齊　磊，　段永剛,△，　丁英奇，　張　龍，　劉玉章，　唐曉龍，　伍　驥

(1陜西省中醫(yī)醫(yī)院骨科，陜西 西安 710003； 2河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院骨外科，河北 張家口 075100； 3中國(guó)人民解放軍空軍總醫(yī)院骨科，北京 100142)

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Notch-1下調(diào)對(duì)雙氫青蒿素抗人骨肉瘤細(xì)胞株U-2OS存活率的影響*

齊磊1，段永剛1,2△，丁英奇2，張龍2，劉玉章2，唐曉龍2，伍驥3

(1陜西省中醫(yī)醫(yī)院骨科，陜西 西安 710003；2河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院骨外科，河北 張家口 075100；3中國(guó)人民解放軍空軍總醫(yī)院骨科，北京 100142)

[摘要]目的： 探討Notch-1下調(diào)對(duì)雙氫青蒿素抗人骨肉瘤細(xì)胞株U-2OS細(xì)胞存活率的影響及其作用機(jī)制。方法: 雙氫青蒿素(5、10、15和20 μmol/L)孵育U-2OS細(xì)胞后，采用免疫印跡和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞中Notch-1、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和Notch-1通路下游基因Hes-1的蛋白和mRNA的表達(dá)水平。下調(diào)Notch-1表達(dá)后，采用MTT法、免疫印跡法和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)在雙氫青蒿素作用下U-2OS細(xì)胞的存活率，MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表達(dá)以及U-2OS細(xì)胞的遷移能力。結(jié)果: 免疫印跡法與逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)果顯示雙氫青蒿素呈劑量依賴性降低U-2OS細(xì)胞中Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白和mRNA的表達(dá)水平(P<0.05)；下調(diào)Notch-1表達(dá)后，增強(qiáng)了雙氫青蒿素抑制U-2OS細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表達(dá)及細(xì)胞遷移能力進(jìn)一步降低，顯著低于加藥組(P<0.05)。結(jié)論: 雙氫青蒿素可抑制U-2OS細(xì)胞中Notch-1通路的活性；下調(diào)Notch-1的表達(dá)可增強(qiáng)雙氫青蒿素抗骨肉瘤的作用。

[關(guān)鍵詞]Notch-1； 雙氫青蒿素； 人骨肉瘤細(xì)胞株U-2OS； 細(xì)胞存活率

骨肉瘤是一種多發(fā)病于兒童，成人常見(jiàn)，非血液性的惡性腫瘤，尤其在兒童中具有很高的發(fā)病率。其顯著特點(diǎn)是具有較高的肺轉(zhuǎn)移率(約為 10%～20%)和復(fù)發(fā)率。目前，骨肉瘤的臨床治療仍存在一定的困難，如化療藥物的毒副作用、耐藥性的出現(xiàn)、病情復(fù)發(fā)及腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移肺部等。通過(guò)化療或手術(shù)治療后，獲得痊愈的患者也很少。隨著以手術(shù)為主，化療以及區(qū)域性介入化療為輔，聯(lián)合放療、基因、免疫、生物、中藥治療等多程式的治療方案的出現(xiàn)，使患者5年生存率大大提高，由20%升至60%～70%[1]。研究顯示，Notch-1信號(hào)通路在腫瘤細(xì)胞增殖、分化中起重要作用[2]。有研究報(bào)道指出，Notch-1分子在胰腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌以及骨肉瘤等多種癌癥細(xì)胞組織中呈高表達(dá)[3-4]，且在骨肉瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。抑制骨肉瘤細(xì)胞中Notch-1信號(hào)通路，其侵襲轉(zhuǎn)移能力明顯降低[5]。已知基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)與Notch-1信號(hào)之間存在相互作用，而Hes-1為Notch-1通路的下游信號(hào)分子，在體內(nèi)外抑制多種細(xì)胞的發(fā)育分化，Notch-1通路在多種細(xì)胞中主要通過(guò)Hes-1發(fā)揮作用。

