乳巖內(nèi)消霜的急性毒性研究

陳瑞雪馬民廖銳別鳳杰顏顯欣呂燕紅黃茂杰徐騫李狄非

(暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣東廣州510632)

摘要〔〕目的觀察乳巖內(nèi)消霜外用給藥對(duì)SD大鼠是否有急性毒性作用。方法健康成年雌性SD大鼠分為4組，采用乳巖內(nèi)消霜基質(zhì)和大、中、小劑量乳巖內(nèi)消霜作用于健康成年雌性SD大鼠背部皮膚，觀察其對(duì)SD大鼠的生理活動(dòng)、精神狀態(tài)、皮膚、體重、血常規(guī)、血液生化學(xué)等指標(biāo)的影響。結(jié)果各組大鼠處理后，毛發(fā)、生理活動(dòng)、精神狀態(tài)等一般指標(biāo)正常；各組大鼠體重差異不顯著(P>0.05)；各組大鼠血液學(xué)一般檢查、血液生化學(xué)等指標(biāo)的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與基質(zhì)組比較，乳巖內(nèi)消霜組大鼠給藥區(qū)皮膚角質(zhì)層輕度變薄，無炎細(xì)胞浸潤(rùn)，毛囊結(jié)構(gòu)和真皮層未見病變。結(jié)論乳巖內(nèi)消霜對(duì)動(dòng)物無明顯急性毒性作用，是一種較安全的外用中藥制劑。

關(guān)鍵詞〔〕乳巖內(nèi)消霜；急性毒性

中圖分類號(hào)〔〕R-332〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81473688；No.81173265); 廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2012B031800155); 中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(No.21612422); 教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃(NCET-13-0827)； 廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2014J4100104)；暨南大學(xué)2013年度廣東省大學(xué)生創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(No.1055913147)；暨南大學(xué)2014年度國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.201410559075)

通訊作者：馬民(1973-)，男，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合研究。

第一作者：陳瑞雪(1988-)，女，在讀博士，主要從事中西醫(yī)結(jié)合研究。

乳巖內(nèi)消霜是一種中藥外用乳膏劑(國(guó)家發(fā)明專利申請(qǐng)?zhí)枺?01110029344.1)，組成藥物為大黃、延胡索、丁香、玫瑰花等9味中藥材，采用不同濃度乙醇水溶液加熱回流法提取各中藥材的活性成分，制成干浸膏，最后添加基質(zhì)而成。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)乳巖內(nèi)消霜對(duì)于治療乳腺癌前病變、阻斷乳腺癌的發(fā)生有較顯著的效果〔1，2〕。乳腺癌的發(fā)生是一系列病理過程的累積，因此在乳腺癌發(fā)生前阻斷病理過程尤為重要。乳巖內(nèi)消霜正是用于治療乳腺癌前病變的藥物，然而由于未作安全性研究，該制劑并未廣泛應(yīng)用于臨床。本實(shí)驗(yàn)研究乳巖內(nèi)消霜對(duì)動(dòng)物的急性毒性作用，為臨床安全應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠，雌性，200～250 g，廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2藥物與試劑

1.2.1藥物自制大、中、小劑量的乳巖內(nèi)消霜(含干浸膏量之比為4∶2∶1)，乳巖內(nèi)消霜基質(zhì)。

1.2.2試劑苦味酸(廣東臺(tái)山粵僑試劑塑料有限公司)、戊巴比妥鈉(美國(guó)Sigma)、氯化鈉注射液(青島首和金海制藥有限公司)、甲醛溶液(廣州化學(xué)試劑廠)，蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒(Beyotime，碧云天生物技術(shù)研究所)、中性樹膠(廣州市秀威貿(mào)易有限公司)。

1.3主要儀器電子天平(XS125A-SCS，Precisa Instruments Ltd./Switzerland)、低速冷凍離心機(jī)(KDC-2044，科大創(chuàng)新股份有限公司)、自動(dòng)正置生物顯微鏡(LEICA DM6000B)。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1分組及給藥方法健康成年雌性SD大鼠24只常規(guī)飼養(yǎng)7 d，大鼠生長(zhǎng)狀況正常。實(shí)驗(yàn)前24 h用脫毛膏將全部大鼠的脊臀部脫毛，約5 cm×8 cm。按體重編號(hào)，苦味酸標(biāo)記，完全隨機(jī)化分組。分為4組，每組6只，即乳巖內(nèi)消霜基質(zhì)組、乳巖內(nèi)消霜大、中、小劑量組(以下簡(jiǎn)稱霜?jiǎng)┗|(zhì)組、霜?jiǎng)┐髣┝拷M、霜?jiǎng)┲袆┝拷M和霜?jiǎng)┬┝拷M)。

實(shí)驗(yàn)前大鼠稱重，觀察脫毛區(qū)皮膚完整光滑無破損，將霜?jiǎng)┐?、中、小劑量、霜?jiǎng)┗|(zhì)各5 g(干浸膏量分別為2 600、1 300、650、0 mg/kg)均勻涂抹于各組大鼠脫毛區(qū)，分別相當(dāng)于人體用量(中劑量霜?jiǎng)? g·50 kg-1·d-1)的328.3、164.1、82.1、0倍，用油紙、紗布、膠布固定，每只動(dòng)物分籠飼養(yǎng)。

