楊長(zhǎng)進(jìn)董曉芳佟建明高玉鵬?（．西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，楊凌700；．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京0093）

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苜草素對(duì)產(chǎn)蛋高峰期蛋雞脂肪肝出血綜合征預(yù)防作用研究

楊長(zhǎng)進(jìn)1董曉芳2?佟建明2高玉鵬1?
（1．西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，楊凌712100；2．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193）

摘 要：本試驗(yàn)旨在研究苜草素對(duì)產(chǎn)蛋高峰期蛋雞脂肪肝出血綜合征（FLHS）的預(yù)防作用。選用266日齡京紅1號(hào)蛋雞50只，隨機(jī)等分為5組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)2只雞。Ⅰ組飼喂基礎(chǔ)飼糧；Ⅱ～Ⅴ組飼喂高能低蛋白質(zhì)飼糧，并分別在飼糧中添加0、200、600和1 000 mg／kg苜草素。試驗(yàn)期60 d。結(jié)果如下：1）與Ⅰ組相比，Ⅱ組1～60 d平均日采食量顯著降低（P＜0．05），1～30 d料蛋比明顯升高（P＜0．05），14 d時(shí)蛋黃甘油三酯含量顯著升高（P＜0．05），30 d時(shí)即可表現(xiàn)明顯的蛋雞FLHS癥狀，60 d時(shí)FLHS發(fā)生率升高。2）與Ⅱ組相比，30 d時(shí)Ⅲ組肝脂率顯著降低（P＜0．05），Ⅳ、Ⅴ組肝臟出血指數(shù)、肝脂率顯著降低（P＜0．05），Ⅲ～Ⅴ組FLHS發(fā)生率降低，其中Ⅲ組降低33．3%，Ⅳ、Ⅴ組未發(fā)生FLHS；與Ⅱ組相比，60 d時(shí)Ⅴ組FLHS發(fā)生率降低50%。3）與Ⅱ組相比，1～30 dⅣ組料蛋比顯著降低（P＜0．05），14、28、56 d時(shí)Ⅲ～Ⅴ組蛋黃甘油三酯含量顯著降低（P＜0．05），42 d時(shí)Ⅳ組蛋黃甘油三酯含量顯著降低（P＜0．05），28、56 d時(shí)Ⅴ組蛋黃總脂含量顯著降低（P＜0．05）。結(jié)果表明：30 d時(shí)，不同劑量苜草素對(duì)高能低蛋白質(zhì)飼糧誘發(fā)產(chǎn)蛋高峰期蛋雞FLHS均具有一定的預(yù)防作用；而60 d時(shí)，1 000 mg／kg苜草素對(duì)高能低蛋白質(zhì)飼糧誘發(fā)產(chǎn)蛋高峰期蛋雞FLHS發(fā)生率降低了50%。

關(guān)鍵詞：苜草素；蛋雞；蛋雞脂肪肝出血綜合征

與哺乳動(dòng)物不同，雞的脂肪酸合成僅有很少部分在脂肪組織中進(jìn)行，雞體內(nèi)脂質(zhì)代謝的最主要場(chǎng)所是肝臟［1］。產(chǎn)蛋期，蛋雞肝臟大量合成脂肪，與載脂蛋白等結(jié)合形成極低密度脂蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到肝外組織以滿足蛋黃中沉積脂質(zhì)的需要，此時(shí)肝臟代謝負(fù)擔(dān)沉重，極易發(fā)生脂肪肝出血綜合征（fatty liver hemorrhagic syndrome，F(xiàn)LHS）。FLHS可造成整個(gè)雞群產(chǎn)蛋率下降，而且蛋雞一旦患此病會(huì)給蛋雞生產(chǎn)造成巨大的損失［2］。然而FLHS的誘發(fā)機(jī)制還不清楚，有研究報(bào)道，F(xiàn)LHS發(fā)生的主要原因?yàn)楦闻K脂肪來(lái)源多于脂肪輸出而導(dǎo)致脂肪代謝平衡失調(diào)，以致大量脂肪沉積于肝細(xì)胞內(nèi)［3－4］。也有學(xué)者認(rèn)為FLHS發(fā)生的主要原因?yàn)楫a(chǎn)蛋期蛋雞代謝比較旺盛，肝臟內(nèi)游離的脂肪酸比較多，易被氧化產(chǎn)生大量的自由基，破壞細(xì)胞的生物膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致肝細(xì)胞氧化損傷［5］。目前防止該病多采用配制營(yíng)養(yǎng)均衡的飼糧并適當(dāng)降低能量水平，與之矛盾的是降低飼糧能量水平必定會(huì)引起群體產(chǎn)蛋率下降，這就要求研究者們尋求其他的解決辦法［6］。