青蒿素是一種含過(guò)氧基團(tuán)的倍半萜內(nèi)酯類化合物，具有多種衍生物[6]。對(duì)瘧原蟲(chóng)有強(qiáng)大且迅速的殺滅作用，被推薦為以青蒿素為主體的聯(lián)合治療，對(duì)抗瘧疾取得良好的效果。青蒿素類藥物被人體吸收后，主要轉(zhuǎn)化為雙氫青蒿素(dihydroartemisinin，DHA)來(lái)發(fā)揮藥理作用。雙氫青蒿素以其高效、低毒的抗瘧疾作用，除被廣泛應(yīng)用于治療瘧疾外，近十多年來(lái)發(fā)現(xiàn)雙氫青蒿素還具有抗腫瘤、治療血吸蟲(chóng)病、提高生物體免疫力等功效。已有研究表明雙氫青蒿素能有效地抑制人骨肉瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移侵襲，且能促進(jìn)其凋亡，能明顯地抑制人骨肉瘤細(xì)胞生存活力和克隆形成[7]。劉朝霞等[8]研究發(fā)現(xiàn)雙氫青蒿素能抑制卵巢癌Skov3細(xì)胞的增殖，能夠下調(diào)Skov3細(xì)胞中的Notch的表達(dá)，其機(jī)制可能是通過(guò)下調(diào)Notch1信號(hào)傳導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的。但尚未有雙氫青蒿素在骨肉瘤方面的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究Notch-1通路對(duì)雙氫青蒿素抗人骨肉瘤細(xì)胞株U-2OS細(xì)胞的影響，探討其作用機(jī)制。

材料和方法

1材料與試劑

人肉骨瘤U-2OS細(xì)胞株購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海生物細(xì)胞研究所；RPMI-1640和DMEM培養(yǎng)基購(gòu)于美國(guó)Life Technologies；LipofectamineTM2000，SYBR Green qPCR試劑盒購(gòu)于Invitrogen；靶向Notch-1基因的2對(duì)siRNA寡核苷酸(S1和S2)購(gòu)于Ambion, S1正義鏈為5’-GAUUCUGAUUCGCCAACCGATT-3’，反義鏈5’-UCGGUUGCGAAUCAGAAUCTG -3’；S2正義鏈為5’-GAUGUAACAUUGACAUUGATT-3’，反義鏈5’-UCAAUGUCAAUGUUACAUCTC-3’；Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1抗體購(gòu)于Santa Cruz；雙氫青蒿素購(gòu)于南京澤郎醫(yī)藥科技有限公司；MTT試劑購(gòu)于Sigma；Transfer小室購(gòu)于Chemicon；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2細(xì)胞培養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)分組及其干預(yù)

將人骨肉瘤U-2OS細(xì)胞株置于含10% 胎牛血清、1×105U/L青霉素、100 mg/L鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng)，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每1～2 d用0.25%胰酶消化傳代1次。

本實(shí)驗(yàn)按下列兩種情況分組：(1)分為空白對(duì)照(control，Con)組和不同濃度(5、10、15和20 μmol/L)雙氫青蒿素溶液孵育U-2OS細(xì)胞24 h組。(2)分5組：空白對(duì)照組；DHA組；陰性對(duì)照(NC+DHA)組，加入非特異性siRNA；S1+ DHA和S2+ DHA組，分別加入轉(zhuǎn)染了靶向Notch-1基因的兩對(duì)siRNA序列S1和S2，轉(zhuǎn)染結(jié)束后，向除空白組外的細(xì)胞中加入15 μmol/L雙氫青蒿素溶液分別孵育12 h、24 h、36 h和48 h。

3實(shí)驗(yàn)方法

3.1細(xì)胞轉(zhuǎn)染按LipofectamineTM2000說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的U-2OS細(xì)胞，用0.25%胰酶消化，采用血球計(jì)數(shù)板技術(shù)，加入RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為1×108/L。取2 mL接種于6孔板，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞融合至70%左右，將2組siRNA溶于無(wú)血清RPMI-1640培養(yǎng)基中，加入LipofectamineTM2000，輕輕混合均勻，室溫靜置30 min，形成復(fù)合體后置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，4 h后去掉轉(zhuǎn)染液，改用正常細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h。以同樣方式轉(zhuǎn)染空載體與非特異性siRNA。

3.2Western blotting法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平取各組細(xì)胞棄去培養(yǎng)液，PBS洗滌3次，提取細(xì)胞蛋白并定量。取適量裂解產(chǎn)物，以1∶4比例加入樣品與緩沖液，進(jìn)行SDS-PAGE，電泳完成后將蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，用脫脂牛奶室溫封閉1 h，加入相應(yīng) I 抗于4 ℃孵育4 h，TBST洗滌20 min；加入相應(yīng) II 抗于室溫孵育1 h，TBST洗滌20 min；顯色，成像掃描分析系統(tǒng)保存圖像。

