■ 陳善真 李其昌 趙 敏 劉博奇 王志花 楊 潔 王貴平 錢雪橋 陳克宏

（1.廣東海大集團(tuán)股份有限公司，廣東廣州 511400；2.廣東海大畜牧獸醫(yī)研究院，廣東廣州 511400）

維生素E是魚類的重要營(yíng)養(yǎng)成分之一，目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其生理作用及理化性質(zhì)研究的比較透徹[1-3]。維生素E作為水產(chǎn)動(dòng)物的抗氧化劑，在促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)、提高水產(chǎn)動(dòng)物的繁殖性能、免疫能力，以及改善水產(chǎn)動(dòng)物的肉品質(zhì)等多方面均可發(fā)揮作用[4-8]。目前國(guó)內(nèi)的維生素E供應(yīng)主要依賴化學(xué)合成，多數(shù)廠家均是以間甲酚等為基礎(chǔ)原料，經(jīng)過(guò)20多步化學(xué)反應(yīng)制備，生產(chǎn)成本較高，因此維生素E原料的價(jià)格居高不下，而維生素E又是動(dòng)物飼料中必需添加的重要營(yíng)養(yǎng)成分[9-10]，其價(jià)格的高低對(duì)飼料成品的價(jià)格有直接影響。維生素E類似物的研究近幾年較多[11]。本研究擬測(cè)試一種生產(chǎn)成本低廉且分子量較小的新型維生素E類似物（VEa）的生物活性，通過(guò)測(cè)定其對(duì)異育銀鯽的生長(zhǎng)性能、血液、組織生化指標(biāo)及抗氧化能力的影響，驗(yàn)證其是否可在水產(chǎn)動(dòng)物的代謝和生長(zhǎng)中發(fā)揮同樣作用，又可降低原料生產(chǎn)成本或是在飼料中的添加量，從而達(dá)到降低飼料中維生素E添加成本的目的，同時(shí)確定維生素E類似物在異育銀鯽飼料中的添加量。

1 材料與方法

1.1 試劑與飼料

新型維生素E類似物，由烏克蘭國(guó)家研究院生化實(shí)驗(yàn)室提供。采用商用飼料配方，其中包含基礎(chǔ)日糧和其他多維。1號(hào)為正對(duì)照，VE含量為150 mg/kg；2號(hào)為負(fù)對(duì)照，即普通多維商用飼料，VE含量為0 mg/kg；3～8號(hào)為試驗(yàn)組，在去除維生素E的普通多維飼料基礎(chǔ)上分別加入20、40、60、80、120 mg/kg和150 mg/kg的VEa，以上試驗(yàn)飼料均由廣東海大集團(tuán)金禾飼料廠按商用飼料生產(chǎn)工藝制作生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)魚的飼養(yǎng)與管理

試驗(yàn)所用異育銀鯽為廣東海大集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)，品種為中科三號(hào)異育銀鯽。試驗(yàn)采用循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)，選取規(guī)格整齊、初始體重為（5.74±0.024）g，表觀健康的試驗(yàn)魚720尾，隨機(jī)分養(yǎng)于24個(gè)水族箱中，每種飼料組設(shè)3個(gè)平行組，每個(gè)平行組30尾魚。先以基礎(chǔ)商用飼料訓(xùn)食，每天飽食投喂2次，暫養(yǎng)1周后，分組改用試驗(yàn)飼料投喂，試驗(yàn)周期為16周。每天飽食投喂兩次（9：00和15：00），投喂后1 h，收殘餌，烘干稱重，記錄每天的攝食及魚的存活情況。試驗(yàn)水源為過(guò)濾、消毒曝氣后的自來(lái)水，采用白熾燈作為光源，12 h光照，12 h黑暗。試驗(yàn)期間控制溶解氧大于6 mg/l、氨氮濃度小于0.5 mg/l、pH值為7.5。

1.3 樣品的采集

試驗(yàn)開(kāi)始前與結(jié)束后分別取樣，取樣前24 h停止投喂餌料，對(duì)每個(gè)水族箱中的鯽魚隨機(jī)選取6尾稱重、測(cè)量體長(zhǎng)，記錄生長(zhǎng)情況，計(jì)算增重率、攝食量、飼料系數(shù)以及存活率等。隨即在準(zhǔn)備好的冰盤上進(jìn)行血液、肝臟和肌肉樣品的采集。隨機(jī)取5尾進(jìn)行采血，用1 ml無(wú)菌注射器尾靜脈采血，采血后立刻轉(zhuǎn)移至用肝素鈉浸潤(rùn)過(guò)的滅菌1.5 ml離心管中，輕輕振蕩混勻，冰盒內(nèi)保存，將抗凝血4℃、3 000 r/min離心10 min，取其上清液，-80℃保存?zhèn)溆?；解剖后取完整肝臟，搗碎、勻漿、離心，制備上清液，置于-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆?；取其背部肌肉樣品稱重后置于105℃干燥箱中烘干，稱重后粉碎，按照國(guó)標(biāo)方法測(cè)定其中的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分、鈣、總磷等的含量。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

