李瑩，周曉晶，林楠，王尉，樂勝峰，杜寧，張經(jīng)華，閆紅

(1.北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院，北京 100124； 2.北京市理化分析測試中心，北京 100089)

氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制*

李瑩1，周曉晶2，林楠2，王尉2，樂勝峰2，杜寧2，張經(jīng)華2，閆紅1

(1.北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院，北京 100124； 2.北京市理化分析測試中心，北京 100089)

采用半制備液相色譜法制備了氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。以UV，IR，MS和NMR方法對氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定性分析，高效液相色譜方法進(jìn)行了均勻性檢驗和穩(wěn)定性檢驗，經(jīng)F檢驗表明，在置信區(qū)間為95%的范圍內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定性良好。利用國內(nèi)8家資質(zhì)合格的實驗室進(jìn)行聯(lián)合定值，計算出不確定度。氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值結(jié)果為99.92%，在置信區(qū)間為95%的擴展不確定度為0.06%(k=2)。該氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用于有關(guān)農(nóng)藥殘留檢測方法的校正。

氯吡苯脲；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；均勻性；穩(wěn)定性；不確定度

氯吡苯脲［Forchlorfenuron，化學(xué)名稱為1-(2-氯-4-吡啶)-3-苯基脲］是人工合成的具有細(xì)胞分裂素活性的苯脲類植物生長調(diào)節(jié)劑，具有促進(jìn)細(xì)胞分裂，擴大細(xì)胞體積，促進(jìn)果實膨大，誘導(dǎo)單性結(jié)果，產(chǎn)生無籽水果的作用［1-4］。近年來，氯吡苯脲作為高效植物生長調(diào)節(jié)劑被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)種植中。氯吡苯脲純品為固體，無色結(jié)晶，易溶于甲醇、乙腈等有機溶劑，性質(zhì)不穩(wěn)定，易高溫分解。由于殘留的氯吡苯脲會給人體健康帶來潛在危害［5］，各國對其最高殘留量作出了嚴(yán)格限定，其中美國限量值為0.01 mg／kg，歐盟限量值為0.05 mg／kg，日本肯定列表限量值為0.1 mg／kg，而中國規(guī)定氯吡脲在獼猴桃和葡萄上的限量值為0.05 mg／kg，在黃瓜和西瓜上的限量值為0.1 mg／kg［6］，因此檢測氯吡苯脲的殘留量具有重要的意義。為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，需要氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。目前國內(nèi)外均無氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，為此筆者研制了氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可滿足相關(guān)分析檢測、質(zhì)量控制工作的需求，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、可比性和溯源性。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

半制備高效液相色譜系統(tǒng)：LC-6AD型，日本島津公司；

高效液相色譜儀系統(tǒng)：LC-20A型，日本島津公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：RE-2000型，上海亞榮生化儀器廠；

冷凍干燥機：ALPHR1-2 LD plus型，德國CHRIST公司；

紫外可見分光光度計：UV-1800型，日本島津公司；

傅立葉變換紅外-近紅外光譜儀：Perkin Elmer Spectrum400型，美國珀金埃爾默公司；

核磁共振譜儀：Bruker 400MHz型，德國Bruker公司；

超高分辨飛行時間質(zhì)譜儀：UHR-TOFmaXis 4G型，德國BRUKER公司；

氯吡苯脲粗提品：北京百靈威科技有限公司；

甲醇：色譜純，美國Fisher Scientific公司；

超純水：由默克密理博Milli-Q Integral 3純水機制備。

1.2 半制備液相色譜條件

色譜柱：SHIMADZU PREP-ODS(H)·KIT(250 mm×20 mm，5 μm)；流動相：A為水，B為甲醇，0～10 min，20%A；流速：10 mL／min；柱溫：30℃；運行時間：10 min；檢測波長：263 nm。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品制備

將氯吡苯脲粗提品適量溶解于超純水溶劑中，充分溶解后經(jīng)半制備液相色譜系統(tǒng)分離純化，收集目標(biāo)峰餾分，進(jìn)行旋蒸后冷凍干燥，最終獲得純度大于99%的高純度化合物。經(jīng)定性分析后，分裝在干凈、干燥的2 mL棕色樣品瓶中，于4℃冷藏。

1.4 定性分析方法

經(jīng)紫外光譜、紅外光譜、質(zhì)譜和核磁共振波譜分析，對氯吡苯脲進(jìn)行定性。

紫外光譜測定采用紫外-可見分光光度計，以甲醇為背景溶劑，在0～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，得到紫外光譜圖。

