癢停擦劑抗炎止癢作用實(shí)驗(yàn)研究

張俊威，許慶瑞，霍金海，王偉明*

(黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院，哈爾濱 150036)

摘要：目的對癢停擦劑的抗炎、止癢和抗過敏作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。方法分別采用豚鼠局部瘙癢、二甲苯致小鼠耳腫、蛋清致大鼠足跖腫脹和小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型評價癢停擦劑止癢、抗炎及抗過敏作用。結(jié)果癢停擦劑能降低磷酸組胺所致豚鼠局部瘙癢的閾值(P<0.01)；減輕二甲苯所致小鼠耳腫脹率和蛋清致大鼠足跖腫程度(P<0.05，P<0.01)；降低5%DNCB至小鼠耳廓遲發(fā)性超敏反應(yīng)模型的耳腫程度(P<0.01)。結(jié)論癢停擦劑具有止癢、抗炎、抑制遲發(fā)超敏反應(yīng)及調(diào)節(jié)免疫功能的藥理作用。

關(guān)鍵詞：癢停擦劑；止癢；抗感染；遲發(fā)超敏反應(yīng)

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.05.024

中圖分類號：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)05-0511-04

基金項(xiàng)目:黑龍江省應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(PC13S18)。

作者簡介:張俊威(1973-),女,碩士,副研究員,從事中藥藥理研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：張瑞彬2014-08-15)

*通信作者:王偉明，電話-(0451)55665478，電子信箱-yjs-163163@163.com

Effect of Yangting embrocation anti-inflammatory and anti-pruritus

ZHANG Junwei,XU Qingrui,HUO Jinhai,WANG Weiming*

(Heilongjiang Academy of Traditional Chinese Medicine,Harbin 150036,China)

Abstract:ObjectiveStudy on the pharmacological effect of Yangting embrocation anti-inflammatory,anti-pruritus and antianaphylaxis.MethodsRespectively used Guinea pigs to the local itching,mice ear swelling caused by xylene and egg white in rats foot metatarsus swelling and delayed-type hypersensitivity in mice model to evaluate stop itch liniment itching,anti-inflammatory and anti-allergic effects.ResultsYangting embrocation could increase itch-threshold of cavy caused by histamine phosphate (P<0.01),reduce the rate of mouse ear swelling caused by xylene and egg white degree of swell in rats (P<0.05,P<0.01),reduce 5% DNCB to mice auricle late-onset allergic reaction model of the ear swelling degree (P<0.01).ConclusionYangting embrocation has the pharmacological effects of anti-pruritus,anti-inflammatory,antianaphylaxis,inhibiting delayed-type hypersensitivity and adjusts the immune function.

Keywords:Yangting embrocation;anti-pruritus;anti-infection;delayed-type hypersensitivity

癢停擦劑由冰片、黃柏、苦參、百部、地膚子等組成，為中藥外用酊劑，具有清熱除濕殺蟲，疏風(fēng)止癢作用，用于濕疹、皮膚瘙癢癥、蕁麻疹及過敏性皮炎等癥。癢停擦劑做為黑龍江省中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑在臨床應(yīng)用多年，具有良好的療效。本實(shí)驗(yàn)分別采用磷酸組胺致豚鼠局部瘙癢模型、二甲苯致小鼠耳腫、蛋清致大鼠足跖腫脹及2，4-二硝基氯苯(DNCB)致小鼠耳廓遲發(fā)性超敏反應(yīng)模型從止癢、抗炎和抗過敏作用等方面觀察癢停擦劑的藥效，為臨床應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1受試藥物及試劑癢停擦劑(受試藥)，黑龍江省中醫(yī)醫(yī)院制劑室，批號：100302。復(fù)方醋酸曲安奈德溶液(陽性對照藥)，廣東恒誠制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H10930202。40%乙醇溶液(溶劑對照)。生理鹽水，哈爾濱三聯(lián)醫(yī)藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H23020612，批號：080513A17。2，4-二硝基氯苯(DNCB)，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號：20070713。

