羅金燕，楊春蘭，陳 磊，王 麗，毛勝鳳，李 斌

（1.上海市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心,上海201103；2.浙江大學(xué) 農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，浙江 杭州310058；3.浙江農(nóng)林大學(xué) 林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院 亞熱帶森林培育國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，浙江 臨安 311300）

桑細(xì)菌性萎蔫病及其病原的紅外光譜鑒別

羅金燕1，楊春蘭2，陳 磊1，王 麗2，毛勝鳳3，李 斌2

（1.上海市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心,上海201103；2.浙江大學(xué) 農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，浙江 杭州310058；3.浙江農(nóng)林大學(xué) 林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院 亞熱帶森林培育國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，浙江 臨安 311300）

為快速有效鑒別桑細(xì)菌性萎蔫病，比較了桑細(xì)菌性萎蔫病菌Enterobacter mori和引起相似田間發(fā)病癥狀的桑青枯病菌Ralstonia solanacearum的紅外光譜。結(jié)果顯示：在4 000.00～500.00 cm-1范圍內(nèi)，2種重要桑細(xì)菌病原存在5個(gè)共有峰，其中3個(gè)強(qiáng)度有顯著性差異。此外，桑萎蔫病菌的紅外光譜有1 399.10和1 079.45 cm-12個(gè)特征峰，桑青枯病菌的紅外光譜有2 973.49，1 724.42，1 380.60，1 278.67，1 185.12，1 132.03，1 100.51和979.31 cm-1等8個(gè)特征峰。進(jìn)一步分析和比較感染桑萎蔫病的桑枝和健康桑枝的紅外光譜發(fā)現(xiàn)，感病枝和健康枝有5個(gè)相同的峰，其中4個(gè)強(qiáng)度有顯著差異；此外，感病枝有1到643.92和1 407.31 cm-12個(gè)特征峰，健康枝中有1 635.83，1 506.36，1 423.59，1 374.97，1 328.57和1 108.82 cm-16個(gè)特征峰。為利用傅里葉紅外光譜技術(shù)簡(jiǎn)便、直觀和快速地鑒別桑細(xì)菌性萎蔫病及其病原提供了新的思路。圖2表3參19

植物保護(hù)學(xué)；桑樹;萎蔫病菌;青枯病菌;特征峰;傅里葉變換紅外光譜

桑樹Morus alba屬?？芃oraceae桑屬M(fèi)orus，為落葉喬木，其葉片更是桑蠶Bombyx mori的主食，極具生態(tài)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，廣泛分布于亞洲、非洲和歐洲［1-2］。然而，2004年以來，在浙江各地桑園陸續(xù)出現(xiàn)了一種國(guó)內(nèi)外尚未報(bào)道過的桑樹新病害，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，發(fā)病面積廣，給農(nóng)戶造成了重大的損失，嚴(yán)重威脅浙江省蠶桑產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)［2-3］。浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所植物病原細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室前期研究表明：該病害由腸桿菌屬Enterobacter細(xì)菌引起，并將它命名為Enterobacter mori，將該病害定名為桑細(xì)菌性萎蔫?。?-6］。值得注意的是其田間癥狀與由Ralstonia solanacearum引起的桑細(xì)菌性青枯病相似，兩者同屬于桑樹細(xì)菌性維管束病害，不易區(qū)分［7-10］。傳統(tǒng)的細(xì)菌分類及鑒別方法主要是根據(jù)細(xì)菌的菌落形態(tài)、生理生化特征及血清學(xué)檢測(cè)等，雖然有效,但操作復(fù)雜,費(fèi)時(shí)費(fèi)力。以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）為基礎(chǔ)的各種現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)雖然極大地加快了細(xì)菌鑒定的效率，但嚴(yán)重依賴昂貴的儀器和試劑，且經(jīng)常受到植物組織的干擾［11-12］。而傅里葉變換紅外光譜技術(shù)（FTIR）分辨率高,對(duì)樣品的需求量小，不僅能提供分子基團(tuán)特征的振動(dòng)吸收譜帶,而且能敏銳地探測(cè)分子基團(tuán)及其周圍環(huán)境的變化，通過測(cè)定完整細(xì)胞的FTIR圖譜可獲得微生物細(xì)胞的組成及其生物大分子結(jié)構(gòu)的信息［13-15］。近年來，F(xiàn)TIR圖譜中某些功能基因的差異已被用來區(qū)分和鑒定不同的微生物種甚至亞種［16-18］。本研究通過測(cè)定和比較桑萎蔫病菌和桑青枯病菌以及感染桑萎蔫病的枝條和健康枝條的紅外圖譜，并通過分離鑒定驗(yàn)證了紅外光譜的檢測(cè)結(jié)果，提出了利用FTIR直接檢測(cè)桑細(xì)菌性萎蔫病的可行性。

