李俊葓，馬玉健，夏 艷（. 四川中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，四川 綿陽 6000；. 綿陽市人民醫(yī)院神經(jīng)外科 ， 四川 綿陽 6000）

利拉魯肽對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的血管舒張效應(yīng)及其機(jī)制研究

李俊葓1，馬玉健2，夏 艷1
（1. 四川中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，四川 綿陽 621000；2. 綿陽市人民醫(yī)院神經(jīng)外科 ， 四川 綿陽 621000）

目的 研究利拉魯肽對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的血管舒張效應(yīng)及其作用機(jī)制。方法 選取SD雄性大鼠68只，分離其胸主動(dòng)脈環(huán)，根據(jù)是否去內(nèi)皮分為內(nèi)皮完整組40例和去內(nèi)皮組28例，內(nèi)皮完整組按隨機(jī)數(shù)字法再分為格列苯脲干預(yù)亞組20例和左旋硝基精氨酸甲酯干預(yù)亞組20例，格列苯脲干預(yù)亞組接受非特異性ATP敏感性鉀通道抑制劑格列苯脲的預(yù)處理，左旋硝基精氨酸甲酯干預(yù)亞組接受一氧化氮合成酶抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯的預(yù)處理，觀察利拉魯肽對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張效應(yīng)。結(jié)果 濃度為1*10-5mol/L的利拉魯肽對(duì)內(nèi)皮完整組和去內(nèi)皮組大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)均有舒張作用，但對(duì)內(nèi)皮完整組大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)舒張作用更強(qiáng)（P＜0.05）；利拉魯肽對(duì)格列苯脲預(yù)處理后胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度與未處理時(shí)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；利拉魯肽對(duì)左旋硝基精氨酸甲酯預(yù)處理后胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度與未處理時(shí)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 利拉魯肽對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)血管具有確切的舒張效應(yīng)，其機(jī)制與血管內(nèi)皮釋放的一氧化氮有關(guān)。

大鼠；血管舒張效應(yīng)；利拉魯肽；胸主動(dòng)脈環(huán)

糖尿病是一種內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病，既往大量研究［1-2］證實(shí)，其可增加心血管類疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，因此控制血糖不僅對(duì)糖尿病本身至關(guān)重要，亦對(duì)預(yù)防心血管類疾病具有重要意義。2010年美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)將人胰高血糖素樣肽-1類似物利拉魯肽用于治療糖尿病［3］。既往研究［4］指出，利拉魯肽對(duì)心血管系統(tǒng)具有一定的保護(hù)作用，但其潛在的作用機(jī)制尚未闡明。本研究通過分組對(duì)比，研究利拉魯肽對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的血管舒張效應(yīng)及其作用機(jī)制，如下報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

乙酰膽堿；左旋硝基精氨酸甲酯；去甲腎上素；利拉魯肽；K rebs-Henseleit液（11 mol/ L PH=7.4的葡萄糖、25 mol/L KH2PO4、14.7 mol/L KCL、2.5 mol/L CaCL2、118 mol/L NaCL、1.2 mol/L MgCL2、25 mol/LNaHCO3）；超級(jí)恒溫浴鍋；計(jì)算機(jī)生物信號(hào)分析系統(tǒng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

選取SD雄性大鼠68只， 體重230～272 g，平均體重（251±22）g，購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，分離其胸主動(dòng)脈環(huán)，根據(jù)是否去內(nèi)皮分為內(nèi)皮完整組40例和去內(nèi)皮組28例，內(nèi)皮完整組按隨機(jī)數(shù)字法再分為格列苯脲干預(yù)亞組20例和左旋硝基精氨酸甲酯干預(yù)亞組20例，格列苯脲干預(yù)亞組接受非特異性ATP敏感性鉀通道抑制劑格列苯脲的預(yù)處理，左旋硝基精氨酸甲酯干預(yù)亞組接受一氧化氮合成酶抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯的預(yù)處理。利拉魯肽分別作用于預(yù)處理過的去甲腎上素預(yù)收縮的胸主動(dòng)脈環(huán)。

1.3 胸主動(dòng)脈環(huán)制備方法

迅速分離大鼠胸主動(dòng)脈，置于K rebs-Henseleit液中，修剪成4 mm左右的血管環(huán)，并輔以不銹鋼微型掛鉤和細(xì)鋼絲，將血管環(huán)橫向懸掛于Krebs-Henseleit液浴槽中，在37℃溫度下，持續(xù)通入5%二氧化碳和95%氧氣混合氣體，調(diào)節(jié)靜息張力使其為2 g，使用生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)張力變化。為誘發(fā)血管環(huán)最大收縮幅度，使用濃度為1*10-6mol/L的去甲狀腺素預(yù)收縮2次，待前后2次最大收縮幅度差低于5%，加入濃度為 1*10-6mol/L的去甲狀腺素收縮，觀察血管環(huán)張力變化，若其到達(dá)最大舒張幅度，依次加入濃度為1*10-7mol/L、1*10-6mol/L、1*10-5mol/ L的乙酰膽堿，觀察血管的舒張情況。去內(nèi)皮實(shí)驗(yàn)：修剪胸主動(dòng)脈環(huán)并固定，輔以尺寸相適的棉棒擦過管腔，連續(xù)進(jìn)行2次，再使用濃度為1*10-6mol/L的去甲狀腺素刺激，待前后2次最大收縮幅度差低于5%，加入濃度為1*10-5mol/L的乙酰膽堿，舒張幅度低于收縮幅度的5%時(shí)可進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)，說明內(nèi)皮已去除完全。

