楊濤 李玲 牛麗彬 賈慧琴

HBsAg酶免篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者確證與追蹤分析

楊濤1李玲2牛麗彬1賈慧琴1

目的 通過對(duì)HBsAg酶免篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行確證和追蹤，為制定獻(xiàn)血者歸隊(duì)策略提供理論依據(jù)。方法 用NAT檢測(cè)、HBsAg酶免、抗-HBc酶免、中和試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)后，每隔3個(gè)月追蹤1次。結(jié)果 48 例HBsAg酶免篩查反應(yīng)性者，確證陰性19例（39.6%）。結(jié)論 制定和實(shí)施可行的血液酶免篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者確證指南和歸隊(duì)策略，可以最大限度地減少血源（獻(xiàn)血者）流失。

酶免篩查；反應(yīng)性；獻(xiàn)血者；確證

為保證血液安全，我國(guó)現(xiàn)行“血液篩查策略”是采用高敏感的兩次檢測(cè)篩查試驗(yàn)[1]，并且建立灰區(qū)緩沖帶等措施，因此不可避免地產(chǎn)生了假陽性問題。現(xiàn)行法規(guī)要求陽性的獻(xiàn)血者不能獻(xiàn)血，同時(shí)也永久屏蔽了初篩假陽性的獻(xiàn)血者，直接流失掉一部分健康血源，這不僅影響血液供應(yīng)，甚至?xí)斐蛇@些獻(xiàn)血者精神上的傷害[2]。為探討酶免篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者的歸隊(duì)策略，對(duì)48例HBsAg酶免反應(yīng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行了確證與追蹤，具體報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

按以下標(biāo)準(zhǔn)選擇研究對(duì)象：（1）既往HBsAg酶免篩查反應(yīng)性。（2）年齡≤50歲。（3）經(jīng)本站醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并告知獻(xiàn)血者相關(guān)權(quán)利和義務(wù)，獻(xiàn)血者同意參與課題研究并簽署知情同意書。（4）實(shí)驗(yàn)實(shí)施后參與統(tǒng)計(jì)分析的資料符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求。符合標(biāo)準(zhǔn)的研究對(duì)象48例。

1.2 標(biāo)本采集

采集靜脈血樣，EDTA-K 2真空采血管和EDTA-K 2真空分離膠采血管各2管用于確證實(shí)驗(yàn)。

1.3 確證方法

所有標(biāo)本進(jìn)行HBsAg酶免試驗(yàn)和NAT試驗(yàn)。（1）若HBsAg酶免與NAT均反應(yīng)性，加做中和試驗(yàn)，陽性者直接屏蔽；陰性者每隔3個(gè)月追蹤1次。（2）若HBsAg酶免反應(yīng)性、NAT非反應(yīng)，加做中和試驗(yàn)，陽性者直接屏蔽；陰性者每隔3個(gè)月追蹤1次。（3）若HBsAg酶免非反應(yīng)、NAT反應(yīng)性，加做抗-HBc酶免，陽性者直接屏蔽；陰性者每隔3個(gè)月追蹤1次。（4）若HBsAg酶免與NAT均非反應(yīng)，加做抗-HBc酶免，陽性者每隔3個(gè)月追蹤1次；陰性者3個(gè)月后追蹤1次，若HBsAg酶免、NAT、抗-HBc酶免均非反應(yīng)，則判定該獻(xiàn)血者確證結(jié)果陰性，否則繼續(xù)追蹤。

表1 HBsAg酶免篩查反應(yīng)性標(biāo)本確證結(jié)果

1.4 試劑與儀器

試劑選用HBsAg酶免為伯樂（批號(hào)：3H0170，效期：2014年11月29日）、抗-HBc酶免為萬泰（批號(hào)：K20140403，效期：2015年3月）、HBsAg中和為珠海麗珠（批號(hào)：2013120348，效期：2014年12月9日）。NAT試驗(yàn)為羅氏第二代試劑（批號(hào)：124229，效期：2014年6月）。儀器使用Roche全自動(dòng)核酸分離純化儀、Roche全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)、英國(guó)伯瑞全自動(dòng)免疫印跡檢測(cè)儀、TIANSHI自動(dòng)化酶免分析儀、LANSHI全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)使用SPSS19.0軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)、百分比（n，%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

HBsAg酶免篩查反應(yīng)性標(biāo)本確證結(jié)果顯示，首次獻(xiàn)血與獻(xiàn)血＞3次比較：χ2=10.441，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?；覅^(qū)與反應(yīng)性比較：χ2=1.536，P＞0.05，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。單試劑與雙試劑比較：χ2=33.443，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

