金華，丁家怡(南通婦幼保健院，江蘇南通226006)

輔助生殖技術(shù)促排卵周期中無(wú)特異性病變宮腔積液對(duì)精子和胚胎發(fā)育的影響

金華，丁家怡
(南通婦幼保健院，江蘇南通226006)

摘要:目的觀察輔助生殖技術(shù)促排卵周期中的無(wú)特異性病變宮腔積液(簡(jiǎn)稱(chēng)宮腔積液)對(duì)人高活力精子和小鼠胚胎發(fā)育潛能的影響。方法觀察組將宮腔積液分別與精子培養(yǎng)液和胚胎培養(yǎng)液按體積濃度分別配制成25%、50%、75%、100%，對(duì)照組為單純精子或胚胎培養(yǎng)液，在相應(yīng)培養(yǎng)液中分別加入高活力人類(lèi)精子和2細(xì)胞小鼠胚胎;觀察接觸宮腔積液后精子前向運(yùn)動(dòng)率和存活率，以及小鼠胚胎培養(yǎng)后囊胚形成率和孵出囊胚形成率。結(jié)果與對(duì)照組相比，觀察組精子前向運(yùn)動(dòng)率、存活率及小鼠囊胚形成率、孵出率明顯降低( P均＜0.05)，且隨宮腔積液濃度增加降低更明顯( P均＜0.05)。結(jié)論宮腔積液可降低人高活力精子的運(yùn)動(dòng)和受精能力，同時(shí)降低胚胎發(fā)育潛能。

關(guān)鍵詞:輔助生殖技術(shù);宮腔積液;精子;胚胎

近年來(lái)，控制性促排卵在人工授精( IUI)和體外受精—胚胎移植( IVF-ET)等輔助生殖技術(shù)中廣泛應(yīng)用，但超生理劑量的激素常產(chǎn)生無(wú)特異性病變的宮腔積液(以下簡(jiǎn)稱(chēng)宮腔積液)。2014年5～12月，我們觀察了人精子和小鼠胚胎在不同濃度宮腔積液中的發(fā)育情況，探討宮腔積液對(duì)精子和胚胎發(fā)育潛能的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1材料人高活力精子來(lái)自12位正常成年已婚已育男性(年齡26～30歲，體質(zhì)量62～75 kg)手淫取精;按手冊(cè)［1］檢測(cè)精液正常，以上游法處理獲得高活力精子，置于精子培養(yǎng)液中備用。取6～8周昆明小鼠190只(雌性130只，雄性60只)，雌鼠腹腔注射人絕經(jīng)期促性腺激素10 IU/只，48 h后腹腔注射人絨毛膜促性腺激素10 IU;然后按雌雄比例1∶1合籠，次日清晨檢查雌鼠陰栓;處死hCG注射36 h后陰道有精液栓的雌鼠，在輸卵管膨大部尋找小鼠胚胎;將2細(xì)胞胚胎放入已經(jīng)過(guò)夜平衡的胚胎培養(yǎng)液中備用，共獲得1 920枚。宮腔積液來(lái)自32例2014年5～12月在本院生殖醫(yī)學(xué)中心行輔助生殖技術(shù)促排卵周期中發(fā)現(xiàn)宮腔積液的患者，積液收集后置離心管400 g離心力離心20 min，去除底部沉渣，最后用直徑0.22 μm過(guò)濾器過(guò)濾后置4℃冰箱，使用前復(fù)溫。

1.2宮腔積液對(duì)人高活力精子的作用觀察觀察組將宮腔積液與精子培養(yǎng)液按體積濃度( v/v)分別配制成25%、50%、75%、100%，對(duì)照組為單純精子培養(yǎng)液;分別加入5萬(wàn)條高活力精子，混勻后置于37℃、5% CO2、5% N2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);培養(yǎng)24 h時(shí)，分析各組精子前向運(yùn)動(dòng)率(前向運(yùn)動(dòng)精子數(shù)/精子總數(shù))和存活率(活動(dòng)精子數(shù)/精子總數(shù))［1］。

1.3宮腔積液對(duì)小鼠2細(xì)胞胚胎發(fā)育的作用觀察觀察組將宮腔積液與胚胎培養(yǎng)液按體積濃度( v/v)分別配制成25%、50%、75%、100%，對(duì)照組為單純胚胎培養(yǎng)液;將培養(yǎng)液分別在培養(yǎng)皿中制作15個(gè)液滴( 20 μL/滴)，每濃度3滴，每滴內(nèi)放入4枚2細(xì)胞小鼠胚胎;將培養(yǎng)皿置于37℃、5% CO2、5% N2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);于小鼠注射HCG后108、120、132、144 h時(shí)，觀察并記錄囊胚形成總數(shù)和囊胚孵出總數(shù)，計(jì)算囊胚形成率(囊胚形成總數(shù)/胚胎總數(shù))和孵出囊胚形成率(囊胚孵出總數(shù)/胚胎總數(shù))。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以珋x±s表示，組間比較采用單因素方差分析;計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1宮腔積液對(duì)高活力精子的影響兩組精子前向運(yùn)動(dòng)率和存活率比較，見(jiàn)表1。

