李　莉，王慶振

(新疆醫(yī)科大學藥學院，烏魯木齊　830011)

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毛細管微萃取結合光纖傳感在線檢測全血中異丙酚含量

李莉*，王慶振

(新疆醫(yī)科大學藥學院，烏魯木齊830011)

摘要：目的建立快速測定全血中異丙酚含量原位、在線分析的新方法。方法利用毛細管微萃取器聯(lián)合紫外光纖傳感儀及微順序注射-閥上實驗室系統(tǒng)在線測定全血中異丙酚含量。 結果方法的提取回收率為78.5%～81.3%，日內精密度均小于3%。異丙酚全血樣品平均萃取率與傳統(tǒng)液液萃取的平均萃取率無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，但萃取時間縮短5～7 min。結論該法無需離心、除蛋白等手工操作，能快速測定全血中異丙酚的含量，為全血中異丙酚含量在線檢測提供良好的手段。

關鍵詞：異丙酚；光纖化學傳感；毛細管微萃取器；微順序注射-閥上實驗室系統(tǒng)

異丙酚是一種新型全身靜脈麻醉藥，顯效快、時間短、蘇醒快而完全，不良反應較少，麻醉過程平穩(wěn)、易于控制、清除率高且有較高的脂溶性，長時間連續(xù)使用后并不出現(xiàn)藥物在體內明顯蓄積[1-5]，是一種較好的靶控輸注系統(tǒng)藥物。異丙酚在體內代謝速度較快，個體差異較大，需要快速對異丙酚的血藥濃度進行監(jiān)測。目前，異丙酚血液樣品的前處理方法主要有蛋白沉淀法、液-液萃取法及固相萃取法[6]等。但操作繁瑣，均為離線分析，不利于異丙酚血藥濃度的快速檢測。所以，建立一種快速的異丙酚前處理方法，對臨床用藥的安全有效具有重要意義[7]。

本研究利用異丙酚全血樣品在毛細管微萃取器中的螺旋運動[8-9]，在短時間內實現(xiàn)樣品的高效萃取，結合微順序注射-閥上實驗室(Micro Sequential Injection lab-on-value，μSIA-LOV)與光纖化學傳感，以光纖作為傳導介質，將光纖光譜儀、微順序注射分析儀、八通閥和連續(xù)氘燈光源連接， 用計算機控制，利用該系統(tǒng)自動介觀流控特征與光纖傳感的實時監(jiān)測相連，可以實現(xiàn)樣品的在線監(jiān)測[10-11]。

1儀器與試藥

1.1儀器 微量順序注射儀(美國 FIAlab Instruments 公司)；光纖光譜儀(MAYA-2000 pro，CCD)；QP400-2-uv-vis光纖2根(美國 Ocean Optics 公司)；連續(xù)氘燈光源(D-2000，德國Mikropack公司)。實驗流路所用連接管道采用 PTFE 管(0.75 mm)。采用安裝有 FIAlab for Windows 和SpectraSuite 軟件的 Windows XP系統(tǒng)臺式電腦對光纖光譜儀與微量順序注射分析儀進行控制。 光纖傳感-微順序注射-閥上實驗室儀器裝置:包含1個1 000 μL高精密度注射泵、1個棕色濾光8通道的多位閥模塊(LOV)，在該模塊上集成了一個中心控制通道和多個工作通道及一個多功能流通池；通過軟件調控中心通道一端與8位閥上工作通道相連，使中心通道與工作通道準確連接，另一端與高精度注射泵連接，使其構成流動分析系統(tǒng)。 一根光纖與光纖光譜儀相連，另一根光纖與連續(xù)氘燈光源相連，兩根光纖探頭插入Z型流通池，光路直線組成紫外吸收測定模式。pH計(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；ER-128A電子分析天平(A&DDeompany，TLD，JAPAN)。