3.3Real-time PCR檢測(cè)相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平按TRIzol說(shuō)明書(shū)提取總RNA，催化逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，運(yùn)用SYBR Green qPCR試劑盒，檢測(cè)相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平。引物序列見(jiàn)表1。反應(yīng)條件為 95 ℃ 30 s；60 ℃ 90 s， 64 ℃ 30 s，共30個(gè)循環(huán)；72 ℃ 7 min。

表1　引物序列

F: forward; R: reverse.

3.4MTT法檢測(cè)U-2OS細(xì)胞存活率選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的U-2OS細(xì)胞，制備為細(xì)胞懸液，接種于96孔板，調(diào)整使得密度每孔5×103個(gè)，分別于12 h、24 h、36 h和48 h加入MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，吸去培養(yǎng)液，每孔加入DMSO 100 μL，振蕩10 min，用酶標(biāo)儀于488 nm處檢測(cè)吸光度值，并計(jì)算存活率，存活率(%)=(加藥孔吸光度值/空白對(duì)照組吸光度值)×100%。

3.5下調(diào)Notch-1表達(dá)后，檢測(cè)U-2OS細(xì)胞的遷移能力將細(xì)胞置于無(wú)血清DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)，稀釋濃度為1×108/L；每Transwell小室的上室加入100 μL細(xì)胞懸液，下室加入300 μL完全培養(yǎng)基，孵育24 h。生理鹽水漂洗，甲醛固定30 min，結(jié)晶紫染色，倒置顯微鏡下拍照，選取3個(gè)視野計(jì)數(shù)。

4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

全部數(shù)據(jù)采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，組間差異采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，采用Bonferroni校正的t檢驗(yàn)對(duì)兩兩樣本間均數(shù)進(jìn)行比較；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1雙氫青蒿素抑制U-2OS細(xì)胞中Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表達(dá)

DHA組中Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表達(dá)降低，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示雙氫青蒿素能抑制U-2OS細(xì)胞中Notch-1信號(hào)通路的活性，且其抑制作用具有劑量依賴性，見(jiàn)圖1。

Figure 1.The effects of dihydroartemisinin on the protein expression of Notch1, MMP-2, MMP-9 and Hes-1 in U-2OS cells. Mean±SD.n=6.*P<0.05vscontrol group.

圖1U-2OS細(xì)胞中Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表達(dá)

2雙氫青蒿素抑制U-2OS細(xì)胞中Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的mRNA表達(dá)

U-2OS細(xì)胞經(jīng)過(guò)5、10、15和20 μmol/L雙氫青蒿素溶液孵育24 h后，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組中Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的mRNA表達(dá)明顯降低(P<0.05)，見(jiàn)表2，結(jié)果與免疫印跡法一致，提示雙氫青蒿素呈劑量依賴性抑制Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的mRNA表達(dá)，表明雙氫青蒿素的抗骨肉瘤作用與Notch-1通路有關(guān)。

表2U-2OS細(xì)胞中Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1 mRNA的表達(dá)

Table 2.The effects of dihydroartemisinin on the mRNA expression of Notch-1, MMP-2, MMP-9 and Hes-1 in U-2OS cells (Mean±SD.n=6)

DHA(μmol/L)Notch-1MMP-2MMP-9Hes-101.00±0.001.00±0.001.00±0.001.00±0.0050.78±0.05*0.81±0.06*0.83±0.04*0.85±0.05*100.49±0.03*0.42±0.04*0.50±0.03*0.45±0.04*150.22±0.02*0.19±0.02*0.24±0.02*0.18±0.02*200.21±0.02*0.20±0.01*0.23±0.02*0.17±0.02*

*P<0.05vs0 μmol/L.

3MTT法測(cè)定U-2OS細(xì)胞存活率

下調(diào)Notch-1的表達(dá)后，15 μmol/L雙氫青蒿素溶液孵育U-2OS細(xì)胞，并采用MTT法在各時(shí)點(diǎn)處檢測(cè)各組細(xì)胞的存活率。結(jié)果顯示48 h后，DHA組的存活率顯著低于空白對(duì)照組，而S1與S2轉(zhuǎn)染組的存活率進(jìn)一步降低(P<0.05)。加藥組與陰性對(duì)照組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖2。這提示下調(diào)Notch-1表達(dá)可增加雙氫青蒿素對(duì)U-2OS細(xì)胞活力的抑制作用。

Figure 2.Knockdown ofNotch-1 augmented dihydroartemisinin-induced decrease in viability of U-2OS cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsDHA group.

