■李亞潔 王林美 米 銳 馬淑慧 李學(xué)軍 孫永欣 孟 楠 李樹英

(遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院大連生物技術(shù)研究所，遼寧大連 116024)

飼料中長(zhǎng)期使用抗生素會(huì)造成畜禽免疫功能下降,抗生素還可在畜禽體內(nèi)殘留,給畜禽健康養(yǎng)殖和食品安全帶來(lái)危害，進(jìn)而危及人類的健康。因此，飼料工業(yè)中急需無(wú)毒、無(wú)害的添加劑[1-8]。利用柞蠶腸道中的鏈球菌（1212）作為誘導(dǎo)源誘導(dǎo)柞蠶蛹產(chǎn)生的一類具有抗菌活性的物質(zhì)，經(jīng)測(cè)定其主要成分有抗菌肽、溶菌酶和凝集素等，已有研究證實(shí)這些活性物質(zhì)尤其是抗菌肽具有較強(qiáng)的殺菌能力，能夠殺死多種細(xì)菌、真菌、原蟲、病毒和腫瘤細(xì)胞[9-11]。柞蠶蛹又包含所有必需的氨基酸，被認(rèn)為是含高質(zhì)量蛋白質(zhì)的食物，畜禽食用后易被體內(nèi)蛋白酶水解消化而無(wú)毒副作用[12-13]。本試驗(yàn)將經(jīng)1212菌株誘導(dǎo)的柞蠶蛹精制成柞蠶免疫活性蛋白添加到日糧中，研究其對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能及血液免疫指標(biāo)的影響，為柞蠶免疫活性蛋白的進(jìn)一步推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

飼料用柞蠶免疫活性蛋白由本實(shí)驗(yàn)室自行制備。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì),將1日齡健康的（AA）肉仔雞200只,隨機(jī)分為5組,每個(gè)處理5個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)8只雞,對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，抗生素組為基礎(chǔ)日糧中添加抗生素(左氧氟沙星)0.05%，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為基礎(chǔ)日糧中添加柞蠶免疫活性蛋白1%、5%、10%，試驗(yàn)期為28 d。基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期內(nèi)保持24 h/d恒定光照和機(jī)械通風(fēng)制度，在前3 d內(nèi)舍溫保持33℃，之后每周降低3℃，直到24℃時(shí)保持恒定不變。試驗(yàn)期內(nèi)自由采食和飲水，每天人工清糞1次。疫苗接種按AA肉仔雞免疫程序進(jìn)行。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能

試驗(yàn)雞進(jìn)雞舍時(shí)，稱取其初始體重，在28日齡空腹稱量各重復(fù)雞體重和飼料消耗量，詳細(xì)記錄各組給料量和剩余料量，記錄雞只死亡數(shù)量，并計(jì)算1～28日齡試驗(yàn)雞平均采食量、平均料重比及平均日增重。

1.4.2 免疫器官指數(shù)

在28日齡，每重復(fù)隨機(jī)抽取1只體重相近的雞，屠宰后分別采摘脾臟、胸腺、法氏囊，并剔除附著的組織用濾紙吸干血水后稱鮮重，計(jì)算其免疫器官指數(shù)。計(jì)算公式為:

免疫器官指數(shù)(%)=（免疫器官鮮重/宰前空腹活重)×100。

1.4.3 血清中免疫球蛋白含量

于試驗(yàn)期第28 d，每重復(fù)選取1只體重相近的雞，翅靜脈采血3 000 r/min離心15 min，分裝血清，于-20℃保存?zhèn)溆?用于測(cè)定血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)的含量以及補(bǔ)體3(C3)和補(bǔ)體4(C4)含量，所有免疫指標(biāo)采用酶聯(lián)免疫分析法(江蘇晶美生物科技有限公司雞專用試劑盒)測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS17.0軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 柞蠶免疫活性蛋白對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

肉仔雞日糧中添加3個(gè)水平（1%、5%、10%）柞蠶免疫活性蛋白對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響見表2，從表2可以看出,在平均日增重方面：試驗(yàn)各組與抗生素組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05)，但4組均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05)，其中試驗(yàn)Ⅱ組最好，與對(duì)照組相比增幅達(dá)到41.15%；在采食量方面：試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、抗生素組與對(duì)照組相比有增加的趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05)，試驗(yàn)Ⅲ組卻顯著低于抗生素組（P＜0.05)，而與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05)；在料重比方面：試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05)，分別降低了14.67%、25.23%和23.85%，且試驗(yàn)Ⅱ組和Ⅲ組均顯著低于抗生素組（P＜0.05)。

表2 柞蠶免疫活性蛋白對(duì)雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 柞蠶免疫活性蛋白對(duì)肉雞仔免疫器官指數(shù)的影響