苜草素是由紫花苜蓿經(jīng)水提后噴霧干燥形成的植物飼料添加劑，其主要成分有苜蓿黃酮、皂苷和多糖。肝臟自由基水平升高是FLHS發(fā)生的原因之一［5］，而苜蓿多糖作為苜草素主要成分之一，體外試驗(yàn)證實(shí)其具有清除自由基的抗氧化作用［7］。植物黃酮類物質(zhì)具有增強(qiáng)免疫和調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的功能［8］。Malinow等［9－11］和劉凱等［12－13］報(bào)道，苜蓿皂苷能調(diào)節(jié)機(jī)體脂質(zhì)代謝，防止高膽固醇血癥的發(fā)生。飼糧中添加苜草素可促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育，改善體內(nèi)脂質(zhì)代謝［14］。然而，目前還未見(jiàn)直接使用苜草素預(yù)防蛋雞FLHS的研究報(bào)道。因此，本試驗(yàn)通過(guò)人工誘發(fā)（高能低蛋白質(zhì)飼糧）FLHS的發(fā)生，研究飼糧中添加不同劑量的苜草素對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、肝臟病變、蛋黃脂質(zhì)含量的影響，旨在為預(yù)防FLHS提供新的依據(jù)和參考。

1　材料與方法

1．1 試驗(yàn)材料

苜草素是以天然植物藥物提取原理，采用破壁萃取技術(shù)從干燥的紫花苜蓿中提取的一種植物飼料添加劑，其主要有效成分為多糖（≥15%）、黃酮（≥5%）、皂苷（≥5%）。苜草素由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所提供。

1．2 試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)飼糧

選取健康的體重相近（1 770．4±222．8）g的266日齡京紅1號(hào)產(chǎn)蛋雞50只，購(gòu)自北京正大畜牧有限公司，隨機(jī)等分為5組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)2只雞，密閉雞舍單籠飼養(yǎng)，自由采食，每天飼喂量為110 g／只，自由飲水，光照時(shí)間為16 h／d，舍內(nèi)溫度為18～21℃，相對(duì)濕度為50%～70%，按正常免疫程序免疫接種，試驗(yàn)期60 d。

Ⅰ組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；Ⅱ～Ⅴ組為試驗(yàn)組，飼喂高能低蛋白質(zhì)飼糧，并分別在飼糧中添加0、200、600、1 000 mg／kg的苜草素。參照NRC （1994）蛋雞營(yíng)養(yǎng)需要配制基礎(chǔ)飼糧，各組飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1　試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1　Composition and nutrient levels of experimental diets（air?dry basis）　%

1．3 檢測(cè)指標(biāo)和方法

1．3．1 生產(chǎn)性能的測(cè)定

試驗(yàn)期每天觀察雞只健康狀況，記錄環(huán)境溫度、濕度，每天對(duì)每個(gè)重復(fù)雞只的產(chǎn)蛋情況進(jìn)行記錄并且稱重，每周結(jié)料1次。試驗(yàn)結(jié)束后根據(jù)記錄計(jì)算每只雞的平均日采食量、產(chǎn)蛋率、蛋重、料蛋比、產(chǎn)蛋量。

1．3．2 肝臟指標(biāo)的測(cè)定

試驗(yàn)30和60 d，每重復(fù)取1只蛋雞，空腹稱雞活體重（稱重前12 h禁食），麻醉處死，開(kāi)膛后立即用數(shù)碼相機(jī)拍照，然后小心取出整個(gè)肝臟，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗上面血漬，用濾紙擦干并稱重記錄，然后取5 g肝臟組織，錫箔紙包裝，液氮速凍，－20℃凍存。試驗(yàn)結(jié)束后根據(jù)記錄計(jì)算肝臟指數(shù)、肝臟出血指數(shù)、FLHS發(fā)生率，并測(cè)定肝脂率。

