老年樁核冠修復(fù)前后齦溝內(nèi)致齲菌定植數(shù)量變化

徐仰龍鄒雪辛秉昌1

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬口腔醫(yī)院，貴州遵義563003)

摘要〔〕目的探討老年人樁核冠修復(fù)前后齦溝內(nèi)致齲菌定植數(shù)量變化情況。方法選取2011年5月至2013年5月在該院口腔修復(fù)科進行單側(cè)下頜第一磨牙樁核冠修復(fù)的老年患者36例。將患者一側(cè)樁核冠修復(fù)的牙齒作為受試組，對側(cè)健康的下頜第一磨牙為對照組。受試牙預(yù)備前，預(yù)備后72 h、1 w，冠修復(fù)后1個月，分別收集牙根面菌斑，之后進行厭氧菌培養(yǎng)，對其中的變異鏈球菌、黏性放線菌及內(nèi)氏放線菌進行鑒定和計數(shù)。結(jié)果預(yù)備后1 w受試組菌落計數(shù)均明顯高于對照組(P<0.05)；預(yù)備后72 h和1 w受試組菌落計數(shù)均明顯高于預(yù)備前(P<0.05)。受試組內(nèi)氏放線菌菌落計數(shù)在預(yù)備前明顯低于對照組，預(yù)備后1 w明顯高于對照組(P<0.05)；受試組黏性放線菌菌落計數(shù)在預(yù)備后72 h和1 w時均明顯高于對照組(P<0.05)；受試組內(nèi)氏放線菌及黏性放線菌在預(yù)備后1 w、修復(fù)后1個月均明顯高于預(yù)備前(P<0.05)。結(jié)論變異鏈球菌、內(nèi)氏放線菌及黏性放線菌在預(yù)備1 w菌落計數(shù)明顯增加，修復(fù)后1個月菌落計數(shù)降低。在牙體預(yù)備后初期，應(yīng)注意患者菌斑的控制。

關(guān)鍵詞〔〕樁核冠；變異鏈球菌；放線菌

中圖分類號〔〕R78〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：貴州省科技廳聯(lián)合基金資助項目(No.黔科合J字LKZ〔2010〕02號)

通訊作者：辛秉昌(1982-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事齲病病因與預(yù)防研究。

1青島市口腔醫(yī)院

第一作者：徐仰龍(1981-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事齲病病因與預(yù)防研究。

基牙根面齲是樁核冠修復(fù)術(shù)后主要并發(fā)癥之一，其發(fā)生率為3%~20%〔1〕。研究〔2〕顯示，變異鏈球菌、黏性放線菌及內(nèi)氏放線菌是老年人根面的主要致齲菌。目前國內(nèi)外對老年人樁核冠修復(fù)前后根面致齲菌定植數(shù)量變化的系統(tǒng)研究較為少見。本次研究通過選取在本院口腔修復(fù)科就診的老年無咬合功能的下頜第一磨牙樁核冠修復(fù)患者，觀察其在修復(fù)過程中及修復(fù)完成后變異鏈球菌與放線菌的定植情況及變化趨勢。

1資料與方法

1.1一般資料選取2011年5月至2013年5月在本院口腔修復(fù)科就診的老年無咬合功能的下頜第1磨牙樁核冠修復(fù)患者36例。納入標準：年齡≥65歲，無明顯牙周炎癥且下頜第1磨牙殘根殘冠咬合功能喪失；受試牙可經(jīng)過根管治療得到保存和修復(fù)；近1個月內(nèi)無服用抗菌藥物史；患者自愿參與本次研究，能夠按要求進行日?？谇痪S護；樁核冠修復(fù)：鈦樁+3M樹脂+純鈦烤瓷冠，肩臺寬1 mm，冠邊緣在齦下0.5 mm。排除標準：患者口中已有修復(fù)體；存在嚴重的頜骨及顳下頜關(guān)節(jié)疾??；存在嚴重的全身系統(tǒng)性疾病。將入選患者一側(cè)樁核冠修復(fù)的牙齒作為受試組，對側(cè)健康的下頜第1磨牙為對照組。