鯽魚的血漿、肝臟樣品分別測(cè)定GST、CAT活性及肝臟中抗氧化指標(biāo).羥自由基（·OH）的含量，均使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定，測(cè)定方法參見(jiàn)說(shuō)明書。

1.5 數(shù)據(jù)處理

所得數(shù)據(jù)用SPSS 19軟件處理。對(duì)維生素E和不同水平維生素E類似物飼喂過(guò)的異育銀鯽各檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行單因素方差分析。當(dāng)差異顯著（P＜0.05）時(shí)采用Duncan's法進(jìn)行多重比較；用Excel進(jìn)行圖形處理。數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)鯽魚生長(zhǎng)性能的影響

飼養(yǎng)16周后，每個(gè)平行組隨機(jī)抽取6尾，稱重、測(cè)量體長(zhǎng)，并根據(jù)每日攝食情況，計(jì)算單尾增重率、單尾每天攝食均量、飼料系數(shù)以及存活率等，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，飼養(yǎng)不同周期鯽魚平均飼料系數(shù)比較見(jiàn)圖1。

表1 添加不同劑量新型VE類似物對(duì)鯽魚生長(zhǎng)性能的影響

由表1結(jié)果可知，與VE150正對(duì)照組相比較，VEa40、VEa60、VEa80 組單尾增重率顯著增加（P＜0.05）；同時(shí)VEa40、VEa60組單尾攝食量顯著增加（P＜0.05）；VEa40、VEa60、VEa80 組鯽魚平均飼料系數(shù)依次略降低，VEa80組降低較多，低了0.04，且在各飼養(yǎng)周期中均為最低（見(jiàn)圖1），但差異不顯著（P＞0.05）；所有VEa組比VE150組存活率高1.12%，差異不顯著。由單尾增重率結(jié)果可見(jiàn)，用VEa40、VEa60、VEa80 mg/kg均可取代常規(guī)VE 150 mg/kg，即只用常規(guī)VE一半的量，即可對(duì)鯽魚的生長(zhǎng)性能產(chǎn)生同樣或略好的效果。

2.2 對(duì)鯽魚肌肉成分的影響（見(jiàn)表2）

肌肉成分指標(biāo)均以干重計(jì)算，由表2可見(jiàn)，與常規(guī)維生素E（正對(duì)照）相比，新型VE類似物的添加對(duì)鯽魚肌肉的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分等含量的影響差異不顯著（P＞0.05），這說(shuō)明新型維生素E類似物作為維生素E的替代物對(duì)鯽魚肌肉的營(yíng)養(yǎng)成分沒(méi)有影響。

2.3 對(duì)血清GST、CAT，肝臟GST、CAT以及肝臟羥自由基（·OH）的影響（見(jiàn)表3）

由表3結(jié)果可見(jiàn)，與VE150正對(duì)照組相比：從添加VEa20到VEa150各組鯽魚血清中谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶（GST）（參與肝臟解毒）活性均增加顯著（P＜0.05），且依次遞增（VEa150 組除外），VEa40、VEa120、VEa150組鯽魚肝臟中GST活性顯著降低（P＜0.05），VEa60組肝臟中GST活性顯著升高（P＜0.05），而VEa150組與其它VEa添加組相比，血清和肝臟中的GST活性均降低，這說(shuō)明高劑量的VEa反而會(huì)抑制鯽魚體內(nèi)谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶的活性；VEa60、VEa80、VEa120各組鯽魚血清中過(guò)氧化氫酶（CAT）（體內(nèi)重要的抗氧化酶）活性明顯增加（P＜0.05），而VEa150組CAT活性明顯降低（P＜0.05）；VEa40、VEa60、VEa80組鯽魚肝臟中過(guò)氧化氫酶CAT的活性明顯增加，而VEa20、VEa120及VEa150組CAT活性明顯降低（P＜0.05），這說(shuō)明適當(dāng)劑量（40～80 mg/kg）的 VEa 可以提高鯽魚體內(nèi)的抗氧化能力；VEa40、VEa60、VEa80組鯽魚肝臟中羥自由基（·OH）明顯降低（P＜0.05），而VEa20、VEa120、VEa150組羥自由基（·OH）明顯升高（P＜0.05），過(guò)高或過(guò)低劑量的VEa均會(huì)對(duì)鯽魚機(jī)體的抗氧化能力產(chǎn)生抑制作用。這說(shuō)明，只需VE150組大約一半劑量的VEa就可明顯提高鯽魚的抗氧化力，同時(shí)顯著抑制體內(nèi)羥自由基（·OH）。