1．3．2．1 肝臟指數(shù)

肝臟指數(shù)（%）＝（肝臟濕重／活體重）×100。

1．3．2．2 肝臟出血指數(shù)和FLHS發(fā)生率（觀測(cè)）

參照董曉芳等［15］試驗(yàn)的劃分標(biāo)準(zhǔn)，將本試驗(yàn)肝臟出血程度劃分為4級(jí)：0＝?jīng)]有出血，1＝有少數(shù)出血點(diǎn)或斑，2＝有明顯的出血區(qū)或血腫；3＝有廣泛的局灶性出血區(qū)或大出血。2、3級(jí)判為FLHS雞，1級(jí)為亞臨床雞。肝臟出血分級(jí)見(jiàn)圖1。

圖1　肝臟出血分級(jí)Fig．1　Liver hemorrhagic classification

1．3．2．3 肝脂率

參照Folch等［16］的方法，稍作修改。測(cè)定步驟：準(zhǔn)確稱量肝臟樣品（約2 g），將丁基羥基甲苯（50 μL，7．2%溶于乙醇）和30 mL Folch 1（氯仿∶甲醇＝2∶1，V／V）溶液加入到50 mL的試管中，利用均漿機(jī)將肝臟樣品在高速勻漿下均質(zhì)化（Ultra?Turrax T10，IKA Works Inc，USA）。4℃過(guò)夜，將勻漿液過(guò)濾到100 mL量筒中，濾紙用10 mL Folch 1溶液沖洗2遍。然后向量筒中加入10 mL（濾液體積的1／4）0．88%的氯化鈉（NaCl）溶液，混勻。量筒內(nèi)壁用5 mL的Folch 2（氯仿∶甲醇∶水＝3∶47∶48）溶液沖洗2次，室溫靜置5 h，液相分離后，記錄脂層溶液體積，抽取上層溶液（甲醇和水），小心移除，以免污染氯仿層。將有機(jī)層（20 mL）移入玻璃閃爍瓶中，在液氮流下50℃干燥5 h。然后計(jì)算干燥脂質(zhì)的含量。

肝脂率（%）＝（肝臟脂肪含量／肝臟濕重）×100。

1．3．3 蛋黃脂質(zhì)含量的測(cè)定

試驗(yàn)30 d前每周每個(gè)重復(fù)取2枚雞蛋，將其蛋黃混合后放于自封袋中，－20℃凍存；試驗(yàn)30～60 d每周每個(gè)重復(fù)取1枚雞蛋，將其蛋黃放于自封袋中，－20℃凍存。試驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定14、28、42、56 d的蛋黃總脂、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）含量。

1．3．3．1 蛋黃總脂含量

參照Folch等［16］的方法，稍作修改。測(cè)定步驟：準(zhǔn)確稱量蛋黃樣品（約2 g），將丁基羥基甲苯（50 μL，7．2%溶于乙醇）和30 mL Folch 1（氯仿∶甲醇＝2∶1，V／V）溶液加入到一個(gè)50 mL的試管中，利用均漿機(jī)將肝臟樣品在高速勻漿下均質(zhì)化（Ultra?Turrax T10，IKA Works Inc，USA）。4℃過(guò)夜，將勻漿液過(guò)濾到100 mL量筒中，濾紙用10 mL Folch 1溶液沖洗2遍。然后向量筒中加入10 mL（濾液體積的1／4）0．88%的NaCl溶液，混勻。量筒內(nèi)壁用5 mL的Folch 2（氯仿∶甲醇∶水＝3∶47∶48）溶液沖洗2次，室溫靜置5 h，液相分離后，記錄脂層溶液體積，抽取上層溶液（甲醇和水），小心移除，以免污染氯仿層。將有機(jī)層（20 mL）移入玻璃閃爍瓶中，在液氮流下50℃干燥5 h。然后計(jì)算干燥脂質(zhì)的含量。

干燥脂質(zhì)的含量（%）＝（脂質(zhì)的量／蛋黃的量）×100。

1．3．3．2 蛋黃甘油三酯含量

前處理參照Elkin等［17］的方法，1 g蛋黃樣加入15 mL Folch 1溶液，冰浴下勻漿30 s，蓋上蓋子，搖勻。靜置30 min后重新?lián)u晃混勻，超聲波萃取后過(guò)濾，靜置分層。根據(jù)甘油三酯含量測(cè)定試劑盒進(jìn)行測(cè)定，試劑盒購(gòu)自北京中生北控生物科技股份有限公司。

