■ 曾本和 楊文嬌 吳 振 徐順寬 呂光俊 向 梟

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)水產(chǎn)系淡水魚(yú)類資源與生殖發(fā)育教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室水產(chǎn)科學(xué)重慶市市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川重慶 402460；2.唐山托普生物科技有限公司，河北唐山 063021）

加州鱸學(xué)名大口黑鱸（Micropterus salmoides），屬鱸形目，太陽(yáng)魚(yú)科，是我國(guó)主要的淡水名特優(yōu)養(yǎng)殖品種之一[1]。目前，加州鱸養(yǎng)殖中大部分投喂冰鮮小雜魚(yú)[2]，近年來(lái)由于冰鮮小雜魚(yú)資源的逐漸減少，導(dǎo)致加州鱸養(yǎng)殖在一定程度上受到了限制[3]。因此發(fā)展人工配合飼料來(lái)養(yǎng)殖加州鱸是大勢(shì)所趨[4]。酵母水解物（yeast hydrolyzate，YHY）采用新鮮啤酒酵母為原料，經(jīng)除雜、自溶、酶解、噴霧干燥等工藝精制而成[5]。曾本和等發(fā)現(xiàn)，酵母水解物可顯著提高草魚(yú)（Ctenopharyngodon idellus）幼魚(yú)的生長(zhǎng)速度和飼料蛋白質(zhì)效率，降低其飼料系數(shù)[6]；柳茜等[5]研究表明，添加1.0%～3.0%的酵母水解物可顯著提高大菱鲆（Scophthalmus maximus）肝臟的抗氧化能力。用1.0%的酵母水解物替代33.33%魚(yú)粉時(shí)，異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）的增重率較對(duì)照組提高了8.16%，且顯著提高了其機(jī)體免疫能力[7]；周慧琦等[8]在基礎(chǔ)日糧中添加0.3%的酵母水解物飼養(yǎng)母豬至仔豬21日齡斷奶結(jié)束發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組仔豬斷奶時(shí)存活率較對(duì)照組提高了7.49%、母豬日采食量提高了3.8%，母豬的泌乳量提高了14.9%。本試驗(yàn)在飼料中添加酵母水解物，研究其對(duì)加州鱸生長(zhǎng)性能和免疫能力的影響，以期為YHY在水產(chǎn)飼料中的推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用加州鱸購(gòu)自重慶水產(chǎn)研究所試驗(yàn)漁場(chǎng)，為同一批繁殖的幼魚(yú)，5%的食鹽水消毒后于暫養(yǎng)池暫養(yǎng)2周，暫養(yǎng)期間投喂商品飼料。

試驗(yàn)用酵母水解物由唐山拓普生物科技有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)飼料

表1 試驗(yàn)飼料配方及主要營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）（%）

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與管理

選取健康、規(guī)格整齊的加州鱸540尾[初始均質(zhì)量（3.92±0.15）g]隨機(jī)放入18個(gè)水族箱（2.1 m×1.2 m×0.8 m）中。隨機(jī)分為6組，每組設(shè)3重復(fù)，每個(gè)重復(fù)投放30尾魚(yú)。分別投喂添加不同比例酵母水解物的試驗(yàn)飼料，養(yǎng)殖周期為60 d。養(yǎng)殖期間每天表觀飽食投喂3次，投餌1 h后將殘餌撈出烘干稱重并扣除。試驗(yàn)用水為經(jīng)過(guò)曝氣的自來(lái)水，試驗(yàn)期間保持微流水。試驗(yàn)期間，溶氧高于6 mg/l，水溫維持在26～28℃，pH值為7.0～7.5，氨氮含量小于0.3 mg/l。

1.4 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后分別在各試驗(yàn)組中隨機(jī)取10尾試驗(yàn)加州鱸，用50 mg/l的MS-222溶液麻醉，分別測(cè)定其體長(zhǎng)和體質(zhì)量后，解剖并取分離出其肝胰臟。參照葉元土等[9]的方法制備肝胰臟粗酶液。

