李俊仁，陳秀珍，梁凌玲，張振山，邢建永，詹若挺，何 瑞

（1．廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源科學(xué)與工程研究中心，嶺南中藥資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國家中成藥工程技術(shù)研究中心南藥研發(fā)實(shí)驗(yàn)室， 廣東 廣州510006；2．右江民族醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院， 廣西 百色533000；3．華潤三九醫(yī)藥股份有限公司研發(fā)中心， 廣東 深圳518029）

收載于《中華人民共和國藥典（2015版）》“成方制劑中本版藥典未收載的藥材和飲片”中的藥材品種崗梅來源于冬青科植物崗梅（梅葉冬青，Ilex asprella。（Hook．Et Arn．）Champ．Ex Benth）［1］，以干燥根為藥用部位，主要功效為清熱、生津、活血、解毒，可用于治感冒、眩暈、頭痛、咽喉腫痛、跌打損傷等，為嶺南地區(qū)常用藥材［2］。近年來，由于三九感冒沖劑等中成藥的銷量大增，對崗梅藥材的需求不斷增長，大量采挖的結(jié)果使野生崗梅藥材大規(guī)模減少，導(dǎo)致中成藥生產(chǎn)及臨床應(yīng)用嚴(yán)重缺乏藥材，因此，人工規(guī)模化種植崗梅成為必然，對崗梅種苗質(zhì)量的評價(jià)提到了生產(chǎn)日程上來。種子種苗的質(zhì)量從源頭上決定藥材的產(chǎn)量和質(zhì)量，科學(xué)、客觀的種苗質(zhì)量檢驗(yàn)和分級(jí)，才能保證種苗生產(chǎn)及其質(zhì)量控制得到認(rèn)可并能實(shí)際指導(dǎo)生產(chǎn)［3］。

1 材料與方法

1．1 種苗材料

2013年3月31日，從華潤三九藥業(yè)與廣東南領(lǐng)藥業(yè)有限公司合作在廣東平遠(yuǎn)建立的崗梅種苗基地中多處地塊隨機(jī)挖取共600株1年生崗梅種子實(shí)生苗，實(shí)際移栽并測量510株。

1．2 儀 器

卷尺，電子數(shù)顯游標(biāo)卡尺（0～200mm，廣西廣陸數(shù)字測控股份有限公司）。

1．3 種苗參數(shù)測量

移栽當(dāng)日對每株種苗編號(hào)并掛牌，用卷尺測量其株高、根長（根系中主根的長度）；用游標(biāo)卡尺測量其株徑，并將所有測量過的苗移栽于南領(lǐng)藥業(yè)指定的種苗移栽地，每月測量各數(shù)據(jù)，移栽期1年及2年后分別統(tǒng)計(jì)存活率。

1．4 質(zhì)量分級(jí)方法

1．4．1 種苗參數(shù)直接 K－聚類分析

采用SPSS 16．0軟件對所測得的510株崗梅種苗所有參數(shù)進(jìn)行K－聚類，獲得每等級(jí)各參數(shù)的聚類結(jié)果及崗梅種苗的等級(jí)分布情況，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際進(jìn)行分級(jí)，制定分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。以最低級(jí)原則，即任何一項(xiàng)不符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)均不能定為相應(yīng)等級(jí)的種子為原則評價(jià)種苗數(shù)據(jù)（下同）。

1．4．2 種苗參數(shù)主成分分析－K聚類法

采用SPSS 16．0軟件進(jìn)行崗梅種苗參數(shù)統(tǒng)計(jì)描述、相關(guān)性分析、主成分分析，提取到2個(gè)主成分，計(jì)算2個(gè)主成分的累積貢獻(xiàn)率，進(jìn)而計(jì)算獲得主成分特征向量和特征根，得到種苗評價(jià)因子（F）計(jì)算公式；采用該公式計(jì)算所測崗梅種苗的評價(jià)因子并進(jìn)行K－聚類，得到聚類中心值及各等級(jí)種苗分布及數(shù)量，根據(jù)聚類結(jié)果及生產(chǎn)實(shí)際進(jìn)行分級(jí)，制定分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