1．3．3．3 蛋黃總膽固醇含量

參照Pasin等［18］的測(cè)定方法，稍作修改。稱取3 g蛋黃液，加入27 mL 2%（w／V，0．32 mol／L）的NaCl溶液，在室溫下?lián)u床振蕩2 h（蓋上蓋子，防止揮發(fā)）。然后取上述混合液1 mL，加入9 mL 2%（w／V）的NaCl溶液制備成待測(cè)樣。根據(jù)總膽固醇含量測(cè)定試劑盒進(jìn)行測(cè)定，試劑盒購(gòu)自北京中生北控生物科技股份有限公司。

1．4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SAS 9．2統(tǒng)計(jì)軟件利用ANOVA進(jìn)行單因素方差分析，Duncan氏法進(jìn)行多重比較，以P＜0．05為差異顯著水平。

2　結(jié) 果

2．1 苜草素對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，1～30 d，各組平均日采食量、產(chǎn)蛋率、蛋重、產(chǎn)蛋量差異不顯著（P＞0．05），Ⅱ組料蛋比顯著高于Ⅰ組、Ⅳ組（P＜0．05）。31～60 d，各組產(chǎn)蛋率、蛋重、料蛋比、產(chǎn)蛋量差異不顯著（P＞0．05），Ⅱ組平均日采食量顯著低于Ⅰ組（P＜0．05）。1～60 d，各組產(chǎn)蛋率、蛋重、料蛋比、產(chǎn)蛋量差異不顯著（P＞0．05），Ⅱ組平均日采食量顯著低于Ⅰ組（P＜0．05）。

表2　苜草素對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響Table 2　Effects of polysavone on performance of laying hens（n＝5）

2．2 苜草素對(duì)蛋雞肝臟病變的影響

由表3可知，30 d，各組間的肝臟指數(shù)差異不顯著（P＞0．05），Ⅱ組的肝臟出血指數(shù)顯著高于Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ組（P＜0．05），Ⅱ組肝脂率顯著高于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組（P＜0．05）；60 d，各組間肝臟指數(shù)、肝臟出血指數(shù)、肝脂率差異不顯著（P＞0．05）。30 d，各組的FLHS發(fā)生率分別為0、60%、40%、0、0；60 d，各組的FLHS發(fā)生率分別為0、40%、40%、40%、20%。

表3　苜草素對(duì)蛋雞肝臟病變的影響Table 3　Effects of polysavone on hepatic pathological changes in laying hens（n＝5）

2．3 苜草素對(duì)蛋雞蛋黃脂質(zhì)含量的影響

由表4可知，14 d，各組間蛋黃重和蛋黃總脂、總膽固醇含量差異不顯著（P＞0．05），Ⅱ組蛋黃甘油三酯含量顯著高于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組（P＜0．05）；28 d，各組間蛋黃重、蛋黃總膽固醇含量差異不顯著（P＞0．05），Ⅱ組蛋黃總脂含量與Ⅰ組差異不顯著（P＞0．05），Ⅴ組蛋黃總脂含量顯著低于Ⅱ組（P＜0．05），Ⅱ組蛋黃甘油三酯含量與Ⅰ組差異不顯著（P＞0．05），Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組蛋黃甘油三酯含量顯著低于Ⅱ組（P＜0．05）；42 d，各組間蛋黃重和蛋黃總脂、總膽固醇含量差異不顯著（P＞0．05），Ⅱ組蛋黃甘油三酯含量與Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ組差異不顯著（P＞0．05），Ⅳ組蛋黃甘油三酯含量顯著低于Ⅱ組（P＜0．05）；56 d，各組間蛋黃重、蛋黃總膽固醇含量差異不顯著（P＞0．05），Ⅱ組蛋黃總脂含量與Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ組差異不顯著（P＞0．05），Ⅴ組蛋黃總脂含量顯著低于Ⅱ組（P＜0．05），Ⅱ組蛋黃甘油三酯含量與Ⅰ組差異不顯著（P＞0．05），Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組蛋黃甘油三酯含量顯著低于Ⅱ組（P＜0．05）。