1.2試藥 異丙酚對照品(中國食品藥品檢定研究院提供，批號：100806-200801，ID:4H01-51DP，質量分數(shù)99.8%)；異丙酚注射乳液(西安力邦制藥有限公司，規(guī)格10 mg·mL-1，批號0510261)；甲醇(色譜純，天津市光復精細化工研究所)；環(huán)己烷、正丁醇(分析純，天津市富宇精細化工有限公司)；血液(新疆醫(yī)科大學動物房提供)；磷酸二氫鈉(天津市福晨化學試劑廠)；磷酸氫二鈉(天津市光復科技發(fā)展有限公司)。

2方法

2.1緩沖溶液的配制分別精密稱取3.120 2 g磷酸二氫鈉、7.162 8 g磷酸氫二鈉，用蒸餾水定容至100 mL量瓶中，濃度分別為0.2和0.2 mol·L-1。分別量取0.2 mol·L-1磷酸二氫鈉51 mL和0.2 mol·L-1磷酸氫二鈉49 mL，混合，用pH計調節(jié)，配成 pH值為6.8的緩沖液。

2.2儲備液的配制準確稱取10 mg異丙酚，用甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，配制成1 000 μg·mL-1的異丙酚儲備液。精密量取1 000 μg·mL-1的異丙酚儲備液0.8，1.0，1.2，1.5和2.0 mL，用甲醇分別定容至10 mL量瓶中，配制成質量濃度分別為80，100，120，150和200 μg·mL-1的系列標準溶液。

2.3操作流程實驗裝置及流程如圖1～2。先從3號通道吸取1.0 mL甲醇注入集液瓶 ，再從2號通道吸取1.0 mL含藥 SD大鼠新鮮全血，然后從5號通道吸取1.0 mL磷酸鹽緩沖液，最后從4號通道吸取5.0 mL環(huán)己烷，置于毛細管中，充分混合后從1號排出，靜置3 min；在注射泵的驅動下，由多位閥的6號口以20 μL·s-1的流速精密吸取200 μL，被吸入儲液線圈中樣品，再反向以20 μL·s-1的流速將樣品從連接有光纖的Z型流通池(Flow cell)流出，通過光纖光譜儀讀取溶液的吸光度。 每次測定結束后，用甲醇以200 μL·s-1的流速沖洗整個流路。所有實驗操作均由 FIAlab 軟件自動完成。

軟件模塊:由FIAlab for Windows軟件進行8通閥控制；SpectraSuite軟件通過光纖光譜儀進行控制并采集光譜圖[9]。

圖1實驗裝置簡圖

Fig.1 A diagram of the experiment device

圖2 實驗流程圖

Fig.2 Flow diagram of the experiment

3結果

3.1異丙酚紫外吸收光譜

由通道6吸入200 μL異丙酚對照品的甲醇溶液(150 μg·mL-1)，得到光譜圖(圖3)。結果表明，異丙酚最大吸收波長位于271 nm處。

圖3異丙酚紫外吸收光譜

Fig.3 UV absorption spectra of propofol

3.2標準曲線方程及線性范圍

將異丙酚標準液與新鮮加肝素的SD大鼠全血混合，配制成質量濃度分別為80.0，100.0，120.0，150.0和200.0 μg·mL-1的樣品溶液，并按照2.3中的步驟測定其吸光度(圖4)。以異丙酚質量濃度為橫坐標(X)、吸光度為縱坐標(Y)，得回歸方程：Y=0.014 6X-0.112 7，r=0.997 7。線性范圍為80.0～200.0 μg·mL-1。

圖4異丙酚標準曲線的紫外吸收圖譜

Fig.4 UV absorption spectrum of the standard curve of propofol

3.3精密度實驗

制備質量濃度為80.0，100.0和120.0 μg·mL-1的系列異丙酚標準溶液，在毛細管微萃取結合紫外光纖傳感儀及微順序注射-閥上實驗室系統(tǒng)方法下考察日內精密度，1 d內測定3次系列溶液吸光度。精密度RSD分別為1.43%，2.27%和1.50%。

