馬齒莧水提取物對(duì)咳嗽小鼠模型的鎮(zhèn)咳祛痰作用

王國(guó)玉1王浩宇1孫嘉楠1佟繼銘

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北承德067000)

摘要〔〕目的觀察馬齒莧水提取物(WEPO)的鎮(zhèn)咳祛痰作用。方法采用超聲霧化氨水引咳法誘發(fā)小鼠咳嗽，將咳嗽次數(shù)合格的小鼠隨機(jī)分為WEPO 小、中、大(1.25、2.5、5.0)g/kg劑量組、生理鹽水對(duì)照組、咳必清陽(yáng)性對(duì)照組。以引咳潛伏期及咳嗽次數(shù)/2 min為指標(biāo)，評(píng)價(jià)WEPO的鎮(zhèn)咳作用。采用小鼠氣管酚紅分泌量法，以氣管分泌液中酚紅分泌量為指標(biāo)，觀察WEPO祛痰作用。結(jié)果WEPO 大、中、小劑量組引咳潛伏期分別為(38.54±5.63)s、(30.97±4.78)s、(19.58±4.32)s，均明顯長(zhǎng)于生理鹽水對(duì)照組〔(15.43±3.49)s，P<0.05或P<0.01〕；咳嗽次數(shù)分別為(10.40± 2.07)、(12.88± 3.37)次/2 min，顯著低于生理鹽水對(duì)照組〔(20.32±6.48)次/2 min，P<0.01〕。WEPO 大、中劑量組氣管酚紅分泌量為(1.45±0.41)μg/ml、(1.15±0.34)μg/ml，明顯高于對(duì)照組〔(0.79±0.28)ug/ml，P<0.01〕，小劑量組為(0.96±0.31)μg/ml，與生理鹽水對(duì)照組比較無(wú)顯著差異無(wú)(P>0.05)。結(jié)論WEPO具有明顯鎮(zhèn)咳祛痰作用。

關(guān)鍵詞〔〕馬齒莧；水提取物；鎮(zhèn)咳；祛痰

中圖分類號(hào)〔〕R285.5〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

基金項(xiàng)目：承德市科技局資助項(xiàng)目(20122158)

通訊作者：佟繼銘(1951-)，女，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中藥藥理與毒理學(xué)研究。

1承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所 河北省主要研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

第一作者：王國(guó)玉(1980-)，女，碩士，主要從事呼吸病學(xué)研究。

馬齒莧(Portulaca oleracea L.) 又名馬齒菜、 螞蟻菜、 長(zhǎng)壽菜、 五行草等， 屬馬齒莧科一年生肉質(zhì)草本植物，在許多國(guó)家作為藥食兩用植物使用，其性寒味酸，歸肝、大腸經(jīng)，有清熱解毒，涼血止血，止痢的功效〔1〕，用于熱毒血痢、癰腫疔瘡、濕疹、丹毒、蛇蟲(chóng)咬傷、便血、痔血和崩漏下血 。馬齒莧資源豐富， 各地均有分布，馬齒莧不僅藥用廣泛而且歷來(lái)是人們的食用植物之一。它耐干旱、耐強(qiáng)光、抗病蟲(chóng)害、易繁殖、生命力強(qiáng)、生長(zhǎng)迅速〔2]，據(jù)《本草綱目》記載,馬齒莧臨床可用于“散血消腫，利腸滑胎，解毒通淋，治產(chǎn)后虛汗”?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其具有抗菌抗病毒〔3〕，興奮子宮平滑肌松弛骨骼肌，降血糖，降血脂，抗動(dòng)脈粥樣硬化〔4，5〕，抗氧化抗衰老，提高機(jī)體免疫力〔6〕以及促進(jìn)傷口愈合〔7〕等多種作用。但國(guó)內(nèi)對(duì)其鎮(zhèn)咳作用的研究報(bào)道較少，本實(shí)驗(yàn)采用傳統(tǒng)方法對(duì)其鎮(zhèn)咳作用進(jìn)行觀察，為馬齒莧藥食作用的進(jìn)一步研究開(kāi)闊思路。