3　討 論

3．1 FLHS病理模型的建立

利用高能低蛋白質(zhì)飼糧飼喂蛋雞能夠成功誘發(fā)蛋雞FLHS的發(fā)生。董曉芳等［15］采用代謝能13．46 MJ／㎏、粗蛋白質(zhì)13．0%的高能低蛋白質(zhì)飼糧飼喂36周齡海蘭灰商品蛋雞24 d即可引發(fā)蛋雞FLHS的發(fā)生。本試驗(yàn)采用代謝能12．85 MJ／kg、粗蛋白質(zhì)13．97%的高能低蛋白質(zhì)飼糧，飼喂蛋雞30 d，蛋雞表現(xiàn)出明顯的FLHS病理特征。蛋雞FLHS的發(fā)生與諸多因素有關(guān)，其中飼糧能量過(guò)高或蛋白質(zhì)不足是其誘因之一，而誘發(fā)機(jī)制仍未清楚。目前研究表明高能低蛋白質(zhì)飼糧引起FLHS有3種可能：1）產(chǎn)蛋期，肝臟開(kāi)始大量重新合成脂肪，與載脂蛋白等結(jié)合形成極低密度脂蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到肝外組織以滿足蛋黃對(duì)脂質(zhì)的需要；當(dāng)肝臟中脂肪合成速度大于向外轉(zhuǎn)運(yùn)速度時(shí)，過(guò)量的脂肪就會(huì)沉積在肝臟中，使肝臟脂肪含量升高；當(dāng)?shù)半u采食高能低蛋白質(zhì)飼糧后，過(guò)量的能量通過(guò)合成甘油三酯貯存在肝臟中，從而誘發(fā)病征。2）長(zhǎng)期飲食高能低蛋白質(zhì)飼糧容易造成肝臟脂肪酸β氧化出現(xiàn)異常，導(dǎo)致過(guò)量的中性脂肪貯存在肝臟中。3）產(chǎn)蛋期，蛋雞代謝比較旺盛，肝臟內(nèi)游離的脂肪酸比較多，易被氧化成大量的自由基，破壞細(xì)胞的生物膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷。

表4　苜草素對(duì)蛋雞蛋黃脂質(zhì)含量的影響Table 4　Effects of polysavone on contents of yolk lipids in laying hens（n＝5）

3．2 苜草素對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

張彩英等［19］研究顯示，與常規(guī)飼糧組相比，采用代謝能12．81 MJ／㎏、粗蛋白質(zhì)13．04%的高能低蛋白質(zhì)飼糧飼喂300日齡海蘭褐蛋雞60 d，蛋雞采食量、產(chǎn)蛋率顯著降低，料蛋比顯著升高。本研究中，與對(duì)照組相比，未加苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組，1～30 d料蛋比顯著升高，1～60 d平均日采食量顯著降低。蛋雞長(zhǎng)期進(jìn)食高脂飼糧可能會(huì)降低血液雌激素水平進(jìn)而引發(fā)產(chǎn)蛋率降低。而本研究中，與對(duì)照組相比，未添加苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組，蛋雞產(chǎn)蛋率未明顯降低，這可能與雞只體況較好有關(guān)，還可能與蛋雞維持繁殖機(jī)能有關(guān)，對(duì)此有待進(jìn)一步研究。本研究中，1～30 d，與未添加苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組相比，添加600 mg／kg苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組，蛋雞料蛋比顯著降低。有研究報(bào)道，苜草素可顯著降低58～65周齡蛋雞的料蛋比［20］。苜草素的主要活性成分為多糖、黃酮、皂苷。黃酮具有弱雌激素和抗雌激素活性雙向調(diào)節(jié)作用，當(dāng)雌激素水平低時(shí)，黃酮與雌激素受體結(jié)合表現(xiàn)出雌激素作用［21］，進(jìn)而提高產(chǎn)蛋率。另外，苜蓿皂苷能夠降低動(dòng)物對(duì)脂肪的消化吸收率［22］。這些有可能是苜草素改善蛋雞飼料利用率的作用機(jī)理。