1.5 指標(biāo)測(cè)定

1.5.1 生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定

試驗(yàn)之前，測(cè)定各組試驗(yàn)魚(yú)的初始體重，試驗(yàn)結(jié)束后，停食1 d，測(cè)定各組試驗(yàn)魚(yú)末體重，依據(jù)養(yǎng)殖期間飼料的投喂量、飼養(yǎng)時(shí)間及試驗(yàn)前后魚(yú)的體質(zhì)量計(jì)算其增重率（WGR）、特定生長(zhǎng)率（SGR）、蛋白質(zhì)效率（PER）和飼料系數(shù)（FCR）。

增重率（WGR，%）=（W2-W1）/W1×100；

特定生長(zhǎng)率（SGR，%/d）=（LnW2-LnW1）/t×100；

蛋白質(zhì)效率（PER，%）=（W2-W1）/（F×P）×100；

飼料系數(shù)（FCR）=F/（W2-W1）；

經(jīng)病理證實(shí)，42例疑似乳腺病變患者中，陽(yáng)性共計(jì)32例，陰性10例；乳腺M(fèi)R動(dòng)態(tài)增強(qiáng)單一檢查中，陽(yáng)性25例，陰性17例；乳腺M(fèi)R動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描聯(lián)合擴(kuò)散加權(quán)成像檢查中，陽(yáng)性31例，陰性11例。詳情見(jiàn)表1。

成活率（SR，%）=N2/N1×100。

式中：W1——試驗(yàn)魚(yú)初體重（g）；

W2——試驗(yàn)魚(yú)末體重（g）；

F——飼料攝入量（g）；

P——飼料粗蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）；

t——養(yǎng)殖天數(shù)（d）；

N1——試驗(yàn)初魚(yú)的尾數(shù)；

N2——試驗(yàn)?zāi)~(yú)的尾數(shù)。

1.5.2 免疫指標(biāo)的測(cè)定

采用磷酸苯二鈉法測(cè)定堿性磷酸酶（alkaline Phosphatase，ALP）和酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）[10]。ALP酶活性單位定義為：以每克肝組織反應(yīng)液在37℃與底物作用30 min，產(chǎn)生1 mg酚者為一個(gè)酶活力單位（U/g）；ACP酶活性單位定義為：以每克肝組織反應(yīng)液在37℃與底物作用30 min，產(chǎn)生1 mg酚者為一個(gè)酶活力單位（U/g）。采用連苯三酚自氧化法測(cè)定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD），SOD活性單位定義為：1 g肝組織反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)到50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量（U/g）[11]。

1.6 數(shù)據(jù)處理和分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以Excel 2010計(jì)算，采用SPSS 19.0中one-way ANOVA方差分析，若差異顯著，再進(jìn)行Duncan's多重比較，差異顯著水平為P＜0.05。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Means±SE）”表示。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 加州鱸生長(zhǎng)性能（見(jiàn)表2）

表2 酵母水解物對(duì)加州鱸生長(zhǎng)性能的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）