1 材料與方法

1.1 桑細(xì)菌菌株

本研究中使用的桑細(xì)菌性萎蔫病菌菌株Enterobacter mori R18-2和桑細(xì)菌性青枯病菌菌株Ralstonia solanacearum ZJUM19981由浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所植物細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室保存提供。

1.2 病原菌紅外檢測(cè)樣本制備

將保存在-70℃的桑細(xì)菌性萎蔫病菌菌株E.mori R18-2和桑細(xì)菌性青枯病菌菌株R.solanacearum ZJUM19981活化劃線于Luria-Bertani（LB）固體培養(yǎng)基和酵母膏胰蛋白胨葡萄糖瓊脂（YPGA）固體培養(yǎng)基，分別挑取單菌落接種于5.00 mL的LB液體培養(yǎng)基和YPGA液體培養(yǎng)基，在37℃和30℃條件下180 r· min-1培養(yǎng)24 h。在10 000 r·min-1條件下離心10 min，棄上清液，并用雙蒸水洗2次后低溫干燥，送樣。

1.3 桑枝條檢測(cè)樣本制備

離體桑枝注射接種方法參照徐麗慧等［9］。從桑園剪取長(zhǎng)15 cm左右并頂部帶有3張桑葉的無病枝條，插入已滅菌的50.00 mL雙蒸水的三角瓶中，并用消毒棉花塞住瓶口來固定枝條。將比例為1011cfu ·L-1的E.mori R18-2菌懸液用滅菌的小號(hào)針筒針刺接種在離體枝條的近水基部，注射0.01至0.03 mL·枝條-1，重復(fù)3次，使用無菌水和標(biāo)準(zhǔn)桑青枯病菌作為對(duì)照。在人工氣候箱中（設(shè)定溫度為28℃，光照12 h·d-1，濕度100%）培養(yǎng)15 d，接種3 d后每天觀察病狀。取發(fā)病的桑枝和健康的桑枝，在-70℃液氮冰凍干燥條件下，置于研缽中用研杵研磨成粒徑小于2 μm的粉末，送樣。

1.4 FTIR檢測(cè)

將桑細(xì)菌或桑枝條于-70℃冰凍干燥后，置于研缽中，用研杵研磨成粒徑小于2 μm的粉末。按照m（復(fù)合材）∶m（溴化鉀）=1∶100的比例混合磨碎壓片8 min（100 kg·cm-2，1 200×0.006 895 MPa），將它們壓成薄片，用于紅外光譜測(cè)定（紅外光譜儀為美國(guó)熱電公司 Nicolet 5700；測(cè)試條件：光譜分辨率為4.00 cm-1，測(cè)量范圍4 000.00～500.00 cm-1，掃描信號(hào)累加100動(dòng)平滑處理，自動(dòng)基線校正，掃描時(shí)實(shí)時(shí)扣除水和二氧化碳的干擾，設(shè)不放入樣品的空背景作為背景，測(cè)1個(gè)樣品掃描背景1次）。重復(fù)5次·樣品-1，取波譜的平均值，用OMNIC 8.0軟件分析光譜數(shù)據(jù)［18-19］。

1.5 桑萎蔫病菌的分離與鑒定

用于FTIR檢測(cè)的20份桑枝條樣品，同時(shí)利用經(jīng)典的植物病原細(xì)菌學(xué)研究方法開展桑萎蔫病菌的分離與鑒定，以驗(yàn)證FTIR的檢測(cè)結(jié)果。桑萎蔫病菌的具體分離根據(jù)朱勃等［3］的方法進(jìn)行，每份樣品挑取代表性菌株開展煙草Nicotiana tabacum過敏反應(yīng)、Biolog生理生化鑒定和16S rDNA序列分析等［3,11-12］。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

各處理間的顯著水平（P＜0.05）用統(tǒng)計(jì)分析軟件STATGRAPHICS Plus,版本 4.0（Copyright Manugistics Inc.,Rockville,Md.,USA）進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 FTIR鑒別桑萎蔫和青枯病菌

