烏雞白鳳丸對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性前列腺炎纖維化的影響

董亞楠1，張?chǎng)?*

(1.鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 鄭州 450064；2.河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471003)

摘要：目的探討烏雞白鳳丸對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性前列腺炎纖維化的影響。方法采用消痔靈注射液前列腺內(nèi)注射制作慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠模型。觀察各組大鼠前列腺病理學(xué)改變及組織纖維化程度。結(jié)果烏雞白鳳丸能減輕慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠前列腺的炎癥反應(yīng)和纖維化程度(P<0.05)。結(jié)論烏雞白鳳丸有改善大鼠慢性非細(xì)菌性前列腺炎纖維化的作用，其機(jī)制可能與降低TGF-β1的表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞：烏雞白鳳丸；慢性非細(xì)菌性前列腺炎；纖維化;大鼠

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.10.029

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1003-5699(2015)10-1068-03

基金項(xiàng)目:河南省教育廳2011年度自然科學(xué)研究計(jì)劃(2011A360001)。

作者簡(jiǎn)介:董亞楠(1987-)，女，碩士研究生，主要從事組織學(xué)科研工作研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：趙玉芝2014-11-11)

*通信作者:張?chǎng)?，電子信?xzzp@haust.edu.cn

Impact of Wujibaifengwan on prostatic fibrosis of rats with chronic nonbacterial prostatitis

DONG Yanan1,ZHANG Xin2*

(1.Zhengzhou Shuqing Medical College,Zhengzhou 450064,China;

2.Medical College of Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,Zhengzhou Province,China)

Abstract:ObjectiveTo study the impact of Wujibaifengwan on prostatic fibrosis of rats with chronic nonbacterial prostatitis (CNP).MethodsThe model of chronic nonbacterial prostatitis in rats was established by injecting into the prostates with Xiaozhiling solution.The prostatic pathological changes and fibrosis of rats were observed.ResultsThe inflammatory reactions and fibrosis of prostates in rats with chronic nonbacterial prostatitis had been improved after treated with Wujibaifengwan (P<0.05).ConclusionWujibaifengwan is effective to improve the fibrosis of rats with chronic nonbacterial prostatitis.The mechanism is probably related with the decrease production of TGF-β1.

Keywords:Wujibaifengwan;CNP;fibrosis;rat

烏雞白鳳丸處方來(lái)源于《壽世保元》中的烏雞丸，經(jīng)加減化裁而成，它雖是傳統(tǒng)的婦科良方，但依據(jù)中醫(yī)學(xué)“異病同治”“證同治同”的原則，已廣泛地應(yīng)用于婦科“經(jīng)”“帶”疾病以外的其他疾病的治療[1-2]。臨床有應(yīng)用烏雞白鳳丸治療前列腺炎的報(bào)道，但缺乏烏雞白鳳丸治療前列腺炎的機(jī)制研究[3-7]。本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)觀察烏雞白鳳丸對(duì)消痔靈所致的慢性非細(xì)菌性前列腺炎(CNP)大鼠前列腺間質(zhì)纖維化的影響并探討其作用機(jī)制，從而為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)健康雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量450～500 g，5月齡，由河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2主要藥品及試劑烏雞白鳳丸購(gòu)自北京同仁堂制藥廠；前列泰購(gòu)自陜西功達(dá)制藥有限公司；消痔靈注射液購(gòu)自吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公司；抗TGF-β1鼠源性單克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz；免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3儀器OLYMPUS光學(xué)顯微鏡，蛋白電泳儀及電轉(zhuǎn)儀。

1.4大鼠造模根據(jù)文獻(xiàn)[8-10]，實(shí)驗(yàn)大鼠用1%戊巴比妥鈉腹腔注射,無(wú)菌條件下取下腹正中切口，提出膀胱及兩側(cè)精囊，暴露附于精囊內(nèi)側(cè)的前列腺背葉，造模組(32只)分別注入25%的消痔靈注射液共0.25 mL，假手術(shù)組(8只)分別注入等量生理鹽水，腹腔噴慶大霉素注射液以防感染，縫合肌肉、皮膚。創(chuàng)口處涂紅霉素軟膏。