由表2可知，隨著YHY的增加，加州鱸的增重率（WGR）、特定生長(zhǎng)率（SGR）呈先升高后降低的變化趨勢(shì)，且均在酵母水解物添加量為1.3%時(shí)達(dá)到最高，分別為359.54%、2.54%/d，WGR除與YHY添加量為1.7%的試驗(yàn)組差異不顯著外（P＞0.05），顯著高于其他試驗(yàn)組（P＜0.05）。SGR除與YHY添加量為1.7%和2.1%的試驗(yàn)組差異不顯著外（P＞0.05），顯著高于其他試驗(yàn)組（P＜0.05）；蛋白質(zhì)效率（PER）呈先升高后趨于穩(wěn)定的變化趨勢(shì)。PER在酵母水解物添加量為1.3%時(shí)達(dá)到最高（236.97%），顯著高于YHY添加量為0～0.5%的試驗(yàn)組（P＜0.05），但與其他試驗(yàn)組差異不顯著（P＞0.05）；而飼料系數(shù)（FCR）則隨YHY添加量的升高呈先降低后趨于穩(wěn)定的變化趨勢(shì)，且在YHY添加量為1.7%的試驗(yàn)組達(dá)到最低（為1.35），顯著低于酵母水解物添加水平為0%～0.5%的各試驗(yàn)組（P＜0.05），酵母水解物添加水平大于1.7%時(shí)差異不顯著（P＞0.05）。以酵母水解物為自變量，WGR、SGR、PER、FCR為因變量，由曲線回歸可知（圖1～圖4），試驗(yàn)魚(yú)的WGR的回歸方程為：Y=-43.786X3+124.04X2-51.666X+298.76（R2=0.816 4）；SGR 的回歸方程為：Y=-0.179 2X3+0.500 8X2-0.208 3X+2.306 3（R2=0.826 3）；PER的回歸方程為：Y=-2.672 9X3-37.161X2+131.6X+134.24（R2=0.944）；FCR的回歸方程為：Y=0.252 4X3-0.663 7X2+0.085 6X+1.837 7（R2=0.938 5）。則加州鱸生長(zhǎng)性能WGR、SGR、PER、FCR最優(yōu)時(shí)YHY添加量分別為1.65%、1.62%、1.51%和1.69%。因此滿足加州鱸的WGR、SGR、PER和FCR最佳的YHY的添加水平為1.51%～1.69%。各試驗(yàn)組的成活率差異不顯著（P＞0.05）。

圖1 加州鱸特定生長(zhǎng)率與酵母水解物添加水平的關(guān)系

圖2 加州鱸增重率與酵母水解物添加水平的關(guān)系

圖3 加州鱸蛋白質(zhì)效率與酵母水解物添加水平的關(guān)系

圖4 加州鱸飼料系數(shù)與酵母水解物添加水平的關(guān)系

2.2 加州鱸肝臟免疫酶指標(biāo)（見(jiàn)表3）

表3 酵母水解物對(duì)加州鱸免疫酶指標(biāo)的影響（U/g）

由表3可知，加州鱸肝臟堿性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）和超氧化物歧化酶（SOD）活性均隨著飼料中YHY添加量的升高而呈先升高后逐漸趨于穩(wěn)定的變化趨勢(shì)。ALP在YHY的添加量為1.3%時(shí)最高（63.69 U/g），顯著高于對(duì)照組，但YHY添加量為1.3%～2.1%時(shí)，各試驗(yàn)組的差異不顯著（P＞0.05）；ACP、SOD活性均在YHY的添加量為1.7%時(shí)最高，分別為33.18 U/g和281.69 U/g，顯著高于對(duì)照組，但在YHY添加量為1.3%～2.1%時(shí)差異也不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 酵母水解物與加州鱸生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)中，YHY添加水平在0～2.1%時(shí)，加州鱸的WGR、SGR呈先升后降的趨勢(shì)，PER呈先升高后趨于穩(wěn)定的變化趨勢(shì)，而FCR則呈先降低后趨于穩(wěn)定的變化趨勢(shì)。說(shuō)明YHY能顯著提高加州鱸的生長(zhǎng)速度和飼料蛋白質(zhì)效率，提高其飼料利用率；且加州鱸生長(zhǎng)性能最優(yōu)時(shí)酵母水解物的適宜添加量為1.51%～1.69%。陳昌福等[12]報(bào)道，在飼料中添加1 000～2 000 mg/kg的酵母水解物對(duì)中華鱉有明顯的誘食效果，提高其飼料攝食量，促進(jìn)其生長(zhǎng)；在草魚(yú)幼魚(yú)飼料中添加1.53%～1.75%的酵母水解物可顯著提高其增重率和飼料蛋白質(zhì)效率，降低其飼料系數(shù)[6]；劉哲等[13]認(rèn)為，酵母培養(yǎng)物能提高建鯉的增重率，降低其飼料系數(shù)。羅氏沼蝦（Macrobrachium rosenbergii）飼料中添加0.5%的酵母培養(yǎng)物時(shí)的產(chǎn)量較對(duì)照組高15%[14]；分別用酵母提取物替代15%～100%魚(yú)粉的飼料養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）能顯著提高消化道中各種消化酶的活性，提高飼料干物質(zhì)和粗蛋白的表觀消化率，降低飼料系數(shù)[15]。與本研究結(jié)果基本一致。其原因可能是由于酵母水解物所含的豐富小肽、游離氨基酸等活性物質(zhì)，具有提高飼料的適口性，提高魚(yú)類的攝食量[16-17]，同時(shí)其中含有的β-葡聚糖、小肽等可提高魚(yú)類小腸微絨毛高度及吸收面積[18-19]，從而提高了魚(yú)類對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化利用率，提高其生長(zhǎng)速度。但李自金等研究發(fā)現(xiàn)，酵母培養(yǎng)物對(duì)草魚(yú)的增重率和飼料系數(shù)無(wú)明顯影響[20]，這可能與試驗(yàn)飼料成分、養(yǎng)殖品種、試驗(yàn)動(dòng)物的生長(zhǎng)階段、酵母的來(lái)源及組成等有關(guān)。