1.2動物清潔級ICR小鼠，18～22 g，雌雄兼用；清潔級Wistar大鼠，180～220 g,雌雄兼用，均由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院試驗(yàn)動物中心提供，合格證號SCXK-(吉)2007-0003。普通級豚鼠,250～350 g，雌雄各半，由哈爾濱市松北區(qū)華宇養(yǎng)殖場提供，合格證號SCXK-(黑)2007-003。實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施使用許可證號：(黑)2006-040。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1對豚鼠局部瘙癢的影響豚鼠36只，體質(zhì)量200～250 g，常規(guī)飼養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為6組,分別為癢停擦劑高、中、低劑量組，陽性對照藥組，溶劑對照組和空白對照組，每組6只,雌雄各半。將各組豚鼠右后足背剃毛，用粗砂紙輕輕擦傷豚鼠剃毛處，形成面積1 cm×1 cm的表皮破損創(chuàng)面。各組豚鼠按實(shí)驗(yàn)所設(shè)劑量于創(chuàng)面處涂抹相應(yīng)藥物:癢停擦劑高、中、低劑量組分別涂抹癢停擦劑0.1，0.05，0.025 mL；陽性對照藥組涂抹復(fù)方醋酸曲安奈德溶液0.05 mL；溶劑對照組涂抹40%乙醇溶液0.05 mL；空白對照組涂抹等容積的生理鹽水0.05 mL。給藥30 min后在創(chuàng)面處滴0.01%磷酸組織胺0.05 mL/只，此后每隔3 min按0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%遞增濃度,至出現(xiàn)豚鼠回頭舔后足為止。累計(jì)各組每只豚鼠所用磷酸組胺總量(μg)為致癢閾,以給藥后的致癢閾為評價指標(biāo)。如滴至0.1%磷酸組織胺豚鼠仍未舔后足，則以滴加總量為致癢閾。

2.2對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響清潔級ICR小鼠60只，體質(zhì)量18～22 g，常規(guī)飼養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為6組，組別同實(shí)驗(yàn)2.1，每組10只，雌雄各半。各組小鼠按實(shí)驗(yàn)所設(shè)劑量于右耳涂抹相應(yīng)藥液：癢停擦劑高、中、低劑量組分別涂抹癢停擦劑0.1、0.05、0.025 mL；陽性對照藥組涂抹復(fù)方醋酸曲安奈德溶液0.05 mL；溶劑對照組涂抹40%乙醇溶液0.05 mL；空白對照組涂抹等容積的生理鹽水0.05 mL。給藥30 min后，將二甲苯0.05 mL均勻涂于小鼠右耳，30 min后剪下左右耳廓，用打孔器同時取下兩耳片稱重，按下式計(jì)算小鼠耳腫脹率。

2.3對蛋清致大鼠足跖腫脹的影響[5]清潔級Wistar大鼠60只，體質(zhì)量180～220 g，常規(guī)飼養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為6組，組別同實(shí)驗(yàn)2.1，每組10只，雌雄各半。各組大鼠按給藥劑量設(shè)計(jì)于右后足涂抹相應(yīng)藥液，給藥劑量同實(shí)驗(yàn)2.1。涂藥后30 min在大鼠右后肢足跖皮下注射新鮮的10%蛋清溶液0.1 mL/只，分別于致炎后0.5、1、2、4 h用無彈性的軟皮尺測量踝關(guān)節(jié)周長，計(jì)算足跖腫脹率(%)。

2.4對DNCB致小鼠耳廓遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響清潔級ICR小鼠70只，正常飼養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為7組，分別為癢停擦劑高、中、低劑量組，陽性對照藥組，溶劑對照組，模型對照組和空白對照組，每組10只，雌雄各半。各組小鼠致敏前24 h腹部去毛(3 cm×3 cm)，同時于小鼠左耳涂抹相應(yīng)劑量藥液，1次/d，連續(xù)9 d。給藥劑量同實(shí)驗(yàn)2.1，模型對照組涂抹0.05 mL的生理鹽水溶液。給藥第2天各組小鼠致敏：除空白對照組外，其余小鼠于腹部去毛處均勻涂抹5%的2，4-二硝基氯苯(DNCB)丙酮液致敏，空白對照組涂抹等容積的生理鹽水，2 d后強(qiáng)化1次。給藥第9天，小鼠左耳涂抹藥液30 min后，將1%DNCB丙酮液均勻涂于小鼠左耳正反兩面，建立Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)小鼠動物模型(空白對照組涂抹生理鹽水)。于涂抹DNCB溶液1 h后處死小鼠，稱體質(zhì)量，取其胸腺、脾臟稱重，計(jì)算臟器指數(shù)；取下雙耳耳片稱重，計(jì)算耳腫脹度。