1．4．3 種苗參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差法

采用SPSS 16．0軟件進(jìn)行崗梅種苗移栽當(dāng)日參數(shù)統(tǒng)計(jì)，獲得各參數(shù)均值和標(biāo)準(zhǔn)差。以平均值加1倍的標(biāo)準(zhǔn)差作為一、二等的分界點(diǎn)，平均值作為二、三等的分界點(diǎn)，平均值減1倍標(biāo)準(zhǔn)差為三等的下限點(diǎn)，低于三等下限的為等外種苗；同時(shí)結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際進(jìn)行分級(jí)，制定分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

1．4．4 3種種苗質(zhì)量初步分級(jí)方法比較

跟蹤觀察崗梅種苗移栽后的生長情況，并測量崗梅種苗生長參數(shù)。根據(jù)實(shí)際情況，以移栽1年、移栽2年的種苗存活率對3種崗梅種苗分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價(jià)。

2 結(jié)果與分析

2．1 移栽數(shù)據(jù)

移栽當(dāng)日共記錄510株崗梅苗，測量了株高、根長和株徑，數(shù)據(jù)如表1。

表1 一年生崗梅實(shí)生苗植株參數(shù)統(tǒng)計(jì)描述（n＝510）

2．2 崗梅種苗質(zhì)量分級(jí)方法的探索

2．2．1 種苗參數(shù) K－聚類分析

采用SPSS 16．0軟件進(jìn)行崗梅種苗參數(shù)K－聚類，獲得結(jié)果如表2，其中一、二等的種苗數(shù)占總數(shù)的60．8%。根據(jù)現(xiàn)有數(shù)據(jù)初步確定了分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（見表3），分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)遵守最低級(jí)原則，即任何一項(xiàng)不符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)均不能定為相應(yīng)等級(jí)的種苗，任何一項(xiàng)低于三等標(biāo)準(zhǔn)的種苗即為不合格種苗。

表2 崗梅種苗參數(shù)K－聚類中心及所屬等級(jí)苗數(shù)（n＝510）

表3 種苗參數(shù)K－聚類法對崗梅種苗的質(zhì)量分級(jí)

2．2．2 崗梅種苗參數(shù)的主成分分析結(jié)合聚類分析

采用SPSS 16．0軟件進(jìn)行崗梅種苗參數(shù)主成分分析和計(jì)算，獲得種苗評價(jià)因子，進(jìn)一步K－聚類分三等。其中種苗各參數(shù)間呈顯著正相關(guān)（p＜0．01），株徑和株高間的相關(guān)系數(shù)最高（0．688，表4）；進(jìn)一步提取到2個(gè)主成分（F 1，F(xiàn) 2），累積貢獻(xiàn)率達(dá)到90%（表5）；由主成分矩陣計(jì)算主成分特征向量和特征根（表6），得到種苗評價(jià)因子（F）計(jì)算公式；采用該公式計(jì)算種苗評價(jià)因子F并進(jìn)行K－聚類，得到如表7的聚類中心值及各等級(jí)種苗數(shù)。其中一、二等的苗占到總數(shù)的61．6%。主成分分析結(jié)果顯示在3個(gè)種苗參數(shù)中，影響種苗質(zhì)量的主導(dǎo)因素是株徑和根長。

表4 一年生崗梅種苗各參數(shù)間簡單相關(guān)系數(shù)

表5 主成分變量解釋

表6 主成分特征向量和特征根

由表6主成分矩陣內(nèi)數(shù)據(jù)計(jì)算獲得的特征根，可得到以下2個(gè)主成分公式：

F 1＝0．585×株高＋0．530×根長＋0．615×株徑。

F 2＝－0．524×株高＋0．825×根長－0．212×株徑。

因此，種苗評價(jià)因子F的計(jì)算公式為：

F＝F 1×0．708 5＋F 2×0．192 4。

計(jì)算移栽日所有種苗的評價(jià)因子F并采用K－聚類法分成三等，初步獲得聚類中心如表7，把510棵種苗分為三等，根據(jù)實(shí)際參數(shù)分出的二等種苗數(shù)目最多，約占總數(shù)42%；一、二等苗占總數(shù)的61．5%。