圖2下調(diào)Notch-1的表達(dá)對(duì)雙氫青蒿素抑制U-2OS細(xì)胞存活率的影響

4下調(diào)Notch-1表達(dá)后U-2OS細(xì)胞中MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表達(dá)

在雙青蒿素(15 μmol/L)下調(diào)MMP-2、MMP-9和Hes-1的基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步下調(diào)Notch-1表達(dá)，并以15 μmol/L雙氫青蒿素溶液孵育細(xì)胞24 h后，觀察以上蛋白的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)S1和S2轉(zhuǎn)染組的U-2OS細(xì)胞中MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表達(dá)與DHA組相比顯著降低(P<0.05)，而DHA組與陰性對(duì)照組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖3，提示下調(diào)Notch-1表達(dá)可進(jìn)一步降低MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表達(dá)水平。

Figure 3.Knockdown ofNotch-1 enhanced dihydroartemisinin-induced decrease in the protein expression of MMP-2, MMP-9 and Hes-1 in U-2OS cells. Mean±SD. n=6.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsDHA group.

圖3下調(diào)Notch-1表達(dá)對(duì)U-2OS細(xì)胞中MMP-2、MMP-9和Hes-1蛋白表達(dá)的影響

5細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)

Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，15 μmol/L雙氫青蒿素孵育U-2OS細(xì)胞24 h后，細(xì)胞遷移數(shù)明顯減少(P<0.05)；在此基礎(chǔ)上下調(diào)Notch-1表達(dá)后，S1和S2轉(zhuǎn)染組中細(xì)胞的遷移數(shù)與DHA組相比顯著減少(P<0.05)。DHA組與陰性對(duì)照組相比細(xì)胞遷移數(shù)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖4。結(jié)果表明下調(diào)Notch-1表達(dá)能增強(qiáng)雙氫青蒿素抑制U-2OS細(xì)胞遷移的能力。

Figure 4.The effect ofNotch-1 knockdown on the cell migration in the presence of dihydroartemisinin (×200). Mean±SD.n=6.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsDHA group.

圖4下調(diào)Notch-1表達(dá)后的Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果

討論

骨肉瘤為骨外科中常見(jiàn)的好發(fā)于兒童和青少年的原發(fā)性惡性骨腫瘤，具有早期遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移和高度局部復(fù)發(fā)傾向[7]。盡管近年來(lái)以外科手術(shù)輔助化療的治療措施上取得了較大進(jìn)展，但患者的死亡率仍居高不下，最主要原因之一就是骨肉瘤很容易復(fù)發(fā)并迅速轉(zhuǎn)移。目前臨床上用于治療骨肉瘤的藥物大多毒副作用大，療效較差[10]。因此，近年來(lái)尋覓一種新的安全有效的治療方法成為骨肉瘤治療的研究熱點(diǎn)之一，對(duì)于提高患者的生存具有非常重要的意義。

青蒿素的早期研究主要是針對(duì)其高效的抗瘧疾活性。多種青蒿素衍生物中以雙氫青蒿素的水溶性良好，毒副作用最小。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)雙氫青蒿素在抗腫瘤活性方面具有療效強(qiáng)，且對(duì)正常組織細(xì)胞的毒性很低。Notch受體是一組高度保守的跨膜蛋白，與細(xì)胞的增殖、分化及凋亡具有密切關(guān)系。研究表明基質(zhì)金屬蛋白酶與Notch-1通路的信號(hào)有關(guān)，MMPs是一類鋅依賴性的蛋白水解酶，與腫瘤遷移轉(zhuǎn)移及血管重塑密切相關(guān)，MMP-2與MMP-9是家族中的一員[8, 11-12]。Hes-1作為Notch-1通路下游的靶基因，在Notch-1通路中起重要作用。本研究通過(guò)采用siRNA轉(zhuǎn)染人骨肉瘤U-2OS細(xì)胞，探討雙氫青蒿素抗骨肉瘤的作用及其相關(guān)機(jī)制。免疫印跡法和real-time PCR檢測(cè)結(jié)果表明雙氫青蒿素呈濃度依賴性抑制U-2OS細(xì)胞中Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白和mRNA的表達(dá)。提示雙氫青蒿素抗骨肉瘤作用與Notch-1通路的活性有關(guān)。