3結(jié)果與結(jié)論

3.1對豚鼠局部瘙癢的影響與空白對照組比較，陽性對照藥組和癢停擦劑各劑量組的致癢閾明顯升高，均具有極顯著差異(P<0.01)，癢停擦劑各組的止癢作用隨著給藥劑量的增加而增強(qiáng)，呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系；溶劑對照組致癢閾雖高于空白組但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與溶劑對照組比較，癢停擦劑各劑量組致癢閾明顯升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。提示癢停擦劑可以提高磷酸組胺對豚鼠的致癢閾，具有明顯的止癢作用，而溶劑不具有止癢作用。結(jié)果見表1。

3.2對小鼠耳腫脹率的影響與空白對照組比較，陽性對照藥組和癢停擦劑各劑量組的小鼠耳腫脹率明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。癢停擦劑各劑量組的耳腫脹率隨著劑量的增加而降低，提示癢停擦劑具有抗炎作用且呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。溶劑對照組與空白對照組比較，耳腫率明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但與癢停擦劑各劑量組比較，耳腫脹率明顯升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。說明雖然40%乙醇溶劑有抗炎作用,但其抗炎效果明顯弱于全方，提示癢停擦劑的主要抗炎有效成分來自于全方中溶于乙醇的各藥物組分。結(jié)果見表2。

表1　癢停擦劑對豚鼠局部瘙癢模型的影響 ± s, n=6)

注:與空白對照組比較,## P<0.01;與溶劑對照組比較,△△ P<0.01

注：與空白對照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與溶劑組比較，△P<0.05，△△P<0.01

3.3對大鼠足跖腫脹程度的影響與空白對照組比較，各給藥組大鼠的足跖腫脹程度均有不同程度的減輕，尤其是陽性對照組和癢停擦劑中、高劑量組，致炎后0.5 h即可明顯減輕10%蛋清引起的大鼠足腫程度并持續(xù)至4 h，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)；溶劑對照組的足腫程度雖有降低，但至2 h后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與溶劑對照組比較，癢停擦劑各劑量組大鼠足腫程度均減輕，尤以中、高劑量組顯著(P<0.05，P<0.01)。提示癢停擦劑及其溶劑均具有抗炎作用。40%乙醇溶劑雖有一定的抗炎作用,但起效較慢，抗炎效果較弱。而癢停擦劑全方的抗炎作用起效快，作用時間持久，能快速、持續(xù)抑制炎癥引起的腫脹。 結(jié)果見表3。

表3　癢停擦劑對大鼠足跖腫脹程度的影響 ± s, n=10)

注：與空白對照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與溶劑對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01

3.4對DNCB致小鼠耳廓遲發(fā)超敏反應(yīng)的影響與空白對照組比較，模型對照組小鼠耳腫脹程度明顯升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明DNCB致敏1周后經(jīng)致敏源激發(fā)可引起小鼠遲發(fā)超敏反應(yīng)，模型復(fù)制成功。與模型對照組比較，陽性對照組和癢停擦劑各劑量組小鼠耳廓腫脹程度均明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),且癢停擦劑各劑量組的腫脹程度隨著癢停擦劑給藥劑量的增加而降低，呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。提示癢停擦劑具有抑制遲發(fā)超敏反應(yīng)的作用。陽性對照組小鼠的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)與空白對照組比較明顯降低，胸腺指數(shù)具有極顯著差異(P<0.01)。提示陽性對照藥復(fù)方醋酸曲安奈德溶液可能是通過抑制T淋巴細(xì)胞的增殖而減輕超敏反應(yīng)程度,具有免疫抑制作用。而癢停擦劑各劑量組的耳腫程度雖然明顯降低，但對致敏小鼠的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)均無影響，說明癢停擦劑雖然可以抑制Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)引起的耳腫脹程度，但對機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫功能均無抑制作用。結(jié)果見表4。

