黃文紅 馮玉紅 李嘉誠 顏慧瓊高鵬博 王春修 張永利 王荔寧

Plackett－Burman設(shè)計(jì)和響應(yīng)面法優(yōu)化芥子中硫苷的超聲波提取工藝

黃文紅1馮玉紅1李嘉誠1顏慧瓊2高鵬博1王春修1張永利1王荔寧1

（海南大學(xué)材料與化工學(xué)院1，?？?570228）
（海南師范大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院2，?？?571100）

通過預(yù)試驗(yàn)和掃描電鏡法分析得出超聲波提取可提高芥子中硫苷的提取率，進(jìn)而采用Plackett－Burman（PB）試驗(yàn)和響應(yīng)面法研究芥子中硫苷的超聲波提取最佳工藝條件，并以硫苷的提取率作為響應(yīng)值。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用PB試驗(yàn)從影響超聲波提取的因素中篩選出超聲功率和乙醇濃度兩個(gè)顯著因素，在此基礎(chǔ)上，通過最陡爬坡試驗(yàn)逼近最大硫苷提取率區(qū)域，然后通過中心組合設(shè)計(jì)試驗(yàn)對(duì)顯著因素進(jìn)行優(yōu)化，得出最佳超聲波提取工藝條件為：儀器（超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)）參數(shù)為超聲功率300 W、超聲工作時(shí)間4 s（間歇時(shí)間6 s），提取總時(shí)間25 min（即超聲150次），液料比15∶1（mL／g）和乙醇體積分?jǐn)?shù)48%。在此條件下，硫苷提取率為2.902%，與預(yù)測(cè)值2.894%相對(duì)誤差為0.276%。這表明PB試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面法可以很好地優(yōu)化芥子中硫苷的超聲波提取工藝。

芥子 硫苷 超聲波提取 響應(yīng)面法

芥子是十字花科蕓薹屬植物芥的干燥成熟種子［1］，其含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，如芥子苷、芥子堿、蛋白質(zhì)和脂肪油等［2］。芥子苷也稱硫代葡萄糖苷，簡稱硫苷，芥子的主要功效組分之一，是廣泛存在于十字花科植物中的一類含硫次生代謝產(chǎn)物［3］。

此前研究主要集中在十字花科植物中硫苷的提取分離［4］，如江敏等［5］采用沸甲醇－ 水溶液（70∶30，V／V）從西蘭花籽中提取硫苷，經(jīng)陰離子交換柱、液相制備色譜分離純化后，進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定；Wang等［6］采用乙醇浸提法從印度芥子中提取硫苷，并利用響應(yīng)面法中BBD試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)乙醇浸提工藝進(jìn)行優(yōu)化，得出最佳工藝條件。硫苷雖沒有直接的生理活性，但其在適當(dāng)?shù)臈l件下可降解成一系列的具有生理活性的降解產(chǎn)物，如抗癌活性顯著的異硫氰酸酯［7］。同時(shí)，硫苷的某些降解產(chǎn)物也會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒副作用，如甲狀腺素生長不足和腎中毒等［8］?；诹蜍战到獾睦追矫?，本試驗(yàn)擬對(duì)芥子中硫苷的提取條件進(jìn)行優(yōu)化，以期得到芥子中硫苷的最佳提取條件，為硫苷的可控降解過程研究提供參考。

超聲波提取方法由于操作過程簡單快捷、溫度低、提取率高、提取物的結(jié)構(gòu)不易破壞等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物中有效成分的提?。?－10］。但對(duì)芥子中硫苷的超聲波提取工藝的優(yōu)化研究鮮見報(bào)道。本試驗(yàn)首先根據(jù)預(yù)試驗(yàn)中乙醇浸提后和超聲波提取后原料的掃描電鏡分析結(jié)果，發(fā)現(xiàn)超聲波對(duì)芥子的細(xì)胞壁破壞顯著，從而使芥子中硫苷的溶出阻力減小，可大大提高提取率［11］。而芥子中硫苷的超聲波提取受到多種因素的影響，并且各因素之間存在交互影響，必須經(jīng)過大量試驗(yàn)探索提取工藝。因此，超聲波提取工藝中各因素對(duì)硫苷提取率的影響及其交互作用是值得深入研究的。

