趙拴平,賈玉堂,徐 磊,阮永明

(安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，安徽 合肥 230031)

肉牛骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育分子遺傳調(diào)控研究進(jìn)展

趙拴平,賈玉堂*,徐 磊,阮永明

(安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，安徽 合肥 230031)

骨骼肌發(fā)育是肉牛生長(zhǎng)發(fā)育的重要組成部分，直接與肉牛的產(chǎn)肉力等經(jīng)濟(jì)性狀密切相關(guān)。本文總結(jié)了肉牛骨骼肌發(fā)育過(guò)程中的發(fā)揮重要作用的基因、miRNA以及表觀修飾作用，對(duì)影響肉牛肌肉發(fā)育的關(guān)鍵因子進(jìn)行了系統(tǒng)的分析，為牛肉質(zhì)性狀的分子改良提供新的思路。

牛；骨骼?。蝗赓|(zhì)性狀

骨骼肌是動(dòng)物軀體最重要的組成部分，占到產(chǎn)肉動(dòng)物軀體的40%，直接與動(dòng)物的產(chǎn)肉力密切相關(guān)。牛骨骼肌的發(fā)育包括出生前肌纖維數(shù)量的增加和出生后肌纖維體積的增大，即肌細(xì)胞的形成和增殖、肌管和肌纖維的形成以及成熟四個(gè)步驟。牛胚胎期大量肌纖維的形成主要發(fā)生在2-8月齡[1]，出生后肌纖維數(shù)量停止增加，肌肉發(fā)育主要表現(xiàn)為肌纖維體積增大[2]。在骨骼肌的生成過(guò)程中，許多調(diào)節(jié)因子包括細(xì)胞信號(hào)分子、轉(zhuǎn)錄因子、miRNAs 等以復(fù)雜多變的方式進(jìn)行組合，形成復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，在肌肉發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

1 基因?qū)θ馀９趋兰∩L(zhǎng)發(fā)育的分子遺傳調(diào)控

1.1 Pax基因家族

Pax基因普遍存在于各種生物中，參與胚胎發(fā)生過(guò)程中各種細(xì)胞的發(fā)育和分化[3]。其中，調(diào)控肌肉發(fā)育的Pax基因主要包括Pax3與Pax7，Pax3是肌肉發(fā)育的上游調(diào)控基因，是早期肌肉發(fā)育所必需的基因[4]，Pax7基因參與脊椎動(dòng)物的早期胚胎發(fā)育和后期肌肉生長(zhǎng)、再生和修復(fù)過(guò)程，表達(dá)過(guò)量會(huì)使肌細(xì)胞延緩分化而過(guò)度增殖，表達(dá)過(guò)低會(huì)使肌細(xì)胞過(guò)早分化而影響正常的生命進(jìn)程[5-7]。研究發(fā)現(xiàn)，Pax7基因通過(guò)Wnt信號(hào)通路調(diào)控肌細(xì)胞決定因子(Myod)和肌細(xì)胞生成因子5(Myf5)而調(diào)控肌肉的形成，其外顯子3的突變與中國(guó)黃牛的體重和日增重顯著相關(guān)[8]。通過(guò)分析西門塔爾牛在胎兒(100 天)、12 月齡、24月齡、36月齡的腿肌組織，發(fā)現(xiàn)Pax3 和 Pax7 基因在胎兒期的表達(dá)量均顯著地高于其他時(shí)期(P<0.05)[9]，進(jìn)一步驗(yàn)證了Pax基因參與牛骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育。

