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        Caspase-9(-1263A/G)多態(tài)性與中國漢族男性士兵下腰痛的相關(guān)性研究

        2015-12-31 11:22:05陳玙炫王炳軍趙哲媛陳迎春張安定
        脊柱外科雜志 2015年4期
        關(guān)鍵詞:裝甲兵軍事訓(xùn)練多態(tài)性

        陳玙炫,吳 波,王炳軍,趙哲媛,陳迎春,張安定

        Caspase-9(-1263A/G)多態(tài)性與中國漢族男性士兵下腰痛的相關(guān)性研究

        陳玙炫,吳 波,王炳軍,趙哲媛,陳迎春,張安定

        目的 探索凋亡相關(guān)基因Caspase-9(-1263A/G)多態(tài)性與中國漢族男性士兵的訓(xùn)練性下腰痛及疼痛程度的相關(guān)性。方法 于某步兵團(tuán)和某裝甲團(tuán)分別選取247名和245名中國男性漢族士兵,按診斷標(biāo)準(zhǔn)分為下腰痛組和對(duì)照組,對(duì)下腰痛組患者進(jìn)行疼痛視覺模擬量表(visualanaloguescale,VAS)評(píng)分。抽取全部研究對(duì)象的外周靜脈血,提取白細(xì)胞DNA,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)擴(kuò)增,DNA測(cè)序儀檢測(cè)Caspase-9(-1263A/G)位點(diǎn)的基因型,分析該位點(diǎn)與訓(xùn)練性下腰痛是否存在相關(guān)性。結(jié)果 在步兵群體中,下腰痛組AA基因型的分布頻率明顯低于對(duì)照組,而GG基因型的分布頻率要高于對(duì)照組,組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);在裝甲兵群體中,AA基因型在下腰痛組中的分布頻率同樣低于對(duì)照組,GG基因型高于對(duì)照組,組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Caspase-9(-1263A/G)位點(diǎn)與下腰痛士兵VAS評(píng)分的相關(guān)性分析表明,攜帶GG基因型的裝甲兵患者的VAS評(píng)分更高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),下腰痛更為嚴(yán)重,但在步兵群體中不存在這種相關(guān)性,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 Caspase-9(-1263A/G)多態(tài)性與中國漢族步兵和裝甲兵的訓(xùn)練性下腰痛相關(guān),并且與裝甲兵下腰痛患者的嚴(yán)重程度存在相關(guān)性。

        半朧氨酸天冬氨酸蛋白酶;多態(tài)性,單核昔酸;腰痛;統(tǒng)計(jì)學(xué)

        JSpinalSurg,2015,13(4):243-246

        下腰痛是軍事訓(xùn)練中發(fā)生率較高的訓(xùn)練傷,不僅影響軍事訓(xùn)練的正常進(jìn)行,還消耗大量的醫(yī)療資源[1]。盡管引起軍事訓(xùn)練性下腰痛的可能因素有很多,但其發(fā)生因素和機(jī)制仍不明確。有研究表明,下腰痛的發(fā)生機(jī)制中遺傳因素起到重要的作用[2-3]。

        細(xì)胞凋亡是椎間盤細(xì)胞數(shù)減少的關(guān)鍵因素,有可能是椎間盤退變和突出的始動(dòng)因素。凋亡的主要執(zhí)行者天冬氨酸特異性半朧氨酸蛋白水解酶(cysteinylaspartatespecificprotease,Caspase)家族能介導(dǎo)級(jí)聯(lián)水解活化反應(yīng),參與細(xì)胞程序性死亡過程。Caspase-9能夠調(diào)控配體介導(dǎo)的外源性凋亡途徑和線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源性凋亡途徑,其中內(nèi)源性凋亡對(duì)于椎間盤細(xì)胞尤為重要[4-5]。椎間盤細(xì)胞數(shù)量的減少會(huì)導(dǎo)致椎間盤細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子和細(xì)胞外基質(zhì)成分的相對(duì)下降,從而引起椎間盤本身的退變及周圍韌帶、終板、軟骨等組織的變化。因此,本研究假設(shè)Caspase-9(-1263A/G)多態(tài)性位點(diǎn)與下腰痛存在相關(guān)性,采用病例對(duì)照研究,探索該多態(tài)性位點(diǎn)在軍事訓(xùn)練性下腰痛及其嚴(yán)重程度中的作用。