1材料與方法

1.1 藥品、試劑及儀器馬齒莧，采自河北省承德市。經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院藥用植物研究室趙春穎副研究員鑒定為馬齒莧科植物Portulaca oleracea L.的干燥地上部分。藥材標(biāo)本保存于承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所藥理毒理研究室。氨水(28%)，北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào)：20101180；咳必清，上海全宇生物科技鄉(xiāng)內(nèi)制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：100401。JSC-OK型雙頭式多功能超聲霧化噴霧器，遼寧鞍山市電子醫(yī)療儀廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠，體重22～24 g，雌雄各半，由天津山川紅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供，合格證號(hào)：SCXK(津)2009-0001。

1.3 馬齒莧水提取物(WEPO)的制備〔8〕取50 g干燥馬齒莧干燥地上部分，加入8倍量的蒸餾水浸泡3 h，煎煮30 min，過(guò)濾。濾渣加適量蒸餾水再煎煮30 min，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至200 ml，得馬齒莧水提取液(含生藥0.25 g/ml)，臨用時(shí)用蒸餾水稀釋為0.25、0.125、0.063 g/ml液備用。

1.4 鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)〔9]昆明種小鼠，禁食12 h，自由飲水。置于500 ml玻璃鐘罩內(nèi)，用超聲波霧化器噴霧28% 的氨水5 s，立即取出小鼠。記錄2 min內(nèi)咳嗽次數(shù)。選取2 min內(nèi)咳嗽次數(shù)大于10次為合格，3 d后將合格小鼠50只，隨機(jī)分為大、中、小(WEPO 5.0、2.5及1.25 g/kg)劑量組(以生藥計(jì))、咳必清20 mg/kg陽(yáng)性對(duì)照組及生理鹽水對(duì)照組，每組10只，雌雄各半，灌胃給藥，給藥容積為20 ml/kg。連續(xù)給藥3 d，1次/d，末次給藥45 min后，按用藥前同樣方法噴霧氨水，記錄引咳潛伏期和2 min內(nèi)咳嗽次數(shù)，并計(jì)算抑制率。

1.5 祛痰實(shí)驗(yàn)

1.5.1 酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取酚紅1.0 mg，置于10 ml棕色容量瓶?jī)?nèi)，加2.24 mmol/L NaHCO3溶液至刻度，充分混勻，酚紅濃度為100 μg/ml。再用2.24 mmol/L NaHCO3溶液依次稀釋成酚紅含量為10.0、5.0、2.5、1.0、0.5、0.3、0.1 μg/ml溶液。用721分光光度計(jì)于546 nm處測(cè)定吸光度(A)。以酚紅濃度為X軸，A值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5.2 祛痰實(shí)驗(yàn)昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為大、中、小WEPO(5.0、2.5和1.25 g/kg)劑量組(以生藥計(jì))、氯化銨15 mg/kg 陽(yáng)性對(duì)照組及生理鹽水對(duì)照組，連續(xù)灌胃3 d，末次給藥后45 min，腹腔注射0.5% 酚紅20 ml/kg，30 min處死動(dòng)物，分離氣管，在環(huán)狀軟骨下第3～4節(jié)處剪一小口，向心方向插入無(wú)尖7號(hào)針頭插入氣管1 mm，用棉線結(jié)扎固定于氣管，用1 ml注射器吸取2.24 mmol/L NaHCO3溶液0.2 ml，緩慢注入氣管內(nèi)，然后輕輕吸出，反復(fù)3次。同樣方法重復(fù)3次，合并沖洗液，1 500 r/min離心，紫外分光光度計(jì)于546 nm處，以5%NaHCO3溶液為空白對(duì)照，測(cè)定吸光度(A)。通過(guò)酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算氣管沖洗液中酚紅含量〔10〕。

2結(jié)果

2.1 鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)大、中劑量WEPO組小鼠咳嗽次數(shù)顯著低于生理鹽水對(duì)照組，與生理鹽水對(duì)照組比較差異顯著(P<0.05,P<0.01)，小劑量WEPO 組小鼠咳嗽次數(shù)低于生理鹽水對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，各劑量WEPO組引咳潛伏期均明顯長(zhǎng)于生理鹽水對(duì)照組(P<0.05,P<0.01)。見(jiàn)表 1。