1.2 MRFs基因

肌調(diào)節(jié)因子MRFs(Myf-5、MyoD、myogenin和Mrf4基因)在哺乳動(dòng)物早期骨骼肌發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用。MyoD基因在成肌相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮總開(kāi)關(guān)的功能，可促進(jìn)成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等向骨骼肌細(xì)胞進(jìn)行分化，在細(xì)胞周期G0期不表達(dá)，在G1期和S、M期高表達(dá)，可以通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞周期蛋白酶抑制因子p21和細(xì)胞周期蛋白D3而終止細(xì)胞周期；Myf5基因在肌肉的形成過(guò)程中與肌纖維的數(shù)目和大小有密切關(guān)系，能夠誘導(dǎo)多個(gè)成肌信號(hào)途徑的發(fā)生，在G0期高表達(dá)，是肌原細(xì)胞定向分化的必需因子[10]；Myogenin和Mrf4在成肌細(xì)胞終端分化過(guò)程中發(fā)揮重要作用，MyoG可調(diào)控成肌細(xì)胞融合的起始，促進(jìn)成肌細(xì)胞增殖，使單核的成肌細(xì)胞變?yōu)槎嗪说募±w維。Mrf4在脊椎動(dòng)物胚胎發(fā)育骨骼肌發(fā)生過(guò)程中可以與靶基因啟動(dòng)子和增強(qiáng)子結(jié)合，促進(jìn)肌特異基因的表達(dá)而激發(fā)生肌作用[11]。在牛肌衛(wèi)星細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，Myf5首先表達(dá),之后MyoD和MyoG幾乎同時(shí)表達(dá),最后當(dāng)肌管成熟時(shí)Myf6 表達(dá)。通過(guò)分析魯西牛、晉南牛、秦川牛和夏洛萊×魯西牛、安格斯×魯西牛、利木贊×魯西牛、西門塔爾×魯西牛雜交牛群體 MyoD基因的多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)MyoD 基因第二內(nèi)含子SNP多態(tài)性與肉牛的體高、胴體長(zhǎng)、宰前活重、凈肉重、胴體重、眼肌面積、高檔肉重、腰部肉厚和大腿肉厚極顯著或顯著相關(guān)[12]。通過(guò)分析7個(gè)牛品種MRFs 家族4個(gè)基因的多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)MyoD基因g.1274A >G突變和Myf5基因的g.1911A >G突變均與活重和胴體重顯著相關(guān),而MyoG中的g.1111C>G突變僅與活重顯著相關(guān)[13]。Myf5基因g.723G>T突變與荷斯坦×黑白花雜交牛背部瘦肉重及脂肪重相關(guān)[14]。

1.3 Myostatin基因

MSTN(Myostatin)基因，名為肌肉生長(zhǎng)抑制素、生長(zhǎng)分化因子8(GDF-8)，是TGF-β超家族成員之一，最初于1997年美國(guó)約翰霍普金斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院發(fā)現(xiàn)[15]。MSTN基因作為肌肉特異性的生長(zhǎng)抑制因子，是肌肉發(fā)育的關(guān)鍵基因，參與調(diào)控骨骼肌的生長(zhǎng)發(fā)育。研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)MSTN基因后，成肌細(xì)胞分化過(guò)程中G0/G1期的細(xì)胞數(shù)量減少，多核肌管的形成受到抑制[16-17]。在牛肌肉發(fā)育過(guò)程中， MSTN基因的變異導(dǎo)致比利時(shí)藍(lán)牛和皮埃蒙特牛的雙肌表型[18]，比利時(shí)藍(lán)牛雙肌牛外顯子3發(fā)生移碼突變，使得缺失后的第14個(gè)密碼子無(wú)法正常翻譯，進(jìn)而使翻譯的蛋白不能發(fā)揮其正常的生物學(xué)功能。皮埃蒙特雙肌牛MSTN基因外顯子3發(fā)生突變位點(diǎn)，導(dǎo)致半胱氨酸突變?yōu)槔野彼?，外顯子1發(fā)生突變?cè)斐闪涟彼嵬蛔優(yōu)楸奖彼?。MSTN基因的突變?cè)斐呻p肌牛比普通牛肌肉增加 20 %～25 %，進(jìn)而引起牛胴體重、屠宰重、眼肌面積等相關(guān)性狀的顯著增加，但功能缺失性突變后的個(gè)體抵抗力、個(gè)體脂肪含量、肌內(nèi)脂肪含量和大理石花紋等級(jí)顯著低于正常牛[19]。

2 miRNAs對(duì)肉牛骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控

MicroRNAs (miRNAs，微小RNA)是一類進(jìn)化保守的大小為18～25 bp的非編碼小分子RNA，廣泛存在于多細(xì)胞動(dòng)物中，可以通過(guò)與靶基因mRNA的3′-UTR (非編碼區(qū))結(jié)合導(dǎo)致mRNA降解，或阻斷mRNA翻譯而調(diào)節(jié)基因表達(dá)。在哺乳動(dòng)物多個(gè)組織器官的發(fā)育過(guò)程中，一個(gè)miRNA通常調(diào)節(jié)多個(gè)靶基因的表達(dá)，一個(gè)基因同時(shí)受多個(gè)miRNAs調(diào)控，從而形成復(fù)雜的反饋調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)。人、小鼠等體外細(xì)胞模型研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs在哺乳動(dòng)物肌肉發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用[20-21]。

MiRNAs作為一類重要的調(diào)節(jié)因子，在牛生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。Bta-miR-1/-206通過(guò)下調(diào)靶基因Pax7和HDAC4，使肌分化因子MyoD/MyoG和轉(zhuǎn)錄因子MEF2基因的表達(dá)量升高(Pax7基因能夠抑制MyoD/MyoG基因的表達(dá)，HDAC4基因能夠抑制MEF2基因的表達(dá))，進(jìn)而促進(jìn)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分化[22]。MiR-1家族成員 (bta-miR-1/-206)和miR-let-7家族成員(bta-let-7f/-7a-5p/-7b/-7c)在秦川牛胎牛(妊娠90天和200天)和出生后5日齡、12月齡和48月齡的秦川牛骨骼肌中高表達(dá)，bta-mir-10020通過(guò)調(diào)控ANGPT1(血管生成素1，angiopoietin 1)基因促進(jìn)牛骨骼肌發(fā)育進(jìn)程[23-24]。Bta-miR-378/-143/-133a/-30d在日本黑?？炻〖∪饨M織中高表達(dá)，提示其可能在牛肌肉發(fā)育中發(fā)揮重要作用[25]。皮埃蒙特牛是具有雙肌肉表型的意大利牛種，miR-27b通過(guò)下調(diào)MSTN基因的表達(dá)參與皮埃蒙特牛雙肌表型的調(diào)控機(jī)制[26]。

