：劉金星，男，主任醫(yī)師，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：中醫(yī)婦科疾病的臨床研究，E-mail：ljx276@sina.com

【中圖分類號】R711.33

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)10-0042-02

(收稿日期：2016.03.24)