紅外光譜測定采用傅立葉變換紅外-近紅外光譜儀，采用KBr壓片法得到紅外光譜圖。

質(zhì)譜測定采用超高分辨飛行時間質(zhì)譜，正、負(fù)離子模式下測定，掃描范圍(m／z)：100～1 000。

核磁共振波譜測定采用400 MHz核磁共振譜儀，氘代試劑為DMSO-d6(含TMS)，25℃條件下得到氫譜和碳譜。

1.5 色譜條件

色譜柱：Waters XTerra RP18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(體積比為60∶40)，等度洗脫；流速：1 mL／min；柱溫：30℃；運行時間：20 min；檢測器：SPD-M20A二極管陣列檢測器；檢測波長：263 nm。

1.6 定值分析方法

通過8家實驗室協(xié)作為本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值，八家定值單位均采用高效液相色譜法在1.5色譜條件下測定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值方法建立

2.1.1 檢測波長的確定

采用高效液相色譜配備檢測器為SPD-M20A二極管陣列檢測器，進(jìn)行全波長掃描后生成三維光譜圖，確定了氯吡苯脲的最大吸收波長為263 nm，因此選擇氯吡苯脲的檢測波長為263 nm。

2.1.2 色譜柱選擇

色譜柱選用Waters XTerra RP18(150 mm×4.6 mm，5 μm)和 Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)兩根色譜柱比較，兩種長度色譜柱對氯吡苯脲的保留效果均較好，柱長方面150 mm和250 mm色譜柱分離效果也均較好，考慮到150 mm色譜柱節(jié)省溶劑和時間，故選擇規(guī)格150 mm的Waters XTerra RP18色譜柱作為定量分析色譜柱。

2.1.3 流動相選擇

本研究選用甲醇-水、乙腈-水兩組流動相進(jìn)行比較，實驗結(jié)果表明，兩組流動相對氯吡苯脲的分離效果均較好，由于乙腈溶劑毒性大且成本高，最終選擇甲醇-水(體積比為60∶40)作為定值實驗流動相。

2.1.4 梯度選擇

經(jīng)試驗結(jié)果比對，等度洗脫重現(xiàn)性好，分析時間短，滿足標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值需要，最終選擇等度洗脫。

2.1.5 檢測器比較

對島津蒸發(fā)光散射檢測器ELSD-LTⅡ和島津二極管陣列檢測器(DAD)進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，二極管陣列檢測器信號響應(yīng)較好，且為實驗室常用檢測器，最終確定檢測器為二極管陣列檢測器。

2.2 定性分析

采用UV，IR，MS，NMR分析方法對氯吡苯脲進(jìn)行了定性，數(shù)據(jù)結(jié)果如下。

綜合波譜數(shù)據(jù)及與文獻(xiàn)對比［7-8］，確定本樣品為氯吡苯脲。

2.3 均勻性檢驗

根據(jù)《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學(xué)原理的要求》(JJG1343-2012)［9］，對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均勻性檢驗。采用的是隨機順序重復(fù)測量的方法，從分裝后200瓶樣品中隨機抽取20瓶樣品。抽取的樣品瓶號按照正序、倒序、亂序的方式測量3次，結(jié)果見表1、表2，總平均值為99.89%。

表1 氯吡苯脲均勻性檢驗的測量數(shù)據(jù)分析(n=3) %

表2 氯吡苯脲均勻性研究的方差分析結(jié)果

F=MS瓶間／MS瓶內(nèi)=1.765，查F臨界值表得F0.05(19，40)=2.03，F(xiàn)＜F0.05(19，40)，所以本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是均勻的。

瓶間方差：

瓶間標(biāo)準(zhǔn)偏差：Sbb=SA=0.002 35。

2.4 穩(wěn)定性考察

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性考察按先密后疏的原則進(jìn)行穩(wěn)定性檢測。本研究以半年為期，對制備的氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在不同時間段條件下進(jìn)行穩(wěn)定性試驗，結(jié)果見表3。

表3 氯吡苯脲穩(wěn)定性檢驗結(jié)果

通過對表3數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用直線作為經(jīng)驗?zāi)Ｐ?，觀察斜率值是否有顯著變化，以此對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性變化進(jìn)行預(yù)測。斜率β1按下式計算：