3．3 苜草素對(duì)蛋雞肝臟病變的影響

蛋雞FLHS是由于肝臟脂肪代謝紊亂而造成肝臟脂肪堆積的營(yíng)養(yǎng)性代謝疾病，目前其發(fā)病機(jī)制還不明確，但最基本的臨床典型特征是肝臟脂肪升高并伴有出血。本研究中，與對(duì)照組相比，30 d時(shí)，未添加苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組蛋雞肝臟出血指數(shù)、肝脂率顯著升高，F(xiàn)LHS發(fā)生率為60%；60 d時(shí)，未添加苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組FLHS發(fā)生率為40%。蛋雞長(zhǎng)期進(jìn)食高能飼糧，會(huì)導(dǎo)致血漿胰島素水平升高，進(jìn)而導(dǎo)致肝臟脂肪酸合成增加。血漿胰島素水平升高會(huì)抑制肉堿酯酰轉(zhuǎn)移酶的活性，抑制脂肪酸的β氧化，這樣就會(huì)導(dǎo)致脂肪在肝臟中堆積而發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)生過(guò)多的自由基，使毛細(xì)血管通透性升高從而導(dǎo)致出血。這些是高能低蛋白質(zhì)飼糧飼喂蛋雞導(dǎo)致FLHS發(fā)生的可能機(jī)制。本研究還表明，與未添加苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組相比，30 d時(shí)，添加不同劑量苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組肝脂率、肝臟出血指數(shù)、FLHS發(fā)生率均出現(xiàn)不同程度的降低；60 d時(shí)，添加1 000 mg／kg苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組FLHS發(fā)生率降低了50%。這表明苜草素能夠保護(hù)肝細(xì)胞免受損傷。有研究報(bào)道，苜草素能夠降低肉仔雞血液胰島素水平，升高血液甲狀腺激素水平，降低肝臟中脂肪酸合成酶mR?NA的表達(dá)量，從而降低肝臟脂肪酸合成［23］。苜蓿皂苷作為苜草素的重要成分，能夠降低動(dòng)物對(duì)脂肪的消化吸收，降低肝臟脂肪酸重新合成的原料乙酰輔酶A，進(jìn)而導(dǎo)致肝臟脂肪酸合成減少［22］；苜蓿皂苷還具有抗氧化作用［22］。苜草素的另一重要成分苜蓿多糖具有清除自由基的抗氧化作用［7］。這些可能是苜草素能夠降低蛋雞FLHS的機(jī)制。而本研究中，60 d時(shí)，200、600 mg／kg苜草素對(duì)高能低蛋白質(zhì)飼糧誘發(fā)產(chǎn)蛋高峰期蛋雞FLHS無(wú)明顯的預(yù)防作用，這可能與雞只產(chǎn)蛋率降低、肝臟合成的脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)到卵黃減少、肝臟脂肪沉積增多有關(guān)，也可能與苜草素作用效果減弱有關(guān)，對(duì)此有待進(jìn)一步研究。

3．4 苜草素對(duì)雞蛋蛋黃脂質(zhì)含量的影響

肝臟是蛋禽脂肪合成和轉(zhuǎn)運(yùn)的主要器官，脂肪在肝臟中合成后一部分以極低密度脂蛋白的形式沉積到卵泡中而形成蛋黃。有研究表明，患有FLHS的蛋雞，其雞蛋的甘油三酯、總膽固醇含量會(huì)明顯升高［24］。本研究中，與對(duì)照組相比，未添加苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組，14 d時(shí)，蛋黃甘油三酯含量顯著升高。蛋雞長(zhǎng)期進(jìn)食高能低蛋白質(zhì)飼糧，使肝臟中堆積過(guò)多的脂肪，此時(shí)機(jī)體可能代償性的補(bǔ)償合成更多的極低密度脂蛋白來(lái)轉(zhuǎn)運(yùn)脂肪，最終導(dǎo)致蛋黃脂肪含量增多。本研究還表明，與未添加苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組相比，添加不同劑量苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組，14、28、56 d蛋黃甘油三酯含量顯著降低。另有研究表明，在58～65周齡海蘭褐蛋雞基礎(chǔ)飼糧中添加1 000 mg／kg苜草素后能顯著降低蛋黃甘油三酯含量［25］。苜草素能夠降低肝臟甘油三酯含量，從而減少肝臟中極低密度脂蛋白的組裝以及運(yùn)輸，最終導(dǎo)致蛋黃甘油三酯含量降低［25］。

4　結(jié) 論

30 d時(shí)，不同劑量苜草素對(duì)高能低蛋白質(zhì)飼糧誘發(fā)產(chǎn)蛋高峰期蛋雞FLHS均具有一定的預(yù)防作用；而60 d時(shí)，1 000 mg／kg苜草素對(duì)高能低蛋白質(zhì)飼糧誘發(fā)產(chǎn)蛋高峰期蛋雞FLHS發(fā)生率降低了50%。

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Prophylactic Effect of Polysavone on Fatty Liver Hemorrhagic Syndrome in Laying Hens

YANG Changjin

1

DONG Xiaofang

2?