        1 對(duì)象及方法

        1.1 研究對(duì)象

        選取中國漢族男性士兵492名,年齡17~22歲,平均19.76歲。其中步兵247名,裝甲兵245名,軍齡1~4年,可參加正常的軍事訓(xùn)練,服役前曾有下腰痛病史的不納入本研究。按病例對(duì)照研究方法,將研究對(duì)象分為對(duì)照組(n=276;步兵136名,裝甲兵140名)和下腰痛組(n=216;步兵111名,裝甲兵105名)。下腰痛組納入條件:①有持續(xù)>2周下腰痛病史;②累計(jì)因下腰痛缺席訓(xùn)練≥3d;對(duì)照組納入條件:無持續(xù)>3d的下腰痛病史;②無因軍事訓(xùn)練引起的下腰痛導(dǎo)致的病假史。同一部隊(duì)(團(tuán))研究對(duì)象的生活方式、飲食條件和作息時(shí)間相同,分別完成各自的訓(xùn)練安排科目。全部病假記錄和醫(yī)療記錄在醫(yī)療機(jī)構(gòu)完整可查。本研究經(jīng)過軍事醫(yī)學(xué)研究部門批準(zhǔn)。所有研究對(duì)象知情同意,并簽署知情同意書。

        1.2 SNP位點(diǎn)基因型檢測(cè)

        1.2.1 基因組DNA的提取

        抽取研究對(duì)象外周靜脈血5mL,構(gòu)椽酸鈉抗凝,采用DNA提取試劑盒(QIAGEN公司,美國)提取基因組DNA。

        1.2.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)擴(kuò)增

        引物序列采用Primer5.0軟件設(shè)計(jì),由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,上游引物為5’-TGCCTGGGACTTAGCAAATG-3’;下游引物為5’-AGATCGCAGTTGACTGTTCCA-3’。PCR反應(yīng)體系10μL,包括:反應(yīng)緩沖液1.0μL,TaqDNA聚合酶0.5μL,dNTPs(10mmol/L)1.0μL,基因組DNA1.0μL,上下游引物各0.2μL,H2O6.1μL。PCR反應(yīng)條件:95℃5min,94℃變性30s,60℃退火30s,72℃延伸45s,共進(jìn)行50個(gè)循環(huán)。

        1.2.3 DNA測(cè)序

        引物包含Caspase-9(-1263A/G)位點(diǎn)前后120bp左右的堿基,采用DNA測(cè)序分析儀(Applied Biosystems公司,美國)分析此片段的DNA序列,根據(jù)測(cè)序結(jié)果得到Caspase-9(-1263A/G)位點(diǎn)基因型。

        1.3 下腰痛疼痛視覺模擬量表(visualanalogue scale,VAS)評(píng)分[6]

        通過VAS評(píng)分,量化下腰痛患者治療前的疼痛程度,0~3分表示輕度疼痛,4~6分表示中度疼痛,7~10分表示重度疼痛。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,定量資料用ˉx±s表示。下腰痛組和對(duì)照組的個(gè)體特征比較采用χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)。χ2檢驗(yàn)評(píng)價(jià)樣本是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(Excel)以及下腰痛組和對(duì)照組間的基因型和等位基因型頻率分布差異是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,并計(jì)算其比值比(oddsratio,OR)值和95%可信區(qū)間。不同基因型間VAS評(píng)分分析采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 Caspase-9在2個(gè)兵種中的相關(guān)性

        2個(gè)兵種的下腰痛組與對(duì)照組間的年齡、身高、體重和吸煙情況比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具體見表1,2。經(jīng)檢驗(yàn),各組基因型分布頻率符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。

        在步兵群體中,下腰痛組AA基因型的分布頻率明顯低于對(duì)照組,GG基因型的分布頻率要高于對(duì)照組,組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),AG基因型分布頻率組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);而在裝甲兵群體中,AA基因型在下腰痛組中分布頻率也要低于對(duì)照組,GG基因型分布高于對(duì)照組,組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),AG基因型分布頻率組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具體見表3。這說明,Caspase-9(-1263A/G)位點(diǎn)多態(tài)性與軍事訓(xùn)練引發(fā)的下腰痛存在相關(guān)性,且GG基因型是其易感基因型。