自由度為n-2和P=95%置信水平的分布t因子等于2.441，由于，故斜率是不顯著的，因而未觀測到該樣品的不穩(wěn)定性，證明氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在半年內(nèi)穩(wěn)定。6個月的長期穩(wěn)定性引入的不確定度：us=s(β1)T=0.001767×6=0.010 6。

2.5 定值結(jié)果

本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值按照J(rèn)JG 1343-2012 標(biāo)準(zhǔn)要求，通過多家實驗室協(xié)作實驗定值，參加定值的實驗室的數(shù)目為8個。每個參加定值實驗室測定2個單元，每個單元測量3次，提供6次獨立重復(fù)測量數(shù)據(jù)。所有實驗室選擇方法是經(jīng)過多次試驗總結(jié)的方法，并且各個實驗室實驗方法一致。定值結(jié)果見表4、表5，總平均值x=99.92%。

表4 氯吡苯脲HPLC純度定值結(jié)果 %

表5 氯吡苯脲純度定值研究的方差分析結(jié)果

定值引入的不確定度：

式中：——m次測量瓶間方差,；

m——參加定值實驗室數(shù)目，m=8；

n——定值實驗室測量次數(shù)，n=6；

——瓶內(nèi)方差，。

2.6 不確定度評定

不確定度由3部分組成：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不均勻性引入的不確定度；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不穩(wěn)定性引入的不確定度；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值過程引入的不確定度。

均勻性引入的不確定度：ubb=sbb=0.002 35%。

穩(wěn)定性引入的不確定度：us=0.010 6%。

液相色譜定值結(jié)果不確定度：urel=u(x)=0.029 4%。

氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度：

氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)擴展不確定度：

2.7 定值結(jié)果表達(dá)

氯吡苯脲純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值結(jié)果：

3 結(jié)論

采用四大波譜法對氯吡苯脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行了定性分析；采用液相色譜法進(jìn)行均勻性檢驗、穩(wěn)定性考察，考察結(jié)果根據(jù)統(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行判定，符合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性與穩(wěn)定性的要求；對其不確定度進(jìn)行了評定，確保了用戶在不同時間、使用不同包裝的該種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時，所使用的量值準(zhǔn)確可靠。該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可應(yīng)用于農(nóng)藥殘留分析檢測、質(zhì)量控制工作的需求，為其檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、可比性和溯源性提供技術(shù)支撐和量值溯源保證。

［1］ 雷紹榮，郭靈安，毛建霏，等.氯吡脲殘留檢測技術(shù)進(jìn)展及趨勢［J］.中國測試，2011，37(6): 53-56.

［2］ 黎路，王楠，黃曉晶，等.果蔬中植物生長調(diào)節(jié)劑氯吡脲的高效液相色譜測定方法［J］.現(xiàn)代儀器，2012，18(5): 15-17.

［3］ 吳三林，劉芳，陳秋如.氯吡苯脲處理對青花菜貯藏品質(zhì)的影響［J］.北方園藝·貯藏保鮮加工，2011(7): 145-147.

［4］ Sharma D，Mahesh D A. Behaviour of forchlorfenuron residues in grape，soil and water［J］. Chemosphere，2003，50: 589-594.

［5］ 林濤，陳興連，李彥剛，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定葡萄中氯吡脲的殘留［J］.食品與機械，2013，29(6): 93-98.

［6］ 趙莉，馬青，馬琳.蔬菜瓜果中氯吡脲殘留檢測方法研究［J］.分析科學(xué)學(xué)報，2013，29(4): 583-586.

［7］ Mezcua M，Malato O，Juan F Garc?a Reyes，et al. Accurate-mass databases for comprehensive screening of pesticide residues in food by fast liquid chromatography time-of-flight mass spectrometry［ J］. Analytical Chemistry，2009，81(3): 913-929.

［8］ 王亞樓，劉曉燕.植物生長調(diào)節(jié)劑調(diào)吡脲的合成［J］.化學(xué)研究與應(yīng)用，2002，14(6): 748-749.

［9］ JJF 1343-2012 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學(xué)原理［S］.