3 表觀遺傳對(duì)肉牛骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控

表觀遺傳是指DNA序列不發(fā)生變化，但基因表達(dá)卻發(fā)生可遺傳改變的現(xiàn)象，其根本原因是由環(huán)境因素引起的生物細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)的變化結(jié)果，主要包括DNA甲基化、組蛋白修 飾、非編碼RNA作用等。DNA 高度甲基化會(huì)影響DNA結(jié)構(gòu)，進(jìn)而阻遏基因轉(zhuǎn)錄，引起基因沉默。在生物體內(nèi)，DNA甲基化具有重要的生理意義，正常的甲基化對(duì)于維持細(xì)胞的生長(zhǎng)及代謝如維持染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育等是必需的。異常的DNA甲基化則會(huì)引發(fā)基因結(jié)構(gòu)變異進(jìn)而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。組蛋白修飾是表觀遺傳修飾的重要方式，通過(guò)甲基化、乙?；?、磷酸化等修飾，一些蛋白失去活性，一些蛋白獲得活性，一些蛋白改變功能。研究證明組蛋白修飾是由組蛋白去甲基化酶、組蛋白脫乙?；浮⒔M蛋白磷酸酶和組蛋白去泛素化酶催化反應(yīng)形成，是一個(gè)動(dòng)態(tài)可逆的過(guò)程。

目前，關(guān)于肉牛骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育表觀遺傳研究相對(duì)較少。Huang等[27]利用MeDIP-Seq技術(shù)分析了秦川牛不同發(fā)育時(shí)期(胎兒和成年)肌肉組織基因組DNA 甲基化圖譜，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DNA甲基化修飾程度和其對(duì)應(yīng)的基因的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。IGF2基因作為一種調(diào)控因子，在肌肉生長(zhǎng)發(fā)育和肌細(xì)胞的增殖分化中發(fā)揮重要作用，研究發(fā)現(xiàn)，秦川牛成年牛肌肉組織中IGF2基因DNA甲基化水平顯著高于胎牛肌肉組織[28]。 肌球蛋白輕鏈(MyLC2)的磷酸化影響牛屠宰后背最長(zhǎng)肌的硬度[29]。

4 小結(jié)

骨骼肌發(fā)育是肉牛生長(zhǎng)發(fā)育的重要組成部分，直接與肉牛的產(chǎn)肉力等經(jīng)濟(jì)性狀密切相關(guān)。目前，肉牛骨骼肌發(fā)育研究主要以肌細(xì)胞為載體，研究細(xì)胞增殖分化過(guò)程中各種轉(zhuǎn)錄因子、小RNA以及表觀修飾等作用，盡管大量的基因、miRNAs在肉牛骨骼肌發(fā)育中的作用得到鑒定，但其具體的調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步探究。探究并闡明各種調(diào)節(jié)因子在肉牛骨骼肌發(fā)育中的調(diào)控機(jī)理將為肉質(zhì)性狀的分子改良提供新的思路。

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Research Progress on Molecular Genetic regulation of Skeletal Muscle Growth and Development in Beef Cattle

ZHAO Shuan-ping,JIA Yu-tang,XU Lei,RUAN Yong-ming

(InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryResearch,AnhuiAcademyofAgriculturalSciences,Hefei, 230031,China)

Muscle development is an important part of bovine growth performance; it is closely related to the economic traits such as meat productivity. This article comprehensively reviewed the genes, miRNAs and epigenetic modification, which play important roles in bovine skeletal muscle growth and development. In the meantime, the key factors were analyzed systematically, to provide new ideas for improving beef quality traits.

beef cattle; skeletal muscle; meat quality trait

2016-06-20

2016-06-28

國(guó)家肉牛牦牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系——合肥綜合試驗(yàn)站(CARS-38)，安徽省科技攻關(guān)項(xiàng)目(1501031089)。

趙拴平(1984-)，女，山西長(zhǎng)治人，博士，助理研究員，主要從事肉牛分子育種工作。

S823

A

1001-9111(2016)06-0057-04

*通訊作者：賈玉堂(1962- )，男，副研究員，主要從事草食動(dòng)物遺傳育種工作。