由圖1和表1可知：在4 000.00～500.00 cm-1的光譜范圍之內(nèi)，桑細(xì)菌性萎蔫病菌菌株R18-2和桑細(xì)菌性青枯病菌菌株ZJUM19981共有5個(gè)峰位相同，分別是1 237.25 cm-1（1 227.86 cm-1），1 453.67 cm-1，1 538.22 cm-1，1 650.74 cm-1和2 925.13 cm-1。其中1 237.25 cm-1（1 227.86 cm-1），1 453.67 cm-1和2 925.13 cm-1的峰強(qiáng)度差異顯著（P＜0.05）。吸收譜帶的歸屬如下：1 237.25 cm-1（1 227.86 cm-1）附近的吸收帶歸屬于核酸分子內(nèi)磷酸二酯基團(tuán)的反對(duì)稱P——O伸縮振動(dòng)峰；1 453.67 cm-1歸屬于蛋白質(zhì)分子中甲基的反對(duì)稱C—H彎曲振動(dòng)峰；1 538.22 cm-1來自N—H的彎曲振動(dòng)和C—N伸縮振動(dòng)，主要來自于蛋白質(zhì)酰胺Ⅱ；1 650.74 cm-1歸屬于C——O的伸縮振動(dòng)，主要來自于蛋白質(zhì)酰胺Ⅰ；2 925.13 cm-1來自蛋白質(zhì)的C—H伸縮振動(dòng)吸收帶［14-17］。

圖1 桑青枯病菌ZJUM19981（a）和桑萎蔫病菌R18-2（b）在4 000.00～500.00 cm-1波段范圍的紅外光譜圖Figure 1 FTIR spectra in 4 000.00-500.00 cm-1（a）Enterobacter mori R18-2 and（b）Ralstonia solanacearum ZJUM19981

桑細(xì)菌性萎蔫病菌菌株 R18-2有1 399.10 cm-1和1 079.45 cm-1這2個(gè)特有的峰位，分別屬于COO—的對(duì)稱伸縮振動(dòng)和來自于磷脂的C—O伸縮振動(dòng)。桑青枯病菌菌株ZJUM19981有2 973.49 cm-1，1 724.42 cm-1，1 380.60 cm-1，1 278.67 cm-1，1 185.12 cm-1，1 132.03 cm-1，1 100.51 cm-1和979.31 cm-1等8個(gè)特有的峰位。這些主要吸收譜帶的歸屬如下：2 973.49 cm-1的譜峰來自脂類的C—H伸縮振動(dòng)吸收帶，反映脂肪酸、各種膜和細(xì)胞壁組分的親水脂分子的信息；1 724.42 cm-1歸屬于C——O的伸縮振動(dòng)，主要來自于甘油三酯；1 380.60 cm-1歸屬于C—H的彎曲振動(dòng)，1 278.67 cm-1歸屬于C—O的伸縮振動(dòng)，主要來自于芳香族的甲氧基；1 185.12 cm-1處的吸收譜帶主要來自于細(xì)胞壁的主要成分碳水化合物中多聚糖中的C—O（H）伸縮振動(dòng)；1 132.03 cm-1歸屬于C—O伸縮振動(dòng)，主要來自于DNA和RNA骨架，糖原和核酸等；1 100.51 cm-1歸屬于C—O的伸縮振動(dòng)；979.31 cm-1歸屬于磷酸化蛋白和核酸中磷酸單酯二價(jià)陰離子-PO42-基團(tuán)的對(duì)稱伸縮振動(dòng)［14-15］。

表1 桑萎蔫病菌菌株R18-2與桑青枯病菌菌株ZJUM19981的紅外光譜主要吸收峰比較Table 1 Comparison of FTIR spectra between Enterobacter mori R18-2 and Ralstonia solanacearum ZJUM19981

2.2 FTIR鑒別健康和感病桑枝條

圖2 感染桑細(xì)菌性萎蔫病的桑枝（a）和健康桑枝（b）和在4 000.00～500.00 cm-1波段范圍的紅外光譜圖Figure 2 FTIR spectra in 4 000.00-500.00 cm-1（a）the healthy mulberry branches and （b）the mulberry branches infected with Enterobacter mori R18-2