2.2 祛痰實(shí)驗(yàn)大、中WEPO劑量組小鼠氣管液中酚紅分泌量顯著高于生理鹽水對(duì)照組〔(1.45±0.41)、(1.15±0.34)μg/ml vs (0.79±0.28)μg/ml，P<0.01〕，小劑量WEPO組酚紅排泌量高于生理鹽水對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔(0.96±0.31)μg/ml，P>0.05〕。

表1 　WEPO 對(duì)氨水誘發(fā)小鼠咳嗽

與生理鹽水對(duì)照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01

3討論

咳嗽是由于呼吸道上的感受器受到炎癥、異物、分泌物等刺激，由傳入神經(jīng)傳入延髓或延髓臨近的呼吸中樞的部位，中樞做出指令，傳出神經(jīng)作用于氣管平滑肌、膈、呼吸肌等，產(chǎn)生咳嗽動(dòng)作。咳嗽是一種保護(hù)性反射動(dòng)作，但長(zhǎng)期、劇烈咳嗽可引起多種并發(fā)癥。

臨床常用的鎮(zhèn)咳藥根據(jù)其作用機(jī)制可分為中樞性鎮(zhèn)咳藥和外周性鎮(zhèn)咳藥兩大類，其中中樞性鎮(zhèn)咳藥，主要通過(guò)抑制延髓咳嗽中樞，同時(shí)抑制支氣管腺體分泌，鎮(zhèn)咳作用較強(qiáng)而且迅速。外周性鎮(zhèn)咳藥，通過(guò)抑制咳嗽反射弧中的某個(gè)環(huán)節(jié)，如感受器、傳入神經(jīng)或傳出神經(jīng)等而發(fā)揮鎮(zhèn)咳作用。

目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療咳嗽，所應(yīng)用鎮(zhèn)咳藥多通過(guò)抑制咳嗽反射弧中的某個(gè)環(huán)節(jié)，西藥近期療效顯著，迅速緩解癥狀，多需與病因治療聯(lián)合應(yīng)用。中醫(yī)藥治療咳嗽，兼鎮(zhèn)咳、平喘、抗菌、抗病毒等多方面作用，標(biāo)本兼治，遠(yuǎn)期療效可靠。

本研究采用霧化氨水引咳法評(píng)價(jià)其鎮(zhèn)咳效果，其引咳機(jī)制是由于氨水刺激呼吸道上皮下能感受化學(xué)刺激的感受器誘導(dǎo)咳嗽反射。以咳嗽次數(shù)為指標(biāo)，篩選藥物的鎮(zhèn)咳作用，具有鎮(zhèn)咳作用的藥物可明顯減少動(dòng)物的咳嗽次數(shù)。中樞和外周性鎮(zhèn)咳藥，對(duì)該咳嗽模型的咳嗽反射均有抑制作用。本研究結(jié)果顯示，WEPO對(duì)氨水誘發(fā)的咳嗽有顯著的抑制作用，減少咳嗽次數(shù)，提示其具有鎮(zhèn)咳作用。

痰、咳、喘是呼吸系統(tǒng)疾病常見(jiàn)3種癥狀，痰刺激呼吸道，誘發(fā)咳嗽，久咳引起喘息。大多數(shù)祛痰藥物通過(guò)增加呼吸道分泌液，覆蓋于黏膜，保護(hù)黏膜免受有害刺激引起的咳嗽。分泌液增加亦可稀釋痰液，促進(jìn)痰排出，減輕其對(duì)呼吸道的刺激，緩解咳嗽。本研究結(jié)果顯示，WEPO可促進(jìn)酚紅排泌量，提示W(wǎng)EPO有祛痰作用。

傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為馬齒莧具有清熱解毒，利水消腫等作用?，F(xiàn)代植物化學(xué)和藥理學(xué)研究證明馬齒莧含多種化學(xué)成分，如生物堿、黃酮苷、蒽醌苷等，它不但可以藥用，還是難得的食用保健食品〔11，12〕。綜上所述，WEPO具有較好的祛痰和鎮(zhèn)咳作用，有效成分及機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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〔2013-11-07修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢(mèng)園)