1.2實驗材料參考菌株為ATCC12104(內(nèi)氏放線菌模式株)和ATCC15987(黏性放線菌模式株)均由吉林大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院提供。TaqDNA聚合酶、20 mmol/L MgCl2溶液、特異性引物，購于北京賽百盛基因技術(shù)有限公司；10%十二烷基硫酸鈉(SDS)、1 mol/L (Tris)溶液、0.5 mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)溶液、STE緩沖液 (pH8.0)、PCR緩沖液、4 mmol/L NaAc(pH5.2)，均購于湖北鴻運隆生物科技有限公司。

1.3研究方法

1.3.1細菌生化和形態(tài)學(xué)鑒定生理鹽水漱口后，用無菌挖器對下頜第1磨牙齦溝內(nèi)的牙菌斑進行收集。分別在患者基牙預(yù)備后72 h、1 w，修復(fù)后1個月時取樣本，將取樣管放置于渦旋器上2 min進行分散，之后選用磷酸鹽緩沖液(PBS)將樣本稀釋至10-2、10-3。用接種環(huán)取60 μl稀釋液接種于放線菌和輕唾-桿菌肽瓊脂選擇性培養(yǎng)基，劃線涂布均勻并編號。在37℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)48 h。之后進行菌斑的形態(tài)學(xué)觀察以及革蘭染色鑒別，對放線菌及變異鏈球菌采取生化鑒定。

參考文獻1.3.2放線菌菌種驗證使用PCR技術(shù)對內(nèi)氏放線菌及黏性放線菌進行鑒定。設(shè)計引物〔3〕。其中內(nèi)氏放線菌正義引物序列設(shè)計為5′-CCTTGTCCTCGATCACAGCA-3′，反義引物序列設(shè)計為5′-CCGCTCATCGCGGCACA-3′，設(shè)定擴增長度為180 bp；黏性放線菌正義引物序列設(shè)計為5′-CGTCCGCGCTGATCGCGGTA-3′，反義引物序列為5′-CCGTGCCTCCCGCCAT-3′，設(shè)定擴增長度為161 bp。

2結(jié)果

2.1形態(tài)學(xué)觀察變異鏈球菌在MS平板表現(xiàn)為半透明、邊緣齊整的菌落；在光學(xué)顯微鏡下觀察顯示為成呈鏈狀排列的革蘭陽性球菌。黏性放線菌在厭氧血瓊脂平板表現(xiàn)為直徑0.6 mm的乳白色、邊緣齊整的黏性菌落；在光學(xué)顯微鏡下觀察顯示為革蘭陽性，形態(tài)不規(guī)則的桿狀菌。內(nèi)氏放線菌在厭氧血瓊脂平板上表現(xiàn)為淡黃色、邊緣整齊的菌落；在光學(xué)顯微鏡下觀察顯示為形態(tài)不規(guī)則的分枝桿菌。

2.2放線菌PCR驗證使用PCR技術(shù)進行檢測，BIO-RAD凝膠成像系統(tǒng)對電泳條帶進行觀察和記錄，結(jié)果顯示，顯示出的電泳條帶均為單一條帶，片段與目的片段長度完全相符，同形態(tài)學(xué)觀察和生化檢查結(jié)果一致。

2.3變異鏈球菌不同時期的檢出率及菌落計數(shù)變異鏈球菌的檢出率各時間點間均無差異(P>0.05)；預(yù)備后1 w受試組菌落計數(shù)均明顯高于對照組(P<0.05)；預(yù)備后72 h和1 w受試組菌落計數(shù)均明顯高于預(yù)備前(P<0.05)。見表1。

2.4放線菌不同時期的檢出率及菌落計數(shù)各時間點兩組內(nèi)氏放線菌及黏性放線菌的檢出率之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；受試組內(nèi)氏放線菌菌落計數(shù)在預(yù)備前明顯低于對照組，預(yù)備后1 w明顯高于對照組(P<0.05)；受試組黏性放線菌菌落計數(shù)在預(yù)備后72 h和1 w時均明顯高于對照組(P<0.05)；受試組內(nèi)氏放線菌及黏性放線菌在預(yù)備后1 w、修復(fù)后1個月均明顯高于預(yù)備前(P<0.05)。見表2。