韓國擬修訂食品添加劑新標(biāo)準(zhǔn)

不久前，韓國發(fā)布公告，提議修改《食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范》。這是今年韓國繼發(fā)行《水產(chǎn)品加工中正確使用食品添加劑指南》及修訂《食品添加劑規(guī)格基準(zhǔn)》后，再一次針對食品添加劑提出的相關(guān)法規(guī)修訂。修訂內(nèi)容如下：一是修正葡萄糖氧化酶、纖維素酶、D-xylose、羅望子膠、支鏈淀粉酶五種食品添加劑的定義；二是修訂“氫氧化鎂”“氧化鈣”的規(guī)范；三是修訂固綠FCF、赤蘚紅、誘惑紅等16種食品顏色添加劑最大使用水平；四是修訂還原鐵和金箔兩種食品添加劑的使用標(biāo)準(zhǔn)。

食品添加劑作為食品中的天然或者化學(xué)合成物質(zhì)，在改善食品品質(zhì)、色香味、防腐等方面起著不可或缺的作用，但是過量或者是濫用食品添加劑會給人們的健康帶來威脅，因此各國政府越來越重視食品添加劑的管理和使用。

近年來，韓國不斷修改食品添加劑的相關(guān)規(guī)定，去年，韓國通報我國食品添加劑不合格共64次，占全部食品通報的50%。通報原因主要是食品添加劑的超量使用和違規(guī)使用。

在此，檢驗檢疫部門建議食品出口企業(yè)：要密切關(guān)注韓國對于食品添加劑的相關(guān)法規(guī)修訂，主動掌握我國和韓國食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)的區(qū)別，確保出口韓國的食品符合其最新的添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)。

（儀器信息網(wǎng)）

河北力推空氣監(jiān)測站第三方運營

記者從河北省環(huán)保廳獲悉，今年起，河北省力推各級空氣質(zhì)量自動監(jiān)測站采用委托第三方運行維護(hù)的模式，以保障全省空氣質(zhì)量自動監(jiān)測站在統(tǒng)一的管理體制、制度和技術(shù)規(guī)定框架內(nèi)運行，從制度上最大限度地擠掉環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)的“水分”。

根據(jù)《河北省環(huán)境空氣質(zhì)量自動監(jiān)測站運行維護(hù)管理暫行規(guī)定》，全省國控站、省質(zhì)控站和定州市、辛集市空氣質(zhì)量自動監(jiān)測站的運維經(jīng)費，由省環(huán)境監(jiān)測中心站和省環(huán)境應(yīng)急與重污染天氣預(yù)警中心，依據(jù)管理權(quán)限提出申請，報省環(huán)保廳審核后向省財政進(jìn)行申請，列入省級財政預(yù)算?？h(市)空氣質(zhì)量自動監(jiān)測站的運維經(jīng)費由市環(huán)保局向當(dāng)?shù)卣暾?，列入財政預(yù)算，統(tǒng)籌解決。

河北省規(guī)定，第三方運維單位及其負(fù)責(zé)人對監(jiān)測數(shù)據(jù)的真實性、有效性負(fù)責(zé)。環(huán)保部門對運維單位的日常運行維護(hù)、質(zhì)量管理行為進(jìn)行監(jiān)督，每年對其進(jìn)行考評，并將考評結(jié)果作為合同續(xù)約、費用支付等事項的依據(jù)。

（儀器信息網(wǎng)）

Development of Forchlorfenuron Certified Reference Material

Li Ying1，Zhou Xiaojing2，Lin Nan2，Wang Wei2，Le Shengfeng2，Du Ning2，Zhang Jinghua2，Yan Hong1
(1. College of Life Science and Bio-Engineering，Beijing University of Technology，Beijing 100124，China；2. Beijing Center for Physical and Chemical Analysis，Beijing 100089，China)

Forchlorfenuron certified reference material(CRM) was separated by semi-preparation HPLC. The qualitative analysis of forchlorfenuron was identified by UV，IR，MS and NMR spectrum. The inspection of uniformity and stability were carried out by HPLC. Their results examined byF-test statistical method were stable in the confidence interval of 95%. The combined measurement was executed with 8 qualified laboratory rooms and the uncertainty value was counted at the same time. The purity of forchlorfenuron certified reference material was 99.92% with the expanded uncertainty of 0.06%(k=2) in the confidence interval of 95%. The forchlorfenuron certified reference material can be used for the pesticide residue detection methods of calibration.

forchlorfenuron; certified reference material; uniformity; stability; uncertainty

O657

：A

：1008-6145(2015)03-0001-04

10.3969／j.issn.1008-6145.2015.03.001

*北京市財政專項（PXM 2015_178305_000003）

聯(lián)系人：李瑩；E-mail: yingli816@sina.com

2015-01-26