        表1 步兵個(gè)體特征Tab.1 Characteristicsofinfantr

        表2 裝甲兵個(gè)體特征Tab.2 Characteristicsofarmor

        表3 各組Caspase-9基因多態(tài)性Tab.3 Caspase-9polymorphismofeachgroup

        2.2 Caspase-9(-1263A/G)多態(tài)性與下腰痛VAS分級(jí)的相關(guān)性分析

        所有下腰痛患者按VAS評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)分,將下腰痛的疼痛程度分為輕度、中度和重度疼痛。在步兵群體中,Caspase-9(-1263A/G)位點(diǎn)的3種基因型間VAS評(píng)分,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見表4);而在裝甲兵群體中,不同基因型間的VAS評(píng)分,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),攜帶GG基因型的個(gè)體VAS評(píng)分較高,下腰痛更加嚴(yán)重(見表5)。

        表4 步兵下腰痛組各基因型VAS評(píng)分Tab.4 VASscoreofeachgenotypeincasegroupofinfantry

        表5 裝甲兵下腰痛組各基因型VAS評(píng)分Tab.5 VASscoreofeachgenotypeincasegroupofarmor

        3 討論

        職業(yè)性下腰痛已成為影響工作和生活的問題之一[7-8]。下腰痛的發(fā)生沒有明顯的發(fā)病年齡,在青年時(shí)期也會(huì)出現(xiàn),持續(xù)且不易恢復(fù)[9-10]。年輕士兵短期內(nèi)進(jìn)行大強(qiáng)度軍事訓(xùn)練,往往會(huì)引發(fā)相關(guān)的肌肉骨骼系統(tǒng)疾患,訓(xùn)練性下腰痛是影響軍事訓(xùn)練的原因之一。

        Caspase能夠同時(shí)介導(dǎo)外源性和內(nèi)源性的細(xì)胞凋亡途徑,其中Caspase-9在內(nèi)源性凋亡途徑中發(fā)揮關(guān)鍵作用。以往的研究表明,Caspase-9基因的多態(tài)性與腫瘤存在相關(guān)性[11-12];Guo等[13]報(bào)道,Caspase-9(-1263A/G)多態(tài)性在腰椎間盤疾病中扮演著重要的角色。

        本研究發(fā)現(xiàn)在2個(gè)兵種群體中,Caspase-9(-1263A/G)位點(diǎn)的基因型頻率在下腰痛組和對(duì)照組間的分布均存在差異,說明該位點(diǎn)與軍事訓(xùn)練性下腰痛存在相關(guān)性。結(jié)果表明,攜帶GG基因型的士兵群體患下腰痛的風(fēng)險(xiǎn)要高于其他基因型,是該位點(diǎn)在訓(xùn)練性下腰痛中的易感基因型;相反,AA基因型作為保護(hù)基因型,使士兵患下腰痛的風(fēng)險(xiǎn)降低。Caspase-9(-1263A/G)多態(tài)性位點(diǎn)位于Caspase-9基因的啟動(dòng)子區(qū)域,可以猜測(cè)此位點(diǎn)通過影響Caspase-9基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)來調(diào)控Caspase-9在椎間盤及周圍組織的生物學(xué)作用,進(jìn)而造成不同基因型之間椎間盤、軟骨、韌帶等組織耐受能力不同,最終導(dǎo)致下腰痛易感性的差異。

        本研究將2個(gè)兵種的下腰痛患者進(jìn)行VAS評(píng)分,發(fā)現(xiàn)在裝甲兵群體中,GG基因型下腰痛患者的VAS評(píng)分較AG和AA基因型高,下腰痛更加嚴(yán)重。但是,在步兵群體中卻沒有得到相同的結(jié)論,各基因型間的評(píng)分并無差異。這可能與樣本量有關(guān),也可能與下腰痛發(fā)生因素的交互作用有關(guān)。當(dāng)本研究針對(duì)訓(xùn)練性下腰痛患者進(jìn)行分析時(shí),各基因型群體的樣本量有一定程度的下降,結(jié)果可能出現(xiàn)一定的偏離。另外,下腰痛是一種病因極為復(fù)雜的疾?。?4],遺傳因素絕不是唯一的影響因素,環(huán)境因素同樣不可忽視[15]。近期的研究表明,諧振對(duì)下腰痛的發(fā)生有重要的影響作用[16-17],裝甲兵在軍事訓(xùn)練中接觸諧振的機(jī)會(huì)要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于步兵。可以假設(shè),諧振的存在使遺傳因素對(duì)訓(xùn)練性下腰痛的作用產(chǎn)生一個(gè)放大的效應(yīng),下腰痛患者的癥狀更明顯。這種環(huán)境—基因交互作用在很多復(fù)雜疾病的發(fā)生機(jī)制中都占有重要位置,當(dāng)然同一種疾病的基因—基因交互作用也不可忽視,這些因素需要在今后的研究中進(jìn)一步的探索。