Plackett－Burman（PB）設(shè)計(jì)法是一種經(jīng)濟(jì)而有效的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，可以通過較少的試驗(yàn)次數(shù)，從眾多的影響因素中篩選出主要的影響因素［12－13］。而響應(yīng)面法是可以評(píng)價(jià)各因素及其交互作用，從而優(yōu)化工藝參數(shù)的目的的一種試驗(yàn)方法［14］。本研究采用Plackett－Burman（PB）設(shè)計(jì)法篩選出主要影響因素、并利用中心組合（Central Composite）設(shè)計(jì)法對(duì)篩選出的主要影響因素進(jìn)一步優(yōu)化，以期獲得芥子中硫苷的最佳超聲波提取條件，為芥子中硫苷的進(jìn)一步應(yīng)用提供參考。

1 試驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

芥子：海南省種子公司；烯丙基硫苷（純度≥98%）：美國Sigma公司；乙醇（分析純）：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲醇（色譜純）：美國Fisher公司；RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：德國IKA公司；Universal 32R高速離心機(jī)：德國Hehith公司；Scientz－ⅡE超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)：寧波新芝生物科技股份有限公司；2695高效液相色譜儀：美國Waters公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 原料預(yù)處理

芥子100℃烘干2 h，以達(dá)到充分滅活酶的目的。滅酶后原料用粉碎機(jī)充分粉碎，脫脂，干燥后備用。

1.2.2 硫苷的提取

稱取2 g芥子粉末，按照一定的液料比加入乙醇溶液，超聲波提取一定時(shí)間后離心，沉淀物重復(fù)提取1次，合并上清液，旋蒸至少量（約10 mL），取其中1 mL稀釋，過0.22μm濾膜，HPLC檢測(cè)。

1.2.3 預(yù)試驗(yàn)

稱取2 g脫脂處理后的芥子粉末，分別采用溶劑浸提法和超聲波提取法，測(cè)定其提取率。同時(shí)，對(duì)溶劑提取后和超聲處理后的原料進(jìn)行掃描電鏡（SEM）分析，觀察其細(xì)胞壁破壞的微觀形貌。

1.2.4 單因素試驗(yàn)

在影響芥子中硫苷超聲波提取的眾多因素中，選取提取溫度、提取時(shí)間、液料比、超聲時(shí)間、超聲波頻率5個(gè)主要因素進(jìn)行探討，以芥子中硫苷提取率為考察目標(biāo)，研究各因素對(duì)其的影響。

1.2.5 PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)法

PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)廣泛地用于因素主效應(yīng)的估計(jì)。根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果，確定PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)的因素和水平，對(duì)影響硫苷提取的5個(gè)因素——超聲功率、超聲時(shí)間、液料比、提取時(shí)間、乙醇濃度進(jìn)行考察，每個(gè)因素取高（1）、低（－1）2個(gè)水平，以硫苷得率為響應(yīng)值，選用N＝7的P B設(shè)計(jì)，其中2個(gè)空白作為誤差分析項(xiàng)，采用試驗(yàn)次數(shù)為12的試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

表1 Plackett－Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素及編碼值

1.2.6 最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)PB試驗(yàn)結(jié)果，確定影響顯著的因素，并根據(jù)其影響效果，確定爬坡方向，選擇合理步長，從而逼近提取率最高的區(qū)域。最陡爬坡試驗(yàn)的目的在于選出最佳提取率范圍作為響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平的中心點(diǎn)進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)［15］。

1.2.7 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)

綜合PB試驗(yàn)結(jié)果和最陡爬坡試驗(yàn)結(jié)果，采用中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)（Central Composite Design，CCD）對(duì)影響硫苷提取率的顯著因素作進(jìn)一步的探討，對(duì)芥子中硫苷的超聲波提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，以獲得最佳提取工藝。

1.3 硫苷的測(cè)定方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：XBridge C18（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.05%甲酸水溶液（A）和甲醇（B）；濃度梯度：0～20 min，A∶B ＝99∶1，20 min，A∶B ＝40∶60，21 ～30 min，A∶B ＝99∶1；流速1mL／min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量為10μL，檢測(cè)波長240 nm。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