1.4.2觀察指標(biāo)藥物涂抹24 h后，剪去膠布、紗布等，用棉球擦去霜?jiǎng)┗蚧|(zhì)，生理鹽水洗凈。每天觀察大鼠皮膚、毛發(fā)、眼和黏膜、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸運(yùn)動(dòng)、四肢活動(dòng)等表現(xiàn)以及死亡情況；于去除藥物第2、4、7天記錄大鼠體重情況；第7天全部大鼠腹腔注射2%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液(40 mg/kg)，腹主動(dòng)脈取血，取2 ml血于EDTAK2真空抽血管，行血液學(xué)一般指標(biāo)檢測(cè)；其余約5 ml血于促凝采血管，3 000 r/min離心10 min，取上部血清約400 μl行血液生化學(xué)檢測(cè)，樣品于1 h內(nèi)送至暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)；取各組大鼠心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，肉眼觀察外觀；將給藥部位皮膚剪下，注意不能破壞皮膚，置于10%甲醛溶液，石蠟包埋，切片，HE染色，顯微鏡下觀察。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS13.0軟件進(jìn)行SNK檢驗(yàn)、Tamhane′s T2法檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1一般狀態(tài)觀察每日觀察大鼠情況，發(fā)現(xiàn)去除藥物后，霜?jiǎng)┐髣┝拷M和中劑量組大鼠的給藥部位皮膚有中、輕度紅斑，到第7天皮膚紅斑基本消失；各組大鼠毛發(fā)、精神、活動(dòng)、進(jìn)食、飲水等均未見異常，未見大鼠死亡情況。經(jīng)重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，各組大鼠體重隨時(shí)間增加而增加(F=38.677，P=0)；時(shí)間與處理交互效應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.711，P=0.695)；經(jīng)多樣本均數(shù)間兩兩比較的SNK檢驗(yàn)，各組大鼠體重差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.477)，見表1。

表1　藥物處理前后大鼠體重

2.2血液學(xué)檢測(cè)經(jīng)完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的方差分析，各組大鼠血液學(xué)一般檢查資料：白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)(F=0.517，P=0.678)、紅細(xì)胞(RBC)(F=3.11，P=0.067)、血小板(PLT)(F=0.414，P=0.746)、血紅蛋白(HGB)(F=2.742，P=0.089)。因此，不能認(rèn)為4組資料以上各血液學(xué)指標(biāo)的均數(shù)不同，見表2。

表2　各組大鼠血液學(xué)指標(biāo)情況

2.3血液生化學(xué)指標(biāo)經(jīng)完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的方差分析，各組大鼠血液生化學(xué)資料：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)(F=0.353，P=0.788)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)(F=2.798，P=0.085)、血尿素氮(BUN)(F=1.404，P=0.289)、血肌酐(CREA)(F=0.152，P=0.926)。因此，不能認(rèn)為4組大鼠的以上血液生化學(xué)指標(biāo)的均數(shù)不同，見表3。

表3　各組大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)情況 ± s， n=6)

2.4主要臟器改變?nèi)庋塾^察各組大鼠的心、肝、脾、肺、腎等主要臟器顏色、形態(tài)均無異常，肉眼未見病理改變。

2.5皮膚變化比較乳巖內(nèi)消霜組與基質(zhì)組比較，大鼠給藥部位皮膚表皮完整，角質(zhì)層輕度變薄，未見炎細(xì)胞浸潤(rùn)等其他病變，毛囊、真皮等未見病變，見圖1。

圖1　SD大鼠給藥部位皮膚病理片(HE，×200)

3討論

乳巖內(nèi)消霜外用24 h后，對(duì)SD大鼠的毛發(fā)、生理、精神活動(dòng)等未造成明顯影響；大、中劑量乳巖內(nèi)消霜24 h涂藥對(duì)大鼠皮膚有刺激性，但去除藥物后1 w內(nèi)皮膚恢復(fù)；乳巖內(nèi)消霜外用對(duì)動(dòng)物的體重增長(zhǎng)未造成明顯影響，對(duì)大鼠血液一般指標(biāo)，以及肝臟功能、腎臟功能無明顯急性毒性作用；各組大鼠的心、肝、脾、肺、腎等主要臟器未見異常；乳巖內(nèi)消霜組大鼠的皮膚角質(zhì)層輕度變薄，無其他病理改變。因此，乳巖內(nèi)消霜對(duì)動(dòng)物無明顯急性毒性作用，是一種較為安全的中藥外用制劑。

4參考文獻(xiàn)

1Zhang GJ，Li DH，Liao R，etal.The study of interference with Ruyanneixiao cream on hemorheology and mammary microcirculation of mammary precancer rats〔A〕.Advanced Materials Research，Advances in Chemistry ResearchⅡ，PTS1～3〔C〕.2nd International Conference on Chemical Engineering and Advanced Materials，2012；(554-556):1789-93.

2Li DH，Zhang GJ，Ma Y，etal.The modulation of Ruyanneixiao cream on AP-2 gamma and HER 2 in rat breast tissues with mammary precancerous lesions〔J〕.J Invest Med，2013;61(4):S23-4.

〔2014-12-23修回〕

(編輯李相軍)