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        重慶市榮昌區(qū)豬瘟病毒的分子生物學檢測

        2015-12-31 12:44:06蔣夢娜曹禮靜范才良
        四川畜牧獸醫(yī) 2015年10期
        關鍵詞:榮昌豬瘟陽性率

        蔣夢娜 ,曹禮靜 ,李 超 ,范才良 ,蔣 慶 *

        (1.西南大學榮昌校區(qū)動物醫(yī)學系,重慶 榮昌 402460;2.重慶市榮昌區(qū)職教中心,重慶 榮昌 402460;3.西南大學榮昌校區(qū)水產系,重慶 榮昌 402460;4.重慶市榮昌區(qū)畜牧獸醫(yī)局,重慶 榮昌 402460)

        1 材料

        1.1 儀器 0.1~2.5、10~100、100~1 000 μL 微量加樣器,TGL20M高速冷凍離心機,96空梯度PCR(德國),WD800D微波爐,DYY-6B穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀,ChampGel60001全自動凝膠成像系統(tǒng),F(xiàn)A2104S電子天平。

        1.2 試劑盒 豬瘟病毒通用型RT-PCR檢測試劑盒(北京世紀元亨動物防疫技術有限公司生產),批號:CSF20150214P,生產日期:20150214。

        2 方法

        2.1 樣品采集 2015年2月26日、3月5日、3月12日、3月19日、3月26日、4月2日于榮昌區(qū)某屠宰場進行6次采樣,每次隨機采取5份豬淋巴結,共計30份,用滅菌自封袋統(tǒng)一編號置-20℃冰箱保存待檢。

        2.2 試驗操作 直接用RT-PCR方法檢測,具體操作根據(jù)試劑盒說明書進行。

        3 結果

        本次試驗共檢測30份豬淋巴結,檢測得出豬瘟病毒陽性0份,陽性率為0%,圖1、圖2、圖3分別為RT-PCR對30份淋巴結的檢測結果。

        圖1 RT-PCR檢測結果

        圖2 RT-PCR檢測結果

        圖3 RT-PCR檢測結果

        4 結論與分析

        4.1 結論 本次試驗共檢測了30份豬淋巴結樣本,結果豬瘟陽性率為0%。表明榮昌區(qū)2015年春季不存在豬瘟感染。

        4.2 分析 本次檢測HCV陽性率為零的原因,筆者認為有以下幾點:首先榮昌地區(qū)連續(xù)3年使用了政府采購的合格的豬瘟疫苗;二是榮昌區(qū)普遍在30~35日齡閹割仔豬時進行豬瘟首免,散養(yǎng)戶在春秋季進行集中免疫,同時給空懷母豬也要進行免疫,規(guī)模養(yǎng)殖場在70~80日齡會自主進行二次免疫;三是榮昌人有良好的養(yǎng)豬習慣和上千年的養(yǎng)豬經驗,懂得盡快讓仔豬吃上初乳來獲得母源抗體,使得初生仔豬具有較強的免疫力。

        4.3 豬瘟診斷方法的選擇 傳統(tǒng)的豬瘟診斷方法主要包括兔體交叉免疫診斷、免疫酶染色試驗、病毒分離與增毒試驗、免疫熒光試驗、豬瘟間接血凝試驗等等,新發(fā)展的檢測方法有:ELISA試驗、RT-PCR檢測試驗、DNA探針、膠體金試紙檢測、血清中和試驗等。常用的診斷如兔體交叉試驗,靈敏度高,但耗時長且需要活體無抗兔;RT-PCR具有特異性強、快速和可靠性高的優(yōu)點。對豬瘟進行診斷或流行病學調查時,應用RT-PCR檢測是較理想的選擇[1-3]。

        4.4 豬瘟疫苗品種的選擇 如亞單位疫苗、重組疫苗、DNA疫苗、標記疫苗,目前各個養(yǎng)殖場普遍使用豬瘟兔化弱毒疫苗[4]。雖然HCV存在不同的基因群,但并未發(fā)現(xiàn)不同的血清型,說明血清學上的差異并不明顯。我國雖然存在多基因型的毒株,但是HCV已經發(fā)生的基因變異尚未對目前的豬瘟免疫構成威脅,豬瘟兔化弱毒苗對不同基因型毒株仍可產生交叉保護力[5]。

        4.5 導致豬瘟免疫失敗的可能原因 主要受疫苗質量、免疫操作、免疫程序、持續(xù)感染、牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)干擾、免疫抑制病干擾的影響;另外,飼養(yǎng)管理不當、豬的營養(yǎng)狀況和人為因素等也會影響免疫成敗。

        [1] 胡曉苗,張丹俊,汪麗,等.豬瘟病毒實驗室診斷研究進展[J].畜禽業(yè),2007(3):21-23.

        [2] 曲春玲.豬瘟診斷技術的比較[J].中國動物保健,2014,16(6):55-56.

        [3] 杭麗,皇甫抗棟,沈玉磊.豬瘟診斷技術的研究進展[J].中國畜禽種業(yè),2013(1):46-48.

        [4] 羅廷榮,莫揚,吳文德,等.RT-PCR技術檢測豬瘟病毒的應用研究[J].中國預防獸醫(yī)學報,2004,26(4):307-312.

        [5] 涂長春,萬遂如.我國豬瘟的流行現(xiàn)狀、原因與防制對策[A].豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業(yè)委員會第7次學術交流會論文集[C].2002:5-8.

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