稱取0.019 9 g烯丙基硫苷（M r＝398.47）溶解定容成50 mL溶液，制得1 mmol／L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。逐步稀釋成濃度分別為0.05、0.10、0.15、0.20、0.30、0.40 mmol／L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。濃度由低到高依次進(jìn)樣，分別進(jìn)樣2次，每次10μL。以峰面積為縱坐標(biāo)（y，mAU·s），濃度為橫坐標(biāo)（x，mmol／L），進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程y＝127.66x－104.12，R2＝0.998 9。

1.3.3 硫苷提取率的計(jì)算

烯丙基硫苷提取率采用內(nèi)標(biāo)法計(jì)算：

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)試驗(yàn)結(jié)果分析

在溶劑浸提條件（料液比1∶25，提取時(shí)間2 h，乙醇體積分?jǐn)?shù)50%，提取溫度50℃）下，硫苷提取率為0.046 5%，而在超聲波輔助溶劑浸提下的硫苷提取率可達(dá)2.037 1%，可見超聲波提取可大大提高硫苷的提取率。

為了探討超聲波提取使提取率升高的原因，分別對(duì)脫脂后、溶劑浸提和超聲波提取后的原料進(jìn)行了掃描電鏡分析，結(jié)果如圖1所示。由圖1a可知，脫脂后芥子的細(xì)胞壁仍被一層厚厚的組織覆蓋，這可能是提取的主要障礙；圖1b中，經(jīng)過乙醇浸提后，細(xì)胞表面的組織結(jié)構(gòu)仍然存在，但明顯變薄，初步可見細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)；圖1c中，覆蓋在細(xì)胞壁上的組織結(jié)構(gòu)被消除，說明超聲波作用使得細(xì)胞內(nèi)硫苷的溶出阻礙降低，進(jìn)而是硫苷提取率升高。通常固體粉末的浸提包括2個(gè)過程：首先是溶劑的浸泡作用，使得原料的細(xì)胞組織腫脹和水化；然后是在溶劑的滲透與擴(kuò)散作用下，原料中有效成分的傳質(zhì)作用［15］。超聲波提取能夠使植物細(xì)胞壁隨著超聲波的高速震動(dòng)和空穴破碎作用受到破壞，使溶劑滲透到細(xì)胞中，令其中的化學(xué)成分溶于溶劑中，從而提高提取率［16］。

圖1 不同處理方式下材料的掃描電鏡圖

2.2 超聲波提取過程的單因素試驗(yàn)

2.2.1 超聲功率對(duì)硫苷提取率的影響

在料液比15∶1（mL∶g）、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、超聲時(shí)間3 s（間歇時(shí)間5 s）和提取總時(shí)間10 min的條件下，考察不同超聲功率對(duì)硫苷提取率的影響，結(jié)果見圖2。隨著超聲功率的增加，硫苷提取率不斷增加，在300 W時(shí)達(dá)到最高，繼續(xù)升高超聲功率提取率又開始下降。這主要是因?yàn)榱蜍者@種代謝產(chǎn)物存在于植物細(xì)胞中［16］，超聲功率的增大可以有效破壞芥子的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，使硫苷類物質(zhì)得以溶出。然而，過高的超聲功率不僅破壞了細(xì)胞壁，還造成了其他水溶性雜質(zhì)的溶出［16］，另外過高的功率能耗也較大。綜合考慮超聲功率選擇300 W較為適宜。

2.2.2 提取總時(shí)間對(duì)硫苷提取率的影響

在液料比15∶1、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、超聲功率300 W、超聲時(shí)間3 s（間歇時(shí)間5 s）的條件下，考察不同提取總時(shí)間對(duì)硫苷提取率的影響，結(jié)果如圖2所示。提取時(shí)間一般越長提取效果越好，但過長的提取時(shí)間反而會(huì)使提取率下降。在提取時(shí)間為20 min時(shí)硫苷提取率最大，因此提取時(shí)間確定為20 min。

2.2.3 液料比對(duì)硫苷提取率的影響

在超聲時(shí)間3 s（間歇時(shí)間5 s）、提取總時(shí)間10 min、乙醇濃度70%、超聲功率300 W的條件下，考察不同液料比對(duì)硫苷提取率的影響，結(jié)果如圖2所示。隨著液料比的增大，硫苷的提取率呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)。通常情況下，增大液料比有助于有效成分的溶出，但液料比過大對(duì)提高硫苷提取率沒有顯著效果，反而會(huì)加大提取的成本。超聲波提取硫苷的適宜液料比為20∶1。