3.4提取回收率分別配置低、中、高質量濃度的標準全血樣品(全血中異丙酚質量濃度分別為100，120和150 μg·mL-1)，每種質量濃度平行做5份，并按照2.3項下的步驟前處理及用連接的微順序注射系統(tǒng)測定其吸光度。另取新鮮SD大鼠空白全血，同樣按照2.3項下方法進行樣品前處理，加入等量的標準溶液，同法制備相同的高、中、低3個質量濃度的標準對照品，然后，由微順序注射系統(tǒng)測定。將測得的樣品吸光度與對照品測得的吸光度比較。結果表明，該方法提取回收率良好。結果見表1。

表1回收率實驗結果

Tab.1 Results of recovery test

±s)

3.5與傳統(tǒng)液-液萃取方法的比較精密吸取1 mL含藥SD大鼠的新鮮全血加入到10 mL具塞試管中，加入1 mL磷酸鹽緩沖液混勻，最后加入5 mL環(huán)己烷，充分震蕩2 min，靜置，由微順序注射泵以20 μL·s-1的流速精密吸取200 μL上層有機層，再反向以20 μL·s-1的流速將樣品從連接有光纖的Z型流通池流出，通過光纖光譜儀讀取溶液的吸光度。

將毛細管微萃取法與傳統(tǒng)液-液萃取法進行比較(圖 5)可知，樣品經萃取后直接測其吸光度，紅線表示經傳統(tǒng)液-液萃取方法萃取后在270.17 nm處無紫外吸收。藍線表示經毛細管萃取后在270.17 nm處有紫外吸收。本方法借助簡便的毛細管微萃取器對異丙酚進行萃取，操作步驟簡單，萃取時間在3～5 min之間，平均萃取率為98.5%，平均RSD為4.51%。用傳統(tǒng)的液液萃取方法平行作對比，結果顯示，異丙酚在10 mL具塞試管中液-液萃取時間在10 min以上，平均萃取率為95.0%，平均RSD為9.83%。結果表明，經配對t檢驗(檢驗水準：ɑ=0.05)2種方法對全血中的異丙酚萃取率差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

圖5異丙酚2種萃取方法的紫外吸收圖譜

Fig.5 UV absorption spectra of the two extraction methods for propofol

4結論

本實驗將毛細管微萃取和微量順序注射-閥上實驗室系統(tǒng)及光纖傳感技術結合，建立了在線測定全血樣品中異丙酚含量的方法。目前對異丙酚的測定方法大多采用取樣分析，需要經過多步樣品前處理。本實驗則是在毛細管微萃取線圈中結合LOV模塊上連接Z型流通池以紫外吸收測定模式進行樣品測定，簡化了操作步驟，每一步操作采用程序化控制，提高了實驗可重復性和規(guī)范性；整個系統(tǒng)微升級的進樣量大大降低了試劑和樣品的消耗，顯著提高分析速度。為異丙酚在線前處理及在線檢測提供良好的手段。

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·藥物分析·

The online determination of propofol in whole blood by combining capillary micro-extraction with optical-fiber sensor

LI Li*，WANG Qingzhen(College of Pharmacy， Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China)

Abstract:ObjectiveA new online and in situ method to determine the propofol′s content in whole blood was established，which combined capillary micro-extraction with optical-fiber. MethodsCapillary micro-extractor ，optical-fiber sensing devices and Micro Sequential Injection lab-on-value(μSIA-LOV) were used to determine propofol in whole blood. ResultsThe extraction recovery ratio was ranged from 78.5% to 81.3%. Day precision was less than 3%. The average extraction rate of capillary micro-extraction and tradition liquid-liquid extraction showed no significant difference(P>0.05). But the extraction time was shorten about 5-7 min.Conclusion This new method could test propofol in whole blood online without using centrifuge and removing protein. This study provide an option to determine propofol in whole blood.

Key words:propofol；optical-fiber chemical sensor；capillary micro-extractor；μSIA-LOV

收稿日期：(2015-08-12)

通信作者：*李莉，女，教授，博士生導師

作者簡介：王慶振，男，在讀碩士研究生

基金項目：國家自然科學 (編號：81260485)

中圖分類號：R927.2

文獻標志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)01-0037-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.012