由表3可見,對(duì)脾臟指數(shù)的影響，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與抗生素組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05)，但4組均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05)，其中試驗(yàn)Ⅱ組脾臟指數(shù)最高，與對(duì)照組相比，高出31.57%；對(duì)胸腺指數(shù)的影響，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組均顯著高于抗生素和對(duì)照組（P＜0.05)，試驗(yàn)Ⅰ組與抗生素組、對(duì)照組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05)；對(duì)于法氏囊指數(shù)，試驗(yàn)各組均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05)，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組又顯著高于抗生素組（P＜0.05)，試驗(yàn)Ⅰ組與抗生素組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05)。

表3 柞蠶免疫活性蛋白對(duì)28日齡肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響

2.3 柞蠶免疫活性蛋白對(duì)雞血清免疫球蛋白含量、補(bǔ)體C3和C4的含量的影響(見表4)

由表4可見，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組和抗生素組的雞血清中IgG的含量分別提高了36.01%、30.03%和12.95%（P＜0.05)，IgM的含量分別提高了22.74%、20.64%和8.33%（P＜0.05)，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組的血清中IgA的含量分別提高了25.58%、33.78%和13.46%（P＜0.05)；就補(bǔ)體C3的含量而言，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組較對(duì)照組和抗生素組均有顯著增加（P＜0.05)，其中試驗(yàn)Ⅱ組增加最多，與對(duì)照組相比，增幅達(dá)到33.94%，除了試驗(yàn)Ⅰ組以外，其余各組補(bǔ)體C4的含量均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05)，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組又均顯著高于抗生素組（P＜0.05)。

3 討論

本課題組研制的柞蠶免疫活性蛋白是以柞蠶蛹為原料,誘導(dǎo)條件下激活柞蠶的免疫防御系統(tǒng),產(chǎn)生一系列抗病活性物質(zhì),其中,主要包括抗菌肽、溶菌酶和凝集素等多種活性多肽,同時(shí)它又是一種優(yōu)質(zhì)理想的營(yíng)養(yǎng)蛋白源，經(jīng)分析測(cè)定，蛋白質(zhì)含量為54.6%、粗脂肪為21.2%，含有18種氨基酸、8種必需氨基酸，其中必需氨基酸為43.06 g/100 g，占氨基酸總量的47.32%[14]。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，飼糧中添加不同水平柞蠶免疫活性蛋白可顯著提高肉仔雞平均日增重，顯著降低料重比（P＜0.05)，其中，尤以添加5%效果最好，與對(duì)照組相比，平均日增質(zhì)量提高了41.15%，料重比降低了25.23%，在日采食量方面，與對(duì)照組相比，添加1%、5%和抗生素組均有增加趨勢(shì)（P＞0.05)，但添加10%時(shí)，平均日采食量低于其他各組，與抗生素組相比達(dá)到了顯著水平（P＜0.05)，綜上表明，飼糧中適量添加柞蠶免疫活性蛋白可在不同程度上提高肉仔雞生長(zhǎng)性能，這與姚遠(yuǎn)等[15]、劉鐘淵等[16]研究結(jié)果類似。

表4 柞蠶免疫活性蛋白雞血清免疫球蛋白及C3和C4的含量的影響

包匯慧等[17]研究報(bào)道，抗菌肽能降低熱應(yīng)激對(duì)肉雞免疫器官的損傷及肝HSP70表達(dá)，并對(duì)免疫器官指數(shù)有不同程度的調(diào)節(jié)和促進(jìn)作用，姚遠(yuǎn)等[15]在日糧中添加天蠶素(500 mg/kg)后，雞血清IgA、IgG、IgM含量均顯著升高，添加天蠶素(200～500 mg/kg)可顯著增加血清C4含量，王靜[18]在日糧中適量添加抗菌肽可以促進(jìn)雞血清免疫球蛋白和補(bǔ)體C3含量的增加。李亞潔等[19]之前的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在斷奶仔豬的飼糧中添加柞蠶免疫活性蛋白，不僅能提高仔豬免疫器官指數(shù)，還能顯著增加仔豬血清中IgA和IgG含量。本研究與以上學(xué)者研究體現(xiàn)出一致結(jié)果,飼糧中添加不同水平柞蠶免疫活性蛋白均顯著提高雞的脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)及雞血清中免疫球蛋白IgA、補(bǔ)體C3的含量，添加5%和10%還顯著提高胸腺指數(shù)和補(bǔ)體C4的含量，說(shuō)明柞蠶免疫活性蛋白具有促進(jìn)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫器官的發(fā)育，增強(qiáng)肉仔雞免疫功能的作用。

4 小結(jié)

綜上所述，日糧中適量添加柞蠶免疫活性蛋白可以提高雞的生長(zhǎng)性能和機(jī)體的免疫功能，這預(yù)示著柞蠶免疫活性蛋白作為雞飼料添加劑具有良好的應(yīng)用前景。