2.2.4 乙醇濃度對(duì)硫苷提取率的影響

在超聲時(shí)間3 s（間歇時(shí)間5 s）、提取總時(shí)間10 min、料液比15∶1、超聲功率300 W的條件下，考察不同乙醇濃度對(duì)硫苷提取率的影響，結(jié)果如圖2所示。隨著乙醇濃度的提高，硫苷提取率升高，在乙醇體積分?jǐn)?shù)50%時(shí)，提取率最高，這是由于提高乙醇濃度可增加溶劑對(duì)物料的滲透力。但是乙醇濃度過高（≥70%）不足以破壞芥子中硫苷與其他物質(zhì)的連接，而水的比例太大又會(huì)促進(jìn)其他水溶性雜質(zhì)的溶出，故選擇50%乙醇提取為佳。

2.2.5 超聲時(shí)間對(duì)硫苷提取率的影響

在料液比15∶1、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、提取總時(shí)間10 min、超聲功率300 W的條件下，考察不同超聲時(shí)間對(duì)硫苷提取率的影響，結(jié)果見圖2。當(dāng)超聲時(shí)間在2～6s時(shí)，提取率稍有下降；隨著超聲時(shí)間的繼續(xù)延長，硫苷提取率明顯降低。這可能是由于超聲時(shí)間增加，溫度升高，在溫度和超聲波的聯(lián)合作用下，破壞了硫苷的原有結(jié)構(gòu)。而超聲時(shí)間越短，超聲頻率越高，需要的能量也越大。故超聲時(shí)間選4 s為佳。

圖2 不同條件對(duì)硫苷提取率的影響

2.3 PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選影響超聲提取效果的顯著影響因素

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定Plackett Burman（PB）試驗(yàn)設(shè)計(jì)的因素與水平，PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)及響應(yīng)值見表2。運(yùn)用Design－expert 7.0軟件對(duì)各個(gè)因素進(jìn)行分析，選出顯著因素進(jìn)行進(jìn)一步分析。由表3可知，對(duì)硫苷提取率有顯著影響的因素有超聲功率和乙醇濃度（P＜0.05），且都有正效應(yīng)。因此，選取超聲功率和乙醇濃度2個(gè)參數(shù)作為進(jìn)一步考察對(duì)象。另外，影響不顯著的因素中，提取時(shí)間有正效應(yīng)，超聲時(shí)間、液料比有負(fù)效應(yīng)。

表2 Plackett Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)及響應(yīng)值

表3 PB試驗(yàn)參數(shù)估計(jì)表

2.4 最陡爬坡試驗(yàn)

由表3可以確定最陡爬坡方向，超聲功率和乙醇濃度對(duì)硫苷提取率影響最為顯著，且系數(shù)都為正，說明適當(dāng)加大超聲功率和提高乙醇濃度有利于硫苷提取。采取2個(gè)因素同時(shí)變化進(jìn)行最優(yōu)化搜索，通過設(shè)計(jì)合理步長，逼近提取率最高的區(qū)域。由表4可知，最大硫苷提取率出現(xiàn)在第2次試驗(yàn)E2附近。

表4 最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

2.5 中心組合設(shè)計(jì)

響應(yīng)面擬合方程在考察的緊接鄰域里才近似真實(shí)情形，因此，要先逼近最大提取率區(qū)域后才能建立有效的響應(yīng)面擬合方程。故以爬坡試驗(yàn)中的第2次試驗(yàn)條件作為響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平的中心點(diǎn)，在超聲時(shí)間4 s（對(duì)應(yīng)間歇時(shí)間6 s）、提取總時(shí)間25 min和液料比15∶1的條件下，進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)。二因素五水平的響應(yīng)面中心組合試驗(yàn)分析結(jié)果見表5～表6。

表5 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表6 回歸分析結(jié)果

2.6 顯著因素水平的優(yōu)化

由Design－Expert 7.0軟件擬合得到的方程為：R1＝2.65＋0.37A＋0.098B－0.32AB－0.15A2－0.46B2?；貧w方程中各變量對(duì)響應(yīng)值影響的顯著性，由F檢驗(yàn)來判定。從表6可以看出，各因素中，一次項(xiàng)A、交互項(xiàng)AB、二次項(xiàng)B2都影響顯著。而模型的校正決定系數(shù)為0.897 2，說明該模型能解釋約89.7%響應(yīng)值的變化；決定系數(shù)R2＝0.940 0，說明該模型擬合程度較好，因此可用上述模型代替真實(shí)試驗(yàn)點(diǎn)對(duì)芥子中硫苷的超聲波提取工藝進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)。