1.5分組與給藥1周后，將32只造模大鼠隨機(jī)分為4組:CNP模型對(duì)照組，烏雞白鳳丸低、高劑量組，前列泰治療對(duì)照組，各8只。假手術(shù)組、CNP模型組：以等量生理鹽水灌胃；烏雞白鳳丸低、高劑量組:以烏雞白鳳丸懸液5 mL/kg灌胃，分別相當(dāng)于1、2 g/kg生藥；前列泰治療對(duì)照組：以前列泰膠囊用蒸餾水配制成混懸液5 mL/kg灌胃，相當(dāng)于0.95 g/kg生藥。給藥1次/d，連用4周。

1.6取材末次給藥24 h后，處死大鼠，取前列腺組織，切取單側(cè)部分新鮮前列腺組織做Western Blotting；切取部分前列腺組織放入10%的中性福爾馬林溶液中固定24 h，做石蠟切片。

1.7檢測(cè)指標(biāo)

1.7.1病理學(xué)觀察肉眼觀察各組大鼠前列腺組織的顏色、硬度、大小、完整性等一般情況。取材、HE染色，光鏡下觀察大鼠前列腺的炎癥情況。

1.7.2Masson染色常規(guī)Masson染色，光學(xué)顯微鏡觀察拍照，用Image-proplus 6.0圖像分析軟件進(jìn)行自動(dòng)測(cè)量分析，前列腺纖維化相對(duì)面積=前列腺藍(lán)染面積/視野總面積×100%。

2結(jié)果

2.1病理學(xué)觀察假手術(shù)組大鼠前列腺表面紅潤(rùn)，腺體組織柔軟有彈性，結(jié)構(gòu)完整，與周圍組織無(wú)黏連，易與周圍組織剝離;CNP模型組腺體呈暗紅色或棕黃色，質(zhì)地較硬，彈性較差，與周圍組織黏連，體積較正常組較大，不易剝離；給藥各組與CNP模型組相比,前列腺質(zhì)地相對(duì)較軟，彈性較好，顏色鮮紅，與周圍組織的黏連程度較輕，個(gè)別大鼠前列腺組織與假手術(shù)組近似。光鏡下可見，假手術(shù)組前列腺腺泡上皮無(wú)增生或萎縮現(xiàn)象，腺腔不規(guī)則，腺腔內(nèi)有少量正常分泌物，間質(zhì)無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；CNP模型組前列腺腺腔擴(kuò)張,上皮變矮，排列較規(guī)則，腔內(nèi)分泌物增多，間質(zhì)疏松水腫、血管擴(kuò)張充血、有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；烏雞白鳳丸低劑量組、高劑量治療組腺腔輕度擴(kuò)張，腺上皮萎縮改善，腔內(nèi)有少量分泌物，炎癥明顯消退；前列泰治療對(duì)照組腺上皮有輕度萎縮，腺腔擴(kuò)張，腔內(nèi)分泌物較多，個(gè)別切片可見到少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

2.2Masson染色結(jié)果如圖1，光鏡下可見:假手術(shù)組大鼠前列腺間質(zhì)內(nèi)纖維結(jié)締組織很少;CNP模型組大鼠前列腺組織間質(zhì)內(nèi)纖維結(jié)締組織大量增生；治療之后，前列腺間質(zhì)內(nèi)纖維結(jié)締組織增生減輕。用圖像分析系統(tǒng)對(duì)Masson染色結(jié)果進(jìn)行半定量分析，結(jié)果見表1。

表1　各組大鼠前列腺纖維化相對(duì)面積比較 ± s, n=8)

注：與假手術(shù)組比較，##P<0.01；與CNP模型組比較，△P<0.05

注：A：假手術(shù)組；B：CNP模型組；C：烏雞白鳳丸低劑量組；D：烏雞白鳳丸高劑量組；E：前列泰治療對(duì)照組 圖1　烏雞白鳳丸對(duì)CNP大鼠前列腺組織纖維化的影響(Masson染色，400×)

3討論

慢性前列腺炎是一種十分常見的男性泌尿生殖系疾病，其中90%左右為慢性非細(xì)菌性前列腺炎[11]。慢性前列腺炎病理變化主要為前列腺腺泡萎縮、腺腔縮小、腔內(nèi)分泌物減少、間質(zhì)內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維組織增生，隨著病情的進(jìn)展，后期前列腺常常發(fā)生纖維化、質(zhì)地較硬、周圍炎性黏連重、解剖層次不清，可能是導(dǎo)致藥物不易進(jìn)入前列腺組織，療效較差的一個(gè)重要原因[12-13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在慢性非細(xì)菌性前列腺炎模型大鼠的前列腺組織內(nèi)有明顯的炎癥浸潤(rùn)和大量的纖維結(jié)締組織增生，表明模型復(fù)制成功。

