吳群

(山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院， 山東 濟(jì)南 250011)

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多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)三七片的質(zhì)量

吳群

(山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院， 山東 濟(jì)南 250011)

摘要：用多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)法評(píng)價(jià)12個(gè)廠家生產(chǎn)的三七片的質(zhì)量。采用熱浸法、紫外分光光度法和高效液相色譜法，分別測(cè)定各廠家三七片的醇浸出物、總皂苷、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量。獲得了各樣品中5個(gè)指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果，并換算出各樣品的綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)Y值，發(fā)現(xiàn)Y值存在明顯差異。研究結(jié)果表明，不同廠家生產(chǎn)的三七片質(zhì)量有差異，用多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)法，可以比較全面地評(píng)價(jià)三七片的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：綜合評(píng)價(jià)法；三七片；醇浸出物；總皂苷；人參皂苷

三七為五加科植物三七(Panaxnotoginseng(BurK.)F.H.Chen)的干燥根和根莖，主產(chǎn)于云南、廣西等地，野生或栽培。其性甘、微苦、溫，主入肝、胃、大腸經(jīng)，具有散疲止血、消腫定痛的功效[1-3]，其中達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜類皂苷被認(rèn)為是三七的主要生理活性成分之一。三七片以三七粉碎成細(xì)粉, 加適量輔料, 制成顆粒, 壓片即得[1]。三七片生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，其原材料的優(yōu)劣嚴(yán)重影響制劑的療效，市場(chǎng)上三七片質(zhì)量和價(jià)格差異較大。目前，三七片的質(zhì)量控制方法主要是采用高效液相色譜法[4-5]測(cè)定3種主要皂苷的含量，難以全面反應(yīng)三七片的質(zhì)量特點(diǎn)，有關(guān)市場(chǎng)上銷售的三七片質(zhì)量狀況的相關(guān)文獻(xiàn)未見(jiàn)報(bào)道。為此，本研究參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，采用熱浸法、紫外分光光度法[6-7]和高效液相色譜法，選取醇浸出物、總皂苷、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R15個(gè)指標(biāo)來(lái)綜合評(píng)價(jià)三七片的質(zhì)量，并用于對(duì)12個(gè)廠家生產(chǎn)的三七片的質(zhì)量評(píng)價(jià)，為全面控制三七片的質(zhì)量提供方法和數(shù)據(jù)支持。

1 材料與儀器

1.1材料

甲醇(色譜純，天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)；乙腈(色譜純，美國(guó)天地有限公司)；實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q 超純水(18 MΩ)，其余試劑為分析純。

對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所)：三七皂苷R1(批號(hào)110745-200415)；人參皂苷Rg1(批號(hào)11703-200726)；人參皂苷Rb1(批號(hào)11704-200420)；三七對(duì)照藥材(批號(hào)120941-200506)。樣品三七片來(lái)源信息見(jiàn)表1。

表1　三七樣品來(lái)源

1.2儀器

Waters 515-717-2487高效液相色譜儀，600自動(dòng)進(jìn)樣器，Waters-996二極管陣列檢測(cè)器，Empower工作站(美國(guó)沃特世公司)；色譜柱Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，島津UV-FW265型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司)；FW-177中草藥粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)；BP211D賽多利斯十萬(wàn)分之一天平(德國(guó)賽多利斯集團(tuán))；LC-350A超聲波中藥處理機(jī)(濟(jì)寧市中區(qū)魯超儀器廠)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1醇浸出物含量測(cè)定

照醇溶性浸出物測(cè)定法[8]項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，分別取樣品及三七藥材2.0 g，精密稱定置100 mL圓底燒瓶中，加50 mL乙醇，密閉，放置1 h后，水浴微沸1 h，冷卻，稱定重量，用乙醇補(bǔ)足重量，過(guò)濾，取濾液10 mL置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，揮干，放置于烘箱中，105 ℃干燥3 h，取出，置干燥器中冷卻，稱量。依據(jù)要求，對(duì)12個(gè)樣品及三七藥材進(jìn)行醇浸出物含量測(cè)定，見(jiàn)表2。

2.2總皂苷含量測(cè)定

2.2.1試液的制備

2.2.1.1對(duì)照品溶液的制備

取三七藥材，精密稱定0.3 g，置于50 mL容量瓶中，準(zhǔn)確加入乙醇20 mL，放置過(guò)夜，置80 ℃水浴上保持微沸2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，精密量取0.6 mL，置于25 mL的容量瓶中，用乙醇定容，待測(cè)。

2.2.1.2供試品溶液的制備

取樣品，精密稱定0.4 g，其余步驟同2.2.1.1。

2.2.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取三七對(duì)照藥材待測(cè)液，在波長(zhǎng)400～190 nm間掃描，其最大吸收波長(zhǎng)203 nm與文獻(xiàn)[8]相關(guān)項(xiàng)下規(guī)定的203 nm一致。

2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取對(duì)照品溶液0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mL置蒸發(fā)皿內(nèi)揮干，用乙醇定容于25 mL容量瓶中待測(cè)，在203 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=32.118X-0.755 9，R=0.999 5。

2.2.4測(cè)定方法

取所有樣品的待測(cè)液，以乙醇作為參比溶液，在波長(zhǎng)203 nm處，以島津UV-FW265型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，并計(jì)算含量。

2.2.5精密度實(shí)驗(yàn)

對(duì)同一濃度的總皂苷溶液(湖北)連續(xù)測(cè)定5次，RSD=0.75%，說(shuō)明該方法的精密度良好。

2.2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取1份供試品，室溫放置，分別測(cè)定其在0.5、1、2、4、6 h時(shí)的含量，X=6.050%，RSD= 0.91%。結(jié)果表明，供試品溶液中總皂苷在6 h內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。