表4　癢停擦劑對小鼠耳廓遲發(fā)超敏反應(yīng)耳腫脹程度的影響 ± s, n=10)

注：與模型對照組比較，##P<0.01；；與溶劑對照組比較，△P<0.05,△△P<0.01

4討論

中醫(yī)認(rèn)為多因濕熱內(nèi)蘊(yùn)，復(fù)感風(fēng)邪，濕熱互結(jié)化燥生風(fēng)致癢，或濕熱郁久化生為蟲致癢，所以止癢的關(guān)鍵在于“除濕熱”，外治法則以清熱燥濕祛風(fēng)，殺蟲止癢為主[1-2]。黃柏苦寒為君，外用能燥濕斂瘡；冰片苦辛性涼為臣，外用能清熱消腫、止癢止痛，苦參清熱燥濕，地膚子祛風(fēng)止癢，百部外用止癢殺蟲，共為佐劑。5味藥以活血行血，驅(qū)風(fēng)散寒的酒劑為使，緩和諸藥的寒性，共行清熱除濕殺蟲，疏風(fēng)止癢之功效。

本實(shí)驗(yàn)中，癢停擦劑能顯著提高組胺引起的豚鼠皮膚瘙癢的致癢閾，且呈現(xiàn)出較好的量效關(guān)系，提示全方具有良好的抗組胺止癢效果。

急性炎癥是濕疹、蕁麻疹及過敏性皮炎等皮膚疾病的共同臨床癥狀。通過二甲苯致小鼠耳腫和蛋清致大鼠足跖腫脹實(shí)驗(yàn)證實(shí)，癢停擦劑能降低化學(xué)物質(zhì)引起的皮膚急性炎癥反應(yīng)程度，具有抗炎作用并呈現(xiàn)出較好的量效關(guān)系。

過敏是皮膚病的主要病因之一，目前多認(rèn)為濕疹的發(fā)病機(jī)理是由復(fù)雜的內(nèi)外激發(fā)因子引起的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)[3]。通過DNCB致敏并激發(fā)復(fù)制小鼠遲發(fā)變態(tài)反應(yīng)模型，測量激發(fā)后小鼠的耳腫脹程度和免疫器官系數(shù)的變化，觀察藥物對遲發(fā)超敏反應(yīng)的抑制程度及機(jī)體免疫機(jī)能的影響。

本實(shí)驗(yàn)陽性對照藥采用的是復(fù)方醋酸曲安奈德溶液，為醋酸曲安奈德和水楊酸的復(fù)方制劑。曲安奈德是中強(qiáng)氟化糖皮質(zhì)激素，具有外用皮質(zhì)激素的抗炎、抗過敏及收縮血管的作用，但長期使用會造成激素的依賴性[4]。

通過動物實(shí)驗(yàn)觀察，證實(shí)癢停擦劑和復(fù)方醋酸曲安奈德溶液都具有良好的抗炎、止癢、抗過敏作用，但癢停擦劑對急性炎癥的抑制不僅起效更快，抑制程度更強(qiáng)而且作用時間更長；復(fù)方醋酸曲安奈德溶液屬于激素類制劑，具有免疫抑制功能，通過對細(xì)胞免疫功能的抑制作用降低遲發(fā)超敏反應(yīng)引起的腫脹程度，表現(xiàn)為陽性對照組的胸腺指數(shù)明顯降低。長期使用可引起機(jī)體免疫功能的降低，增加感染機(jī)率。而癢停擦劑不僅消腫作用強(qiáng)而且對脾指數(shù)和胸腺指數(shù)均無影響，說明其對機(jī)體免疫功能無抑制作用。

參考文獻(xiàn)：

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[3]郭青云,潘成軍,林清,等.復(fù)方黃倍軟膏抗過敏及止癢作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報,2013,29(1):39-41.

[4]李衛(wèi)紅,徐植園.姜黃酊治療丘疹鱗屑型足癬療效觀察[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2008,24(1):94-96.