由圖2和表2可知：在4 000.00～500.00 cm-1范圍內(nèi)，感染桑細(xì)菌性萎蔫病的桑枝和健康桑枝有5個(gè)相同峰位，分別是2 927.05 cm-1（2 928.84 cm-1），1 732.63 cm-1（1 735.81 cm-1），1 248.00 cm-1（1 246.82 cm-1），1 160.17 cm-1（1 159.15 cm-1）和1 053.70 cm-1（1 054.66 cm-1），除1 160.17 cm-1（1 159.15 cm-1）外，其他4個(gè)峰在強(qiáng)度上差異顯著。這表明：桑組織內(nèi)的木質(zhì)素、纖維素和半纖維素等已被桑萎蔫病菌選擇性的消耗。吸收譜帶歸屬如下：2 927.05 cm-1（2 928.84 cm-1）歸屬于C—H的伸縮振動(dòng)，主要來自于脂類，少量來自于蛋白、碳水化合物和核酸；1 732.63 cm-1（1 735.81 cm-1）主要來自于木聚糖（半纖維素）中的非共軛C—O伸縮振動(dòng)；1 248.00 cm-1（1 246.82 cm-1）主要來自于木質(zhì)素和木聚糖中的C—O伸縮振動(dòng)和紫丁香基環(huán)；1 160.17 cm-1（1 159.15 cm-1）主要來自于纖維素和半纖維素中的C—O—C振動(dòng)；1 053.70 cm-1（1 054.66 cm-1）主要來自于纖維素和半纖維素中的C—O振動(dòng)［14-16］。

桑健康枝中有1 635.83，1 506.36，1 423.59，1 374.97，1 328.57和1 108.82 cm-1等6個(gè)特征峰。由于桑是雙子葉硬木植物，其木質(zhì)素主要含愈創(chuàng)木基-紫丁香基木質(zhì)素（G-S），這個(gè)結(jié)果顯示健康桑枝的紅外吸收光譜圖與其他的木質(zhì)素光譜圖相似。在1 635.83 cm-1和1 506.36 cm-1處，有明顯的芳香核振動(dòng)峰，這是木質(zhì)素最具特征的紅外吸收帶。此外，1 423.59 cm-1主要來自于木質(zhì)素和糖類的C—H振動(dòng)；1 374.97 cm-1主要來自于纖維素和半纖維素中的C—H振動(dòng)；1 328.57 cm-1主要來自于纖維素中的C—H的彎曲振動(dòng)和紫丁香基丙烷衍生物中的C1—O的伸縮振動(dòng)；1 108.82 cm-1主要來自于紫丁香核C—H面內(nèi)彎曲振動(dòng)［14-17］。此外，被細(xì)菌性萎蔫病感染的病桑紅外光譜圖中具有 1 643.92 cm-1和1 407.31 cm-1這2處特征峰，分別屬于蛋白質(zhì)酰胺Ⅰ中的C—O伸縮振動(dòng)和COO—的對(duì)稱伸縮振動(dòng)。在光譜分辨率為4.00 cm-1條件下，1 407.31 cm-1與萎蔫病菌紅外圖譜中的1 399.10 cm-1屬于同一特征峰，可作為檢測(cè)桑細(xì)菌性萎蔫病的依據(jù)。相對(duì)于桑健康枝，感病枝中缺乏1 635.83，1 506.36，1 423.59，1 374.97，1 328.57和1 108.82 cm-1等6個(gè)特征峰。1 506.36 cm-1處木質(zhì)素特征峰的消失和1 643.92 cm-1處特征峰出現(xiàn)，顯示了相對(duì)于糖類而言，萎蔫病菌更偏好降解消耗木質(zhì)素，這也解釋了萎蔫病菌大量定殖于植物根莖維管束組織，堵塞導(dǎo)管，引起葉片和植株上層水分的缺乏，造成萎蔫癥狀的原因之一，與王國(guó)芬等［2］的桑萎蔫病標(biāo)記菌株R18-gfp-1實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。由于發(fā)病組織和健康組織的結(jié)構(gòu)組分存在一定程度上的差異，通過對(duì)比兩者的傅立葉紅外光譜圖的峰型、峰位、峰高等，為快速鑒別桑萎蔫病提供了更加簡(jiǎn)便、直觀、快速的技術(shù)手段。

表2 桑細(xì)菌性萎蔫病菌菌株R18-2接種發(fā)病桑枝和健康桑枝的紅外光譜主要吸收峰比較Table 2 Comparison of FTIR spectra between the mulberry branches infected with and without Enterobacter mori R18-2