2.2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

隨機(jī)抽取樣品(湖北)，精密稱定6份，按照2.2項(xiàng)下的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，X=6.038%，RSD=0.36%。表明本實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.2.8含量測(cè)定

經(jīng)上述方法學(xué)研究表明，采用上述條件測(cè)定總皂苷的方法可行，遂對(duì)12個(gè)不同廠家的樣品按上述方法進(jìn)行處理、測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　5種指標(biāo)的測(cè)定值(%)

2.33種皂苷類成分含量測(cè)定

2.3.1溶液的制備

2.3.1.1對(duì)照品溶液的制備

精密稱取對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含人參皂苷Rg10.4 mg、人參皂苷Rb10.4 mg、三七皂苷R10.1 mg的混合對(duì)照品溶液，備用。

2.3.1.2供試品溶液的制備

取各供試品粉末0.6 g，精密稱定，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，放置過(guò)夜，置80 ℃水浴上保持微沸2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2色譜條件

色譜柱：Kromasil ODS C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-0.05%磷酸溶液(21.5：78.5，V/V)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，進(jìn)樣量20 μL，流速為1.0 mL/min，柱溫32 ℃。時(shí)間(min):0～12, 12～30, 30～60；流動(dòng)相A(%):19→19，19→36，36→80；流動(dòng)相B(%):81→81，81→64，64→20。

1 三七皂苷R1　2 人參皂苷Rg1　3 人參皂苷Rb1圖1　3種對(duì)照品的HPLC圖譜Fig.1　HPLC spectra of 3 kinds of references

1 三七皂苷R1　2 人參皂苷Rg1　3 人參皂苷Rb1圖2　三七片的HPLC圖譜Fig.2　HPLC spectra of Sanqi tablets

2.3.3線性關(guān)系的考察

分別精密吸取混合對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，進(jìn)樣量20 μL，按2.3.2色譜條件進(jìn)行分析，記錄各峰所對(duì)應(yīng)峰面積，以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(表3)。從表3可以看出，3種化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，線性范圍較寬，可以滿足定量測(cè)定的要求。

2.3.4精密度實(shí)驗(yàn)

在2.3.2色譜條件下，對(duì)同一濃度的溶液連續(xù)5次進(jìn)樣，記錄峰面積，三七皂苷R1的RSD為0.87%，人參皂苷Rg1的RSD為0.98%，人參皂苷Rb1的RSD為1.04%，n=5。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

表3　標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一份供試品溶液，室溫放置，分別在0、1、2、4、6 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，得三七皂苷R1的RSD為0.92%，人參皂苷Rg1的RSD為0.22%，人參皂苷Rb1的RSD為1.54%，n=5。結(jié)果表明，供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6含量測(cè)定

以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1為指標(biāo)，測(cè)定12個(gè)廠家的三七片中皂苷的含量。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，取平均值，即得(見(jiàn)表2)。

2.4綜合評(píng)分值

將醇浸出物、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、總皂苷5個(gè)指標(biāo)，按下列公式分別進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理

表4　5種指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)化值和Y值

注：不同字母間表示有顯著性差異(P<0.05)。

從表4可以看出，12個(gè)廠家的三七片Y值存在明顯差異，其由大到小依次為廣西1、武漢1、蕪湖、江蘇、武漢2、四川、杭州、吉林1、廣西2、湖北、吉林1和山東。

3討論

本研究采用熱浸法、紫外分光光度法和高效液相色譜法，分別測(cè)定12個(gè)廠家三七片的醇浸出物、總皂苷、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量，根據(jù)各結(jié)果換算出的綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)各廠家生產(chǎn)的三七片的質(zhì)量。該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可以較為全面地反映三七片的質(zhì)量特征，為三七片的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了方法支持。

對(duì)12個(gè)廠家生產(chǎn)的三七片中5個(gè)指標(biāo)的數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，消除了各指標(biāo)的單位和量綱的不同，以及各指標(biāo)變量范圍相差懸殊所造成的影響；同時(shí)根據(jù)各指標(biāo)在工藝選擇中的主次，給予不同的加權(quán)系數(shù)，以標(biāo)準(zhǔn)化指標(biāo)加權(quán)后求和作為綜合評(píng)判指標(biāo)，可以更科學(xué)合理地評(píng)價(jià)三七片的質(zhì)量。

另外，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同廠家生產(chǎn)的三七片質(zhì)量有顯著差異。建議各生產(chǎn)廠家加強(qiáng)三七藥材原料及生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制水平，以保證三七片質(zhì)量穩(wěn)定、可靠。

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【中藥與天然活性產(chǎn)物】

Multi-index comprehensive evaluation for Sanqi tablets quality

Wu Qun

(Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250011,China)

Abstract∶We evaluate the quality of Sanqi tablets from 12 manufacturers by multi-index comprehensive evaluation method.We determine the contents of Sanqi tablets alcohol extract, total saponins, Rg1saponins, panax ginseng and panax Rb1saponins, ginsenosides R1by hot dipping, UV spectrophotometry, and HPLC.We further acquire determination results of the five indexes and comprehensive index Y.Obvious distinction exists for the index Y.Results show that the quality of Sanqi tablets different for different manufacturers.Multi-index comprehensive evaluation method can be applied to comprehensive evaluation for the quality of Sanqi tablets.

Key words∶comprehensive evaluation method;Sanqi tablets; alcohol extract; notoginseng;Panax notoginseng saponins

中圖分類號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1002-4026(2015)04-0019-06

作者簡(jiǎn)介：吳群(1971-)，女，主管藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┡c質(zhì)量控制。Email:1192685147@qq.com

基金項(xiàng)目：山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃(2014094)

收稿日期：2015-05-05

DOI:10.3976/j.issn.1002-4026.2015.04.004