圖1 添加新型VE類似物對(duì)鯽魚不同飼養(yǎng)周期飼料系數(shù)的影響

表2 添加新型VE類似物對(duì)鯽魚肌肉成分的影響（%）

表3 新型維生素E類似物的添加對(duì)鯽魚血清GST、CAT，肝臟GST，CAT以及肝臟羥自由基（·OH）的影響

3 討論

以往研究表明，維生素E缺乏通常會(huì)影響水產(chǎn)動(dòng)物的食欲、生長(zhǎng)和飼料利用率、血清生化指標(biāo)及抗氧化能力指標(biāo)等[12-14]，因此本研究通過(guò)測(cè)定新型維生素E類似物對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)性能，血清、肝臟生化指標(biāo)及抗氧化能力的影響來(lái)評(píng)估新型維生素E類似物是否可以取代飼料中常規(guī)維生素E的添加。

魚體的肌肉常規(guī)成分與其生理機(jī)能關(guān)系密切，其中蛋白質(zhì)供魚體生長(zhǎng)和發(fā)育，其含量反映了魚體的生長(zhǎng)狀況和肉品質(zhì)量[15]。目前，維生素E對(duì)異育銀鯽的生長(zhǎng)情況研究較少，本研究結(jié)果顯示，新型維生素E類似物取代常規(guī)維生素E（150 mg/kg）添加后可以促進(jìn)異育銀鯽的生長(zhǎng)，平均飼料系數(shù)和存活率與正對(duì)照組相比，差異不顯著，且對(duì)肌肉成分無(wú)顯著影響。與常規(guī)VE150添加組相比較，VEa40、VEa60、VEa80 組單尾增重率顯著增加（P＜0.05），同時(shí)VEa40、VEa60組單尾攝食量顯著增加（P＜0.05），這說(shuō)明新型維生素E類似物對(duì)取代常規(guī)VE對(duì)異育銀鯽的生長(zhǎng)發(fā)揮作用。

動(dòng)物體內(nèi)參與清除體內(nèi)過(guò)多自由基的防御系統(tǒng)主要包括非酶系統(tǒng)（如VE、VC、GST）和酶系統(tǒng)（如SOD、CAT），VE可顯著提高機(jī)體的抗氧化能力[16]，本研究結(jié)果得到類似結(jié)果，各VEa添加組鯽魚血清中谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶（GST）的活性均增加顯著（P＜0.05），VEa60組肝臟中GST活性顯著升高（P＜0.05），同時(shí)高劑量的VEa反而會(huì)抑制鯽魚體內(nèi)谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶的活性；VEa40、VEa60、VEa80各組鯽魚肝臟中過(guò)氧化氫酶CAT活性明顯增加，肝臟中羥自由基（·OH）明顯降低（P＜0.05），而劑量過(guò)高或過(guò)低組（VEa20、VEa120、VEa150）均會(huì)對(duì)機(jī)體的抗氧化能力產(chǎn)生抑制作用，這與常規(guī)VE的研究報(bào)道結(jié)果一致[17]。這說(shuō)明，只需VE150組大約一半的劑量的VEa（60 mg/kg）就可明顯提高鯽魚生物活性及抗氧化力，同時(shí)顯著抑制體內(nèi)羥自由基（·OH）。

4 結(jié)論

綜上所述，新型維生素E類似物可以作為常規(guī)維生素E的替代物用作飼料添加劑，其不僅可以促進(jìn)異育銀鯽的生長(zhǎng)，提高機(jī)體的血清和組織抗氧化酶活性，且其用量可降低至60 mg/kg，同時(shí)由于其合成步驟的簡(jiǎn)便，使其成本較常規(guī)VE的合成相比降低至少30%，因此，新型維生素E類似物的應(yīng)用不僅可與常規(guī)維生素E發(fā)揮相同或更佳的生物作用，同時(shí)可有效降低飼料成本。