2.3 FTIR檢測(cè)的分離驗(yàn)證

FTIR檢測(cè)為健康的10份桑枝條上分離到的細(xì)菌均無煙草過敏反應(yīng)，挑取代表性菌株進(jìn)行16S rDNA測(cè)定與分析，證實(shí)都不是桑萎蔫病菌。FTIR檢測(cè)為疑似桑桑萎蔫病菌感染的10份桑枝條，除1份樣品未分離到煙草過敏反應(yīng)陽(yáng)性的菌株外，其他9份樣品的代表性菌株煙草過敏反應(yīng)呈陽(yáng)性。經(jīng)過Biolog鑒定，與桑萎蔫病菌相似度為0.61～0.76；16S rDNA序列相似度為97%～98%，證實(shí)了這些樣品都有桑萎蔫病菌的感染。

3 結(jié)論與討論

桑細(xì)菌性萎蔫病作為近年來浙江乃至全國(guó)新出現(xiàn)的一種桑樹新病害，目前對(duì)其病害的流行規(guī)律，傳播途徑以及病原菌的致病機(jī)制都研究甚少，給中國(guó)的蠶桑產(chǎn)業(yè)帶了很大的潛在風(fēng)險(xiǎn)。特別值得重視的是，從浙江省臨安市、桐廬縣等地桑樹的田間發(fā)病情況以及我們的室內(nèi)離體桑枝注射接種實(shí)驗(yàn)來看，由桑萎蔫病菌引起的病桑外部表現(xiàn)與桑細(xì)菌性青枯病大致相似：老葉枯黃、新葉萎蔫，直至全株枯萎，植株長(zhǎng)勢(shì)衰弱；解剖發(fā)病植株根莖維管束，可觀察到植株莖干木質(zhì)部褐變［10］。相似的發(fā)病癥狀使得桑細(xì)菌性萎蔫病在田間常被誤診為桑細(xì)菌性青枯病，導(dǎo)致了錯(cuò)誤的防治對(duì)策。

表3 桑細(xì)菌性萎蔫病紅外光譜檢測(cè)的分離驗(yàn)證Table 3 Confirm of FTIR spectra detection based on the isolation and identification of Enterobacter mori

早期的診斷與檢測(cè)無疑是有效預(yù)防植物病害發(fā)生與危害的有效方法，然而，由于傳統(tǒng)的植物病原細(xì)菌的分離鑒定不僅需要有一定的經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)，也需要較長(zhǎng)的時(shí)間，特別是由于桑樹作為一種木本植物，病原細(xì)菌的分離和致病性檢測(cè)都不易進(jìn)行，周期更是比一般草本植物長(zhǎng)，使得難以快速、準(zhǔn)確地早期檢測(cè)診斷桑細(xì)菌性萎蔫病的發(fā)生。而紅外光譜技術(shù)能夠克服傳統(tǒng)植物病害診斷與檢測(cè)方法的各種弊端，加上具有操作簡(jiǎn)單，診斷時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)植物細(xì)菌病害的檢測(cè)與診斷將是一個(gè)極好的補(bǔ)充。

本研究顯示桑萎蔫病菌和桑青枯病菌這2種桑樹重要病原細(xì)菌有不同的紅外吸收光譜，5個(gè)共同峰中的3個(gè)在峰強(qiáng)度上有顯著差異，桑萎蔫病菌和桑青枯病菌分別有2個(gè)和8個(gè)特征峰，特別是桑萎蔫病菌具有1 399.10 cm-1和1 079.45 cm-1這2個(gè)特有的峰位，為利用FTIR快速鑒定引起桑樹相似病害的桑萎蔫病菌和桑青枯病菌提供了依據(jù)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)萎蔫病菌感染的桑枝條和健康枝條也有不同的紅外光譜圖譜，5個(gè)共同峰中的4個(gè)在峰強(qiáng)度上有顯著差異，特別是萎蔫病菌感染的桑病枝具有1 643.92 cm-1和1 407.31 cm-1這2個(gè)特征峰，為利用紅外光譜技術(shù)直接無損傷鑒別桑樹是否感染萎蔫病提供了可能。

FTIR檢測(cè)為健康的10份桑枝條上分離到的代表性菌株經(jīng)過鑒定，證實(shí)都不是桑萎蔫病菌，F(xiàn)TIR檢測(cè)為疑似桑萎蔫感染的10份桑枝條有9份的代表性菌株經(jīng)過煙草過敏反應(yīng)、Biolog鑒定和16S rDNA序列分析鑒定為桑萎蔫病菌，證實(shí)了這些樣品應(yīng)該都有桑萎蔫病菌的感染，其中1份紅外檢測(cè)為萎蔫病菌感染的樣品沒有分離到桑萎蔫病菌。這一方面可能是由于病菌剛開始感染，數(shù)量較少，加上是木本植物樣品，造成難以分離到；另一方面，由于本實(shí)驗(yàn)涉及到的主要是桑病原細(xì)菌，在實(shí)際操作過程中，還要考慮桑枝條上可能有和桑萎蔫病菌相似紅外成份的環(huán)境細(xì)菌的干擾，造成紅外檢測(cè)的假陽(yáng)性。