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在15 μmol/L與20 μmol/L的雙氫青蒿素作用下，Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)沒(méi)有明顯差異，因此在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中采用15 μmol/L的濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。下調(diào)Notch-1的表達(dá)后，MTT法檢測(cè)結(jié)果表明雙氫青蒿素能顯著抑制U-2OS細(xì)胞的生長(zhǎng)，表明下調(diào)Notch-1能增強(qiáng)雙氫青蒿素抑制U-2OS細(xì)胞的生長(zhǎng)能力。另通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)轉(zhuǎn)染siRNA并采用雙氫青蒿素孵育24 h后，U-2OS細(xì)胞中MMP-2、MMP9和Hes-1的蛋白表達(dá)水平明顯降低，與加藥組相比具有顯著差異。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)，下調(diào)Notch-1表達(dá)后，雙氫青蒿素對(duì)U-2OS細(xì)胞活力的抑制作用增強(qiáng)，以及抗骨肉瘤作用也增強(qiáng)。再者，Transwell遷移實(shí)驗(yàn)證明，下調(diào)Notch-1表達(dá)后，在雙氫青蒿素作用下，U-2OS細(xì)胞的遷移能力明顯減弱。

綜上所述，雙氫青蒿素抗骨肉瘤的作用機(jī)制與Notch-1通路密切相關(guān)，提示下調(diào)Notch-1的表達(dá)可增強(qiáng)雙氫青蒿素的抗骨肉瘤作用。

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅森)

*[基金項(xiàng)目]國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81173372; No. 81101797)

Knockdown ofNotch-1 augments inhibitory effect of dihydroartemisinin on viability of human osteosarcoma cell line U-2OSQI Lei1, DUAN Yong-gang1, 2, DING Ying-qi2, ZHANG Long2, LIU Yu-zhang2, TANG Xiao-long2, WU Ji3

(1DepartmentofOrthopedics,ShanxiProvinceHospitalofTCM,Xi’an710003,China;2DepartmentofOrthopedicSurgery,TheSecondHospitalAffiliatedtoHebeiNorthUniversity,Zhangjiakou075100,China;3DepartmentofOrthopedics,AirForceGeneralHospitalofPLA,Beijing100142,China.E-mail:drduanyonggang@126.com)

[ABSTRACT]AIM: To investigate the effect of Notch-1 knockdown on the growth of dihydroartemisinin-inhibited human osteosarcoma cell line U-2OS. METHODS: U-2OS cells treated with different concentrations of dihydroartemisinin (5, 10, 15 and 20 μmol/L) were collected. The expression of Notch-1, MMP-2, MMP-9 and Hes-1 at mRNA and protein levels was measured by real-time PCR and Western blotting, respectively. U-2OS cells were transfected with Notch-1 siRNA for 24 h and incubated with dihydroartemisinin for another 24 h. The cell apoptotic rate, protein expression of MMP-2, MMP-9 and Hes-1, and the migration ability were measured by MTT assay, Western blotting and Transwell experiment, respectively. RESULTS: Dihydroartemisinin (5, 10, 15 and 20 μmol/L) decreased the expression of Notch-1, MMP-2, MMP-9 and Hes-1 at mRNA and protein levels in a dose-dependent manner. Down-regulation of Notch-1 significantly enhanced the effect of dihydroartemisinin on the cell apoptosis, the protein expression of MMP-2, MMP-9 and Hes-1, and migration ability (P<0.05). CONCLUSION: Notch-1 pathway is involved in the process of dihydroartemisinin-inhibited U-2OS cell growth. Knockdown of Notch-1 augments the inhibitory effect of dihydroartemisinin on U-2OS cell viability.

[KEY WORDS]Notch-1; Dihydroartemisinin; Human osteosarcoma cell line U-2OS; Cell viability

通訊作者△Tel: 0377-61660213; E-mail：huishuang1976@163.com

[收稿日期]2015- 05- 12[修回日期] 2015- 09- 24

[文章編號(hào)]1000- 4718(2015)12- 2126- 04

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.12.002

[中圖分類號(hào)]R362

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A