烏雞白鳳丸以烏雞為主藥，配以當(dāng)歸、白芍、人參、黃芪、地黃、丹參等組成，具有理血通經(jīng)、活血化瘀、抗炎、改善微循環(huán)等作用[14-15]。在本實(shí)驗(yàn)中，烏雞白鳳丸治療組與慢性非細(xì)菌性前列腺炎模型組相比,前列腺組織纖維化情況有了明顯的改善,表明烏雞白鳳丸可以改善慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠前列腺的纖維化程度，從而治療慢性非細(xì)菌性前列腺炎。研究表明[16-18]，TGF-β1是一類強(qiáng)效的致纖維化因子，在器官纖維化中發(fā)揮重要的作用。免疫組織化學(xué)和Western Blotting的結(jié)果一致顯示TGF-β1在慢性非細(xì)菌性前列腺炎模型組大鼠前列腺組織中的表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組大鼠，經(jīng)烏雞白鳳丸治療后，大鼠前列腺組織中TGF-β1的表達(dá)量顯著低于模型組，并且烏雞白鳳丸高劑量組TGF-β1的表達(dá)量低于烏雞白鳳丸低劑量組。因此，我們認(rèn)為烏雞白鳳丸可以通過(guò)改善前列腺組織的纖維化來(lái)治療慢性非細(xì)菌性前列腺炎，其機(jī)制可能與烏雞白鳳丸降低前列腺組織內(nèi)TGF-β1的表達(dá)有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1]吳躍進(jìn).烏雞白鳳丸的藥理研究概況[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2005,12(8):100-102.

[2]吳春芝,谷福根,劉紅在.烏雞白鳳丸的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)藥業(yè),2010,19(22):88,Ⅰ-Ⅱ.

[3]孫楓.中藥治療慢性前列腺炎54例[J].吉林中醫(yī)藥,2008,28(6):396.

[4]張穎,紀(jì)曉寧,苗明三.常用婦科中藥治療前列腺炎、前列腺增生的探討[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2011,26(8):967-970.

[5]王建華,徐向英.升陷湯加減治療中氣下陷型前列腺增生60例[J].中國(guó)民間療法,2010,18(12):35.

[6]張風(fēng)梧.烏雞白鳳丸治療慢性前列腺炎100例[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2002,21(3):23.

[7]梁尚財(cái).中醫(yī)藥治療慢性前列腺炎50例[J].吉林中醫(yī)藥,2000,20(4):40.

[8]魏武然,張唯力,戴君勇.大鼠慢性非細(xì)菌性前列腺炎模型的建立[J].中國(guó)男科學(xué)雜志,2006,20(1):22-24.

[9]王春雨,陳真.慢性非細(xì)菌性前列腺炎動(dòng)物模型評(píng)析[J].藥學(xué)與臨床研究,2012,20(1):60-63.

[10]李萌.前列腺炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2012,18(4):567-570.

[11]WIYGUL R D.Prostatitis: epidemiology of inflammati-on[J].Current Prostate Reports,2005,3(4): 181-188.

[12]謝作鋼.鮑嚴(yán)鐘治療慢性前列腺炎經(jīng)驗(yàn)[J].天津中醫(yī)藥,2014,31(10):611-612.

[13]王養(yǎng)民,魯守琳,趙志強(qiáng),等.TGF-β1、Smad4在慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠模型前列腺組織中的表達(dá)及意義[J].中華男科學(xué)雜志,2010,16(6):490-494.

[14]陳榮,楊少華,黃湘.復(fù)方烏雞制劑的實(shí)驗(yàn)與臨床研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2000,7(5):13-14.

[15]陳三珍,胡錫元,彭連生.烏雞白鳳口服液扶正固本作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察[J].武漢市職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2000,28(2):23-25.

[17]丁明橋,許朝霞,陳瑞,等.銀杏葉提取物對(duì)肺纖維化大鼠模型血清PDGF及TGF-β1的影響[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(4):519-520.

[18]何偉明,高坤,周棟,等.丹參注射液對(duì)脂多糖致腹膜纖維化大鼠腹膜TGF-β1、MMP9、TIMP1的影響[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,28(1):25-29.