表1　不同時期變異鏈球菌的檢出率及菌落計數(shù) ± s, n=36)

與同期對照組比較：1)P<0.05；與預(yù)備前比較：2)P<0.05；下表同

表2　放線菌不同時期的檢出率及菌落計數(shù) ± s, n=36)

A為內(nèi)氏放線菌；B為黏性放線菌

3討論

研究〔4〕顯示，根面齲的發(fā)病率伴隨著年齡的增長逐漸上升，其發(fā)生主要由于根面礦物質(zhì)被菌斑微生物代謝產(chǎn)物溶解。本次研究中在對照組牙齦溝內(nèi)菌斑和預(yù)備基牙的形成初期菌斑中變異鏈球菌及放線菌廣泛存在。相關(guān)研究〔5〕顯示，導(dǎo)致修復(fù)最終失敗的主要原因為固定和全冠修復(fù)體邊緣繼發(fā)齲。固定修復(fù)之后繼發(fā)齲的發(fā)病率較高，主要原因為全冠邊緣具有的特殊解剖結(jié)構(gòu)導(dǎo)致清理困難。在繼發(fā)根面齲之后，食物殘渣在局部更易滯留，對硬組織造成破壞。同時，根面修復(fù)材料的理化性質(zhì)、冠邊緣適應(yīng)性等因素也影響齦溝內(nèi)菌斑的形成。

本研究結(jié)果與基牙預(yù)備之后根面菌斑的重新產(chǎn)生相關(guān)。在牙菌斑生成的初期，6~72 h內(nèi)主要為球菌的大量聚集，72 h之后主要表現(xiàn)為桿菌與絲狀菌數(shù)增加，1 w之后主要為球菌及放線菌。基牙預(yù)備之后，將牙本質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)重新顯露出來，同之前的界面相比具有明顯差異。以上因素共同對變異鏈球菌在新界面的生長黏附造成了影響。修復(fù)后1個月該菌量恢復(fù)至修復(fù)前水平，其與冠軸面的恢復(fù)相關(guān)，同時可能生長空間逐漸變小，該菌為兼性厭氧菌，牙齦溝內(nèi)的電勢處于較低水平，對該菌的生長不利。

黏附素和生物膜中的受體蛋白是放線菌黏附的主要依賴因素。此外，Ⅱ型菌斑對放線菌和異種菌之間的共聚反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用也能夠促進菌斑的成熟〔6〕。本研究提示黏性放線菌與內(nèi)氏放線菌相比更易早期定植于根面。另外，臨床工作中在修復(fù)手術(shù)后初期應(yīng)嚴格控制根面菌斑。預(yù)備前對照組根面內(nèi)氏放線菌的檢出量明顯高于受試組，可能與該種放線菌更易定植于健康根界面相關(guān)。預(yù)備后1 w受試組內(nèi)氏放線菌數(shù)明顯高于對照組，可能原因為牙體預(yù)備后根面牙本質(zhì)顯露出的膠原蛋白明顯高于預(yù)備前，進而提供了大量放線菌黏附位點。

4參考文獻

1李行懿，陳娜，劉聰，等.老年患者基牙齲病與可摘局部義齒關(guān)系的臨床研究〔J〕.中國醫(yī)刊，2011；46(10)：44-6.

2陳洪，何靜.復(fù)合樹脂加玻璃離子夾層修復(fù)老年后牙根面齲42例〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2011；31(21)：4238-9.

3楊燃，鄒靜，李繼遙.兒童口腔放線菌與兒童齲的關(guān)系初探〔J〕.華西口腔醫(yī)學(xué)雜志，2007；25(6)：568-70.

4盛繼英.老年人根面齲相關(guān)危險因素分析〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2013；33(19)：4881-2.

5李欣，雷勝男，何祥一，等.根面不同處理方法對覆蓋基牙繼發(fā)齲影響的研究〔J〕.口腔醫(yī)學(xué)研究，2012；28(2)：143-5.

6賴光云，李鳴宇.繼發(fā)齲的研究進展〔J〕.國際口腔醫(yī)學(xué)雜志，2010；37(1)：113-5，119.

〔2014-02-11修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)