本研究利用紅外光譜技術(shù)比較了能引起桑樹相似病癥的桑萎蔫病菌和桑青枯病菌，以及萎蔫病菌感染的桑枝條和健康枝條的紅外光譜圖譜，發(fā)現(xiàn)它們?cè)诜逍?、峰的?shù)量、峰位及特定峰的吸收強(qiáng)度上都存在較大差別，同時(shí)通過分離鑒定的方法對(duì)紅外檢測(cè)的桑枝條進(jìn)行了驗(yàn)證，整體上發(fā)現(xiàn)利用這些傅里葉紅外光譜上的特征峰可以作為萎蔫病菌的生物標(biāo)記，用于快速鑒別桑細(xì)菌性萎蔫病。但桑樹上可能有相似紅外圖譜的環(huán)境微生物，需要增加更多樣品測(cè)試來選取更加特異的峰作為標(biāo)記，避免其他微生物的干擾。

4 致謝

感謝浙江大學(xué)植物保護(hù)系田文效先生在紅外光譜樣品準(zhǔn)備中的幫助。

［1］ 王國(guó)芬，謝關(guān)林，徐福壽，等.桑青枯病描述及研究中的幾個(gè)問題探討［J］.蠶業(yè)科學(xué),2007,33（2）：321-324.

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Detection and identification of mulberry bacterial wilt and its pathogen using Fourier transform infrared spectra

LUO Jinyan1,YANG Chunlan2,CHEN Lei1,WANG Li2,MAO Shengfeng3,LI Bin2
（1.Shanghai Extension and Service Center of Agriculture Technique,Shanghai 201103,China;2.Agricultural and Biotechnological College,Zhejiang University,Hangzhou 310058,Zhejiang,China;3.The Nurturing Station for the State Key Laboratory of Subtropical Silviculture,School of Forestry and Biotechnology,Zhejiang A&F University, Lin’an 311300,Zhejiang,China）

To rapidly identify a newly emerging mulberry wilt disease in Zhejiang Province,this study compared Fourier transform infrared （FTIR）spectra of Enterobacter mori and Ralstonia solanacearum,which cause similar disease symptoms on mulberry.First,FTIR spectra were taken on E.mori and R.solanacearum,and then a comparison of mulberry branches infected with and without E.mori was performed based on FTIR spectra.Results for E.mori and R.solanacearum in the 4 000.00-500.00 cm-1region showed 5 similar peaks with 3 of the similar peaks differing in intensity.Peaks at 1 399.10 and 1 079.45 were specific to E.mori; whereas,peaks at 2 973.49,1 724.42,1 380.60,1 278.67,1 185.12,1 132.03,1 100.51,and 979.31 cm-1were specific to R.solanacearum.The FTIR spectra for healthy and infected mulberry branches showed 5 similar peaks in the 4 000.00-500.00 cm-1region with 4 of the similar peaks differing in intensity.Peaks at 1 643.92 and 1 407.31 cm-1were specific to infected branches;whereas,peaks at 1 635.83,1 506.36, 1 423.59,1 374.97,1 328.57,and 1 108.82 cm-1were specific to healthy branches.This study indicated thatFourier transform infrared spectra could provide a simple,intuitive,and fast technology for rapid detection and identification of mulberry bacterial wilt.［Ch,2 fig.3 tab.19 ref.］

plant protection;mulberry;Enterobacter mori;Ralstonia solanacearum;specific weak;FTIR

S763.1；S888.71

A

2095-0756（2015）04-0578-07

10.11833/j.issn.2095-0756.2015.04.013

2014-10-16；

2014-12-01

上海市農(nóng)業(yè)基礎(chǔ)性研究項(xiàng)目［滬農(nóng)科基字（2014）第2-7號(hào)］；國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（31371904）；浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（R13C140001，LY14C140005）；浙江省公益性技術(shù)應(yīng)用研究計(jì)劃項(xiàng)目（2014C32010）作者簡(jiǎn)介：羅金燕，從事植物檢疫研究。E-mail：toyanzi@126.com。通信作者：李斌，副教授，博士，博士生導(dǎo)師，從事植物細(xì)菌學(xué)研究。E-mail：libin0571@zju.edu.cn