同時(shí)，運(yùn)用Design－Expert 7.0軟件對(duì)回歸方程進(jìn)行分析，可求得該方程的最大值及對(duì)應(yīng)的因素水平A＝1.000、B＝ －0.242，即超聲功率300 W、乙醇體積分?jǐn)?shù)47.58%?？紤]到實(shí)際操作，乙醇體積分?jǐn)?shù)取48%。優(yōu)化后的水解工藝參數(shù)為超聲功率300 W、超聲時(shí)間4 s（對(duì)應(yīng)間歇時(shí)間6 s）、提取總時(shí)間25 min、液料比15∶1和乙醇體積分?jǐn)?shù)48%，最大提取率為2.902%。而實(shí)際硫苷提取率為2.894%，與預(yù)測(cè)值比較接近，能很好地預(yù)測(cè)結(jié)果。

3 結(jié)論

3.1 通過超聲波輔助溶劑浸提預(yù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)超聲波能夠促進(jìn)芥子細(xì)胞壁的破壞，有利于提高硫苷提取率。

3.2 對(duì)影響超聲波提取芥子中硫苷的超聲功率、提取時(shí)間、液料比、乙醇濃度、超聲時(shí)間5個(gè)因素分別進(jìn)行了單因素考察，并采用PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)、最陡爬坡試驗(yàn)、中心組合設(shè)計(jì)篩選出對(duì)硫苷提取率有顯著影響的2個(gè)因素——超聲功率和乙醇濃度，建立了回歸方程R1＝2.65＋0.37A＋0.098B－0.32AB－0.15A2－0.46B2，擬合程度良好，可用于實(shí)際預(yù)測(cè)。

3.3 在超聲時(shí)間4 s（對(duì)應(yīng)間歇時(shí)間6 s）、提取總時(shí)間25 min和液料比15∶1的條件下，通過響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波提取硫苷的最佳工藝條件為：超聲功率300 W、乙醇體積分?jǐn)?shù)48%。在此工藝下，硫苷提取率為2.894%，高于常規(guī)溶劑提取率，且超聲波提取具有簡單省時(shí)高效的優(yōu)勢(shì)。

［1］國家藥典委員會(huì).中國人民共和國藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000

Chinese Pharmacopoeia Commission.Pharmacopeia of the People's Republic of China［M］.Beijing：Chemical Industry Press，2000

［2］郭逍遙.芥菜中硫代葡萄糖苷提取純化及穩(wěn)定性的研究［D］. 南昌大學(xué)，2007

Guo Xiaoyao.Study on extraction，purification and stability of glucosinolates from leaf mustard［D］.NanChang University，2007

［3］Fahey JW，Zalcmann A T，Talalay P.The chemical diversity and distribution of glucosinolates and isothiocyanates among plants［J］.Phytochemistry，2001，56（1）：5 －51

［4］Cools K，Terry L A.Comparative study between extraction techniques and column separation for the quantification of sinigrin and total isothiocyanates in mustard seed［J］.Journal of Chromatography B，2012，901：115－118

［5］江敏，石林娟，楊毅.西蘭花籽中蘿卜硫苷的提取，分離及結(jié)構(gòu)鑒定［J］.食品科學(xué)，2013，34（5）：124－126

Jiang Min，Shi Linjuan，Yang Yi.Extraction，Purification and Identification of Gulcoraphanin from Broccoli Seeds［J］.Food Science，2013，34（5）：124 －126

［6］Wang T，Liang H，Yuan Q.Separation and purification of sinigrin and gluconapin from defatted Indian mustard seed meals by macroporous anion exchange resin and medium pressure liquid chromatography［J］.Separation Science and Technology，2014，49：1838－1847

［7］Niels A，Carl Erik Olsen.Glucosinolate structures in evolution［J］.Phytochemistry，2012，77：16 －45

［8］Ralph Kissen，John Rossiter，Atle Bones.The ‘mustard oil bomb’：not so easy to assemble？！Localization，expression and distribution of the components of the myrosinase enzyme system［J］.Phytochemistry Reviews，2009，8 （1）：69 －86