TONG Jianming

2

GAO Yupeng

1?

（責(zé)任編輯 陳 燕）

（1．College of Animal Science and Technology，Northwest A＆F University，Yangling 712100，China；2．Institute of Animal Science，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100193，China）

Abstract：This experiment was conducted to investigate prophylactic effects of polysavone（alfalfa extract）on fatty liver hemorrhagic syndrome（FLHS）in laying hens．Fifty Jinghong 1 laying hens aged 266 days were randomly divided into 5 groups，with 5 replicates per group and 2 hens per replicate．Hens in groupⅠwere fed on a basal diet，while hens in groupsⅡ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴwere fed on high?energy low?protein diets supplemen?ted with 0，200，600，1 000 mg／kg Ploysavone，respectively．The experiment lasted for 60 days．The results showed as follows：1）compared with groupⅠ，the average daily feed intake（ADFI）in groupⅡwas signif?icantly decreased during 1 to 60 d（P＜0．05），while the ratio of feed to egg in groupⅡwas significantly in?creased during the first 30 d（P＜0．05），as well as the triglyceride（TG）content in yolk in groupⅡon day 14（P＜0．05）．Furthermore，laying hens in groupⅡshowed the pathological characteristics of FLHS on day 30 and had higher incidence of FLHS on day 60 than groupⅠ．2）Compared with groupⅡ，on day 30，the liver fat rate in groupⅢ，the liver hemorrhagic index and liver fat rate in groupsⅣandⅤwere significantly decreased（P＜0．05）．In addition，the incidence rate of FLHS in groupⅢshowed a decrease of 33．3%than groupⅡand no FLHS was found in groupsⅣandⅤ．Moreover，compared with groupⅡ，the incidence of FLHS in groupⅤwas decreased by 50．0%on day 60．3）Compared with groupⅡ，the ratio of feed to egg in groupⅣwas significantly decreased during the first 30 d（P＜0．05），as well as the TG content in yolk on days 14，28 and 56 in groupsⅢ，ⅣandⅤ（P＜0．05）．Also，the total lipids content in yolk on days 28 and 56 in groupⅤwas significantly decreased（P＜0．05），and the TG content in yolk on day 42 in groupⅣwas signifi?cantly decreased（P＜0．05）．In conclusion，on day 30，different doses of Ploysavone can prevent FLHS in lay?ing hens which are fed high?energy low?protein diet．Furthermore，on day 60，the incidence of FLHS in group Ⅴis decreased by 50．0%．［Chinese Journal of Animal Nutrition，2015，27（7）：2184?2192］

Key words：polysavone；laying hens；fatty liver hemorrhagic syndrome

Corresponding author?s：DONG Xiaofang，associate professor，E?mail：xiaofangd1124＠sina．com；GAO Yupeng，professor，E?mail：gaoyu?peng112＠sina．com

通信作者：?董曉芳，副研究員，碩士生導(dǎo)師，E?mail：xiaofangd1124＠sina．com；高玉鵬，教授，博士生導(dǎo)師，E?mail：gaoyupeng112＠sina．com

作者簡(jiǎn)介：楊長(zhǎng)進(jìn)（1988—），男，山東德州人，碩士，研究方向?yàn)榈半u營(yíng)養(yǎng)與飼料。E?mail：yangchangjin0929＠126．com

基金項(xiàng)目：國(guó)家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系崗位科學(xué)家任務(wù)（CARS?41?K16）；“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題（2013BAD10B04）；中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程（ASTIP?IAS08）

收稿日期：2015－02－04

doi：10．3969／j．issn．1006?267x．2015．07．024

文章編號(hào)：1006?267X（2015）07?2184?09

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類號(hào)：S816．7；S831