表7 種苗評價(jià)因子聚類中心及所屬等級(jí)苗數(shù)（n＝510）

2．2．3 種苗參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差法

采用SPSS 16．0軟件進(jìn)行崗梅種苗移栽當(dāng)日參數(shù)統(tǒng)計(jì)，獲得各參數(shù)均值和標(biāo)準(zhǔn)差（見表1）。按1．4．3種苗參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差法進(jìn)行分級(jí)，獲得各等級(jí)參數(shù)范圍（表8）。以最低級(jí)原則，即任何一項(xiàng)不符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)均不能定為相應(yīng)等級(jí)的種子為原則評價(jià)種苗數(shù)據(jù)，共有接近70%的崗梅種苗可定為合格種苗（一至三等），其余為不合格種苗（表8）。

表8 種苗參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差法崗梅種苗分級(jí)參數(shù)

2．2．4 3種崗梅種苗質(zhì)量分級(jí)方法的比較

用于質(zhì)量分級(jí)研究的崗梅藥材尚未到達(dá)采收年限，無法進(jìn)行藥材產(chǎn)量、質(zhì)量分析，而藥材人工種植生產(chǎn)迫切需要評價(jià)崗梅種苗質(zhì)量，故暫以成活率評價(jià)3種方法。從表9可見，移栽1年、2年后仍存活的崗梅苗中，種苗參數(shù)K－聚類和主成分評價(jià)因子K－聚類分級(jí)得到的3個(gè)等級(jí)種苗的存活率與原來的質(zhì)量級(jí)別相關(guān)，即質(zhì)量級(jí)別高的，存活率也高；存活種苗中一、二等苗分別占71．9%和74．7%。以標(biāo)準(zhǔn)差法分級(jí)得到的3個(gè)等級(jí)中及等外苗中，移栽1年后一等和三等苗的存活率較接近，二等種苗存活率最高；存活種苗中一、二等苗占36．9%。質(zhì)量等級(jí)為等外苗（屬不合格苗）的種苗存活率最低，僅為28．8%，占存活苗的18．1%?？梢娖浯婊盥逝c等級(jí)相關(guān)性較差。因此，目前的結(jié)果結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)需求來看，種苗參數(shù)K－聚類法是3種方法中最簡便實(shí)用的崗梅種苗質(zhì)量分級(jí)方法。

3 討 論

由于中藥材野生資源的貧乏，規(guī)?；N植藥材已成為保障市場和臨床應(yīng)用的必由之路，而種子種苗的質(zhì)量控制是源頭上保障藥材質(zhì)量的重中之重，因此藥用植物的種子種苗質(zhì)量研究被提上日程。已有的藥用植物種苗質(zhì)量分級(jí)研究中，主要采用了適合品種特征的參數(shù)測量結(jié)合K－聚類法進(jìn)行分類，和／或進(jìn)一步結(jié)合生產(chǎn)實(shí)踐確定適宜生產(chǎn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［4－10］。最后的定級(jí)標(biāo)準(zhǔn)除菊花等少數(shù)品種外較少有種苗標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量等級(jí)與藥材的產(chǎn)量或者質(zhì)量相關(guān)聯(lián)［11］。

崗梅人工馴化種植為新的崗梅藥材供應(yīng)形式，隨著市場需求將逐步擴(kuò)大，優(yōu)質(zhì)種子種苗是藥材生產(chǎn)的必要保障。本研究對崗梅種苗基地1年生崗梅種子實(shí)生苗移栽后進(jìn)行了追蹤觀察，根據(jù)測量的數(shù)據(jù)采用3種最常用分析方法進(jìn)行了質(zhì)量分級(jí)的探索。以移栽時(shí)崗梅種苗的株高、株徑和根長3個(gè)參數(shù)K－聚類并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際制定了種苗分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)移栽1年、2年后種苗成活情況進(jìn)行評價(jià)。結(jié)果表明，移栽時(shí)種苗等級(jí)越高，成活率也越高，可以作為崗梅1年生種子實(shí)生苗的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)使用。更符合藥材特性的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，有待藥材收獲后根據(jù)產(chǎn)量、質(zhì)量進(jìn)一步修訂。

表9 3種崗梅種苗質(zhì)量分級(jí)方法評價(jià)

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