3.2 酵母水解物對(duì)加州鱸免疫能力的影響

酵母水解物因其富含核苷酸、B族維生素等功能性物質(zhì)，可提高魚(yú)機(jī)體免疫能力，作為水產(chǎn)動(dòng)物的免疫增強(qiáng)劑[21]。周小秋等[22]認(rèn)為，B族維生素可以通過(guò)提高血清ACP活性增強(qiáng)魚(yú)體殺菌能力，促進(jìn)白細(xì)胞吞噬作用，增強(qiáng)魚(yú)體的非特異性免疫力。酵母水解物含有豐富的甘露寡糖和β-葡聚糖，這些物質(zhì)能改善腸道微生態(tài)，很大程度上增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的非特異性免疫能力[23]。酵母水解物中含有酵母細(xì)胞壁多糖，能刺激免疫，促進(jìn)免疫器官發(fā)育[24]。ALP和ACP是兩種重要的水解酶，對(duì)細(xì)菌等異物在溶酶體內(nèi)的消化降解具有重要作用[5]；而SOD則可消除體內(nèi)多余的自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。當(dāng)動(dòng)物機(jī)體SOD活性降低時(shí)，自由基將在體內(nèi)積累[25]。本試驗(yàn)1.3%組的ALP活性最高，1.7%組的ACP活性最高，隨著飼料中酵母水解物含量進(jìn)一步提高，逐漸趨于穩(wěn)定；而SOD活性在YHY添加水平低于1.3%時(shí)隨YHY添加水平的升高而增強(qiáng)，當(dāng)YHY添加水平超過(guò)1.3%后逐漸趨于穩(wěn)定。適宜的酵母水解物添加水平可有效提高大菱鲆肝臟ALP、SOD、ACP及總抗氧化能力，提高其免疫能力[5]；楊凡等[7]報(bào)道，異育銀鯽飼料中添加1.0%的酵母水解物可顯著提高其體內(nèi)白細(xì)胞吞噬比例和吞噬指數(shù)，提高了機(jī)體免疫力。王武剛等[15]發(fā)現(xiàn)，用酵母提取物替代配方中15%的魚(yú)粉可顯著提高凡納濱對(duì)蝦血清溶菌酶活性；飼料中添加酵母核苷酸可顯著提高凡納濱對(duì)蝦肌肉SOD、POD活性[26]。說(shuō)明酵母水解物可有效改善水產(chǎn)動(dòng)物的免疫能力。

4 結(jié)論

飼料中添加適量的YHY能提高加州鱸生長(zhǎng)性能，增強(qiáng)其免疫能力。為了獲得最佳的養(yǎng)殖效益和增強(qiáng)其免疫能力，建議加州鱸飼料中YHY的添加水平應(yīng)為1.51%～1.69%。