［9］B.Mandana，A.R.Russly，S.T.Farah，et al.Comparison of different extraction methods for the extraction of major bioactive flavonoid compounds from spearmint（Mentha spicataL.）leaves［J］.Food Bioprod.Process，2010，89：67 －72

［10］盧圣樓，劉紅，臧文霞，等.響應(yīng)面法優(yōu)化神秘果葉總?cè)频某暡ㄌ崛」に嚕跩］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2013，33（6）：95－100

Lu Shenglou，Liu Hong，Zang Wenxia，et al.Optimization of ultraction of total trierpenoids from synsepalum dulcificum leaf by response surface methodology［J］.Chemistry and Industry of Forest Products，2013，33（6）：95 －100

［11］Wang T，Liang H，Yuan Q.Optimization of ultrasonicstimulated solvent extraction of sinigrin from Indian mustard seed （Brassica Juncea L.）using response surface methodology［J］.Phytochemical Analysis，2011，22（3）：205 －213

［12］Liu D，Yu F，Tan W，et al.Optimization of ultrasound extraction of nitrite nitrogen in sediment by response surface methodology［C］.Advanced Materials Research.2014，955：1466－1470

［13］Dubey K K，Behera B K.Statistical optimization of process variables for the production of an anticancer drug（colchicine derivatives）through fermentation：at scale－ up level［J］.New Biotechnology，2011，28（1）：79 －85

［14］Pan G，Yu G，Zhu C，et al.Optimization of ultrasoundassisted extraction（UAE）of flavonoids compounds（FC）from hawthorn seed （HS）［J］.Ultrasonics Sonochemistry，2012，19（3）：486－490

［15］張楨，楊賢慶，馬海霞.Plackett－Burman法和中心組合法優(yōu)化羅非魚下腳料酶解工藝［J］.食品科學(xué)，2011，32（18）：1－5

Zhang Zhen，Yang Xianqing，Ma Haixia.Optimization of Enzymatic Hydrolysis of Tilapoa Waste by Plackett－Burman Design and Central Composite Design［J］.Food Science，2011，32（18）：1 －5

［16］Vinatoru M.An overview of the ultrasonically assisted extraction of bioactive principles from herbs［J］.Ultrasonics Sonochemistry，2001，8（3）：303 －313.

Optimization of Ultrasound Extraction of Sinigrin from Mustard Seed by Plackett－Burman Design and Response Surface Methodology

Huang Wenhong1Feng Yuhong1Li Jiacheng1Yan Huiqiong2Gao Pengbo1Wang Chunxiu1Zhang Yongli1Wang Lining1
（College of Materials and Chemical Engineering，Hainan University1，Haikou 570228）
（College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University2，Haikou 571100）

The conclusion that the yield of sinigrin can be improved under ultrasound extraction was obtained with the pre－test and scanning electron microscopy analysis，and then the optimal ultrasound extraction conditions of sinigrin from mustard seed were studied.On the basis of single factor tests，ultrasound power and ethanol concentration were identified by Plackett－Burman（PB）design as main factors that influence ultrasound extraction.And the optimal regions were approached by the steepest ascent design.Then using central composite design and response surface analysis，the optimal ultrasound extraction conditions were as follows：the instrument parameters：ultrasound power 300 W，ultrasound time 4 s （interval time 6 s），total extraction time 25 min，ratio of liquid to solid 15∶1（mg／L），ethanol concentration 48%.Under this optimum condition，the yield was 2.902%，which was very close to 2.894%of prediction value.The result shows that the ultrasound extraction conditions of sinigrin from mustard seed can be well optimized by PB design combined response surface methodology.

mustard seed，sinigrin，ultrasound extraction，response surface methodology

TS20

A

1003－0174（2016）07－0076－06

國家科技支撐計(jì)劃（2011BAE06B04－07），海南省重點(diǎn)科技計(jì)劃（ZDXM20120003），?？谑兄攸c(diǎn)科技計(jì)劃項(xiàng)目（2014055），海南省自然科學(xué)基金（213010），海南省自然科學(xué)基金（20152020）

2014－11－02

黃文紅，女，1990年出生，碩士，化學(xué)工程

馮玉紅，女，1969年出生，教授，纖維素改性及生物材料