2.2宮腔積液對(duì)小鼠2細(xì)胞胚胎發(fā)育的影響兩組囊胚形成率及孵出囊胚形成率比較，見(jiàn)表2。

表1　兩組精子前向運(yùn)動(dòng)率和存活率比較( %，±s)

表1　兩組精子前向運(yùn)動(dòng)率和存活率比較( %，±s)

注:與對(duì)照組比較，*P＜0.05;與同組上一濃度比較，#P＜0.05。

組別　　精子前向運(yùn)動(dòng)率　　精子存活率觀察組25%　53.7±7.1*　85.3±5.7*50%　37.4±6.0* #　54.6±8.9* #75%　14.2±4.1* #　27.9±6.4* #100%　5.8±2.7* #　19.3±4.7* #對(duì)照組66.5±8.2　91.3±5.5

表2　兩組囊胚形成率及孵出囊胚形成率比較( n =384)

3　討論

近年來(lái)，不孕癥在我國(guó)的發(fā)病率不斷攀升［2］，輔助生殖技術(shù)成為眾多不孕不育患者首選的治療方法。輔助生殖技術(shù)主要包括宮腔內(nèi)IUI、IVF-ET、單卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射( ICSI)等，這些新技術(shù)的出現(xiàn)為無(wú)數(shù)患者解決了生育難題，但是輔助生殖技術(shù)也帶來(lái)了一系列并發(fā)癥，包括出血、感染、流產(chǎn)［3］以及大量超生理劑量激素的應(yīng)用而引起的卵巢過(guò)度刺激綜合征［4］等。輔助生殖技術(shù)促排卵周期中宮腔積液發(fā)生率較低(＜11%)［5］，其發(fā)生機(jī)制目前尚未明確。有研究認(rèn)為，輸卵管積液可能是導(dǎo)致宮腔積液的主要原因［6］。此外，促排卵治療周期中大劑量激素使用，可能也是宮腔積液發(fā)生的原因之一［7］。目前，宮腔積液對(duì)精子和胚胎的毒副作用仍不清楚。研究表明，宮腔積液可導(dǎo)致子宮內(nèi)膜白細(xì)胞和白細(xì)胞介素2表達(dá)水平升高，從而加強(qiáng)子宮內(nèi)膜炎癥反應(yīng)［8］，這可能是人工授精和IVF失敗的原因之一［9，10］。此外，宮腔積液中缺乏各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子，可能也是胚胎發(fā)育停滯最終造成妊娠失敗的原因［11］。目前，宮腔積液對(duì)人工授精影響的相關(guān)研究較少。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較觀察組精子前向運(yùn)動(dòng)率存活率均明顯降低( P均＜0.05) ;并且，隨著宮腔積液濃度的增加，影響程度逐漸加重。由此可見(jiàn)，宮腔積液極大減少了精子通過(guò)宮腔最終到達(dá)輸卵管壺腹部的數(shù)量，這可能是人工授精失敗的原因之一。

目前，多數(shù)生殖中心在IVF周期中移植第3天的胚胎。這就意味著移植后的胚胎將在宮腔內(nèi)繼續(xù)發(fā)育2～3 d，直至孵出種植于子宮內(nèi)膜，此時(shí)的子宮內(nèi)環(huán)境對(duì)胚胎發(fā)育的影響極大。本研究發(fā)現(xiàn)，胚胎在與宮腔積液接觸后，隨著宮腔積液濃度的增加，發(fā)育逐漸受到影響，囊胚形成率逐漸下降，孵出囊胚的比率也同時(shí)下降。表明胚胎發(fā)育受到較大影響，宮腔積液降低了胚胎的發(fā)育潛能。

綜上所述，在輔助生殖技術(shù)促排卵周期中產(chǎn)生的宮腔積液可降低精子的運(yùn)動(dòng)和存活率，影響胚胎的發(fā)育潛能和孵化能力，從而影響輔助生殖治療結(jié)果。

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收稿日期:( 2015-03-10)

文章編號(hào):1002-266X( 2015) 30-0026-02

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

中圖分類(lèi)號(hào):R711

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.30.009