        下腰痛是一個(gè)由病理學(xué)、生物力學(xué)、心理學(xué)和社會(huì)學(xué)等多因素引發(fā)的疾病,隨著醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展,遺傳因素在下腰痛的發(fā)生機(jī)制中的地位逐漸提升。本研究分析了Caspase-9(-1263A/G)多態(tài)性與訓(xùn)練性下腰痛的關(guān)系,結(jié)果表明該位點(diǎn)與中國漢族步兵和裝甲兵的訓(xùn)練性下腰痛存在相關(guān)性,且與裝甲兵下腰痛患者的嚴(yán)重程度有關(guān)。期望本研究能夠明確遺傳因素在訓(xùn)練性下腰痛發(fā)生中的作用,而且可以為選拔士兵和預(yù)防軍事訓(xùn)練傷提供幫助。

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        StudyonassociationbetweenCaspase-9(-1263A/G)polymorphismandlowbackpaininChineseHansoldiers

        CHENYu-xuan*,WUBo,WANGBing-jun,ZHAOZhe-yuan,CHENYing-chun,ZHANGAn-ding.*Centeroftraumatic orthopedic,154thHospitalofPeople'sLiberationArmy,Luoyang,464000,Henan,China

        Objective ToexploretheassociationbetweenCaspase-9(-1263A/G)polymorphismandmilitarytraining relatedlowbackpainwithdifferentseveritiesinChineseHanmalesoldiers.Methods Atotalof247ChineseHanmale soldierswerechosenfromaninfantryregimentand245werechosenfromanarmoredregiment.Allsubjectsweredividedinto casegroupandcontrolgroup.Visualanaloguescale(VAS)scoreswererecordedincasegroup.GenomicDNAwasextracted fromperipheralbloodleukocytesofeachsubjectusingstandardprotocols.TheDNAfragmentcontainingthepolymorphic sequencewasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR).PCRproductsweregenotypedtodeterminethegenotypeof Caspase-9(-1263A/G).Whethertherewasanassociationbetweenthegeneticlocusandmilitarytrainingrelatedlowback painwasanalyzed.Results Intheinfantryregiment,AAgenotypewaslowerincasegroupthanthatincontrolgroup(P<0.01),andGGgenotypeincasegroupwashigherthanthatincontrolgroup(P<0.01).Inthearmoredregiment,AA genotypeincasegroupwasalsolowerthanthatincontrolgroup(P<0.01),andGGgenotypeincasegroupwashigherthan thatincontrolgroup(P<0.01).ThearmorwithGGgenotypescoredhigheronVASscores(P<0.05).However,therewas noassociationbetweenthepolymorphismandpainseveritiesamongtheinfantry(P>0.05).Conclusion Thereisan associationbetweenCaspase-9(-1263A/G)polymorphismandmilitarytrainingrelatedlowbackpaininChineseHaninfantry andarmor.Inaddition,Caspase-9(-1263A/G)polymorphismwasassociatedwithpainseverityinthearmor.

        Caspases;Polymorphism,singlenucleotide;Lowbackpain;Statistics

        R345

        A

        1672-2957(2015)04-0243-04

        10.3969/j.issn.1672-2957.2015.04.012

        2014-03-12)

        (本文編輯 張建芬)

        陳玲炫(1987—),碩士,醫(yī)師

        464000 河南,解放軍154醫(yī)院創(chuàng)傷骨科中心(陳玲炫,吳波,王炳軍,陳迎春,張安定);河南省洛陣市中心醫(yī)院整形外科(趙哲媛)

        吳波 13569755078@163.com

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