1.4 觀察指標(biāo)

測(cè)定大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)舒張功能，檢驗(yàn)內(nèi)皮完整性后，使用K rebs-Henseleit液對(duì)胸主動(dòng)脈環(huán)進(jìn)行3次清洗，使用濃度為1*10-6mol/L的去甲狀腺素誘發(fā)其達(dá)最大程度收縮，依次加入濃度為1*10-8mol/L、1*10-7mol/ L、1*10-6mol/L、1*10-5mol/L的利拉魯肽，以加入利拉魯肽后的血管張力幅度與去甲腎上腺素誘發(fā)的最大收縮幅度間的張力反映血管張力的變化。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 利拉魯肽對(duì)去甲狀腺素預(yù)收縮胸主動(dòng)脈環(huán)的作用

濃度為1*10-5mol/L的利拉魯肽對(duì)內(nèi)皮完整組和去內(nèi)皮組大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)均有舒張作用，但對(duì)內(nèi)皮完整組大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)舒張作用更強(qiáng)（P＜0.05）。

2.2 利拉魯肽對(duì)預(yù)處理的去甲狀腺素誘導(dǎo)收縮的胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用

未經(jīng)處理時(shí)，利拉魯肽對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度為17%。利拉魯肽對(duì)格列苯脲干預(yù)亞組大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度為14%，利拉魯肽對(duì)格列苯脲預(yù)處理后胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度與未處理時(shí)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；利拉魯肽對(duì)左旋硝基精氨酸甲酯干預(yù)亞組大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度為4%，利拉魯肽對(duì)左旋硝基精氨酸甲酯預(yù)處理后胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度與未處理時(shí)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

本研究中加入左旋硝基精氨酸甲酯后利拉魯肽對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度為4%，未經(jīng)左旋硝基精氨酸甲酯預(yù)處理時(shí)，利拉魯肽對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度為17%，說明左旋硝基精氨酸甲酯可抑制利拉魯肽對(duì)血管的舒張作用。一氧化氮合成酶可催化L-精氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)橐谎趸?，再轉(zhuǎn)運(yùn)至血管平滑肌，故一氧化氮合成酶抑制劑可阻斷一氧化氮的血管舒張作用［5］。

本研究觀察了非特異性ATP敏感性鉀通道抑制劑格列苯脲的預(yù)處理前后血管的舒張效應(yīng)，結(jié)果顯示利拉魯肽對(duì)格列苯脲干預(yù)亞組大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度為14%，未經(jīng)格列苯脲預(yù)處理時(shí)，利拉魯肽對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度為17%，格列苯脲預(yù)處理后胸主動(dòng)脈環(huán)血管舒張幅度低于未經(jīng)處理時(shí)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明非特異性ATP敏感性鉀通道未參與血管舒張作用。同時(shí)本研究是將利拉魯肽作用于去甲腎上腺素預(yù)收縮的血管環(huán)，而去甲腎上腺素的收縮機(jī)制與血管平滑肌上的α腎上腺素受體有關(guān)，其可使鈣離子內(nèi)流，ROC通道開放，進(jìn)而出現(xiàn)血管收縮反應(yīng)，整個(gè)過程中鈣離子通道亦可能參與利拉魯肽的血管舒張效應(yīng)中，關(guān)于其真實(shí)性有待進(jìn)一步考究。

綜上所述，利拉魯肽對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)血管具有確切的舒張效應(yīng)，其機(jī)制與血管內(nèi)皮釋放的一氧化氮有關(guān)。

［1］ 李國(guó)娟，陳 宏，董艷華，等.利拉魯肽對(duì)促動(dòng)脈粥樣硬化飲食喂養(yǎng)大鼠大動(dòng)脈的保護(hù)作用及對(duì)肝臟PGC-1α表達(dá)的影響［J］.華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014，43（06）：653-657.

［2］ 李 寧，王 雄.利拉魯肽對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的血管舒張效應(yīng)及其機(jī)制研究［J］.中國(guó)循環(huán)雜志，2015，30（01）：50-53.

［3］ 李昊天，趙興長(zhǎng)，孫 平，等.利拉魯肽對(duì)大鼠急性脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞自噬與運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的作用［J］.解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015.36（05）：492-496，501.

［4］ 楊 力，郭南京，蔡德鴻，等.利拉魯肽對(duì)IGT-OLETF大鼠血清糖基化終末產(chǎn)物及炎癥指標(biāo)的影響［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2013.38（02）：116-119.

［5］ 白 蓮，李春君，邢云芝，等.利拉魯肽激活糖尿病大鼠腎臟內(nèi)皮源性一氧化氮合酶活性降低尿白蛋白排泄的研究［J］.中國(guó)糖尿病雜志，2014，22（09）：846-849.

本文編輯：徐 陌

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ISSN.2095-6681.2016.15.177.02