3 討論

血站實(shí)施血液檢測(cè)主要有兩個(gè)目的，一是為了血液安全，二是為了獻(xiàn)血者服務(wù)和管理[3]。本著高度關(guān)愛的態(tài)度來教育、招募、服務(wù)、保留獻(xiàn)血者，使獻(xiàn)血者確信采供血機(jī)構(gòu)始終關(guān)注他們的健康、權(quán)利和利益。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，現(xiàn)有檢測(cè)方法假陽性率較高，相當(dāng)一部分獻(xiàn)血者被不適宜的屏蔽了，造成了獻(xiàn)血者不必要的流失，打擊了獻(xiàn)血者的獻(xiàn)血熱情且會(huì)造成一定的社會(huì)影響，在一定程度上制約了無償獻(xiàn)血的發(fā)展。由于ELISA實(shí)驗(yàn)引起假陽性因素比較多，如標(biāo)本采集、處理不當(dāng)，造成標(biāo)本污染、血清中存有纖維蛋白或溶血、脂血；實(shí)驗(yàn)過程中洗板不充分，標(biāo)本量過大、進(jìn)板優(yōu)化不合理導(dǎo)致加樣完成后的微板在室溫放置時(shí)間過長(zhǎng)；試劑的保存不當(dāng)；某些疾病或生理狀態(tài)均可導(dǎo)致假陽性[4]。并且將高靈敏度的ELISA檢測(cè)試劑應(yīng)用于低危健康獻(xiàn)血者人群經(jīng)血傳播疾病病原體標(biāo)志物的篩查，假陽性檢測(cè)結(jié)果難免發(fā)生。為避免假陽性出現(xiàn)，一是要做好血液采集前的征詢工作，避免因飲食不當(dāng)、某些疾病或生理狀態(tài)下獻(xiàn)血；二是要做好采集過程、標(biāo)本處理過程、實(shí)驗(yàn)過程的監(jiān)控，嚴(yán)格按照《血站質(zhì)量管理規(guī)范》、《血站實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范》、《血站技術(shù)操作規(guī)程》和血站質(zhì)量體系文件進(jìn)行操作，避免由于操作原因引起假陽性。三是嚴(yán)格按照規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)選擇質(zhì)量可靠的檢測(cè)試劑，及時(shí)采用方法學(xué)更先進(jìn)的檢測(cè)方法。

本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，首次獻(xiàn)血與獻(xiàn)血＞3次獻(xiàn)血者對(duì)HBsAg確證結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，固定獻(xiàn)血者相對(duì)較安全。雖然尚不能認(rèn)為初篩灰區(qū)與反應(yīng)性樣本結(jié)果差異對(duì)HBsAg確證結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但在酶免篩查灰區(qū)者中仍有一部分（40%）需要繼續(xù)追蹤，因此在血液酶免篩查中設(shè)置灰區(qū)能有效檢出反應(yīng)不確定性標(biāo)本，對(duì)于保證血液質(zhì)量安全是非常必要的。單試劑與雙試劑對(duì)HBsAg確證結(jié)果的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者中有相當(dāng)比例（48.6%）的確證結(jié)果為反應(yīng)不確定性仍需繼續(xù)追蹤，國(guó)內(nèi)已有學(xué)者提出酶免篩查單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者半年后2次酶免復(fù)查合格后歸隊(duì)獻(xiàn)血的策略[5]，但未做相關(guān)確證實(shí)驗(yàn)直接采用此策略存在一定風(fēng)險(xiǎn)。

對(duì)于國(guó)內(nèi)大多數(shù)采供血機(jī)構(gòu)而言，自行開展血液酶免篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者確證試驗(yàn)困難極大。一是確證實(shí)驗(yàn)室設(shè)置缺乏統(tǒng)一規(guī)劃，運(yùn)行經(jīng)費(fèi)難以保障。建議衛(wèi)生行政部門根據(jù)轄區(qū)實(shí)際需要，統(tǒng)一規(guī)劃設(shè)置確證實(shí)驗(yàn)室，可掛靠血液中心、CDC、科研機(jī)構(gòu)或高校等負(fù)責(zé)轄區(qū)內(nèi)確證工作；制定出臺(tái)確證實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范；同時(shí)將確證實(shí)驗(yàn)室建設(shè)和日常運(yùn)行必需的經(jīng)費(fèi)納入同級(jí)財(cái)政預(yù)算。二是尚未建立全國(guó)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的血液酶免篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者確證方案及建立可行的歸隊(duì)策略。目前，國(guó)內(nèi)僅有安徽、江蘇等地區(qū)頒布實(shí)施了有關(guān)獻(xiàn)血者歸隊(duì)的指導(dǎo)性文件。由于沒有明確的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)和管理法規(guī)文件，采供血機(jī)構(gòu)在開展獻(xiàn)血者確證與歸隊(duì)工作時(shí)，難免出現(xiàn)不規(guī)范、不標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)象；一旦出現(xiàn)糾紛，將面臨沒有相應(yīng)法律法規(guī)支持的危險(xiǎn)局面。本次實(shí)驗(yàn)48例HBsAg酶免篩查反應(yīng)性者，確證陰性19例（39.6%），說明規(guī)范的確證與追蹤不僅可以使那些HBsAg酶免篩查假陽性的獻(xiàn)血者及時(shí)歸隊(duì)獻(xiàn)血，而且還能夠最大程度降低因假陽性對(duì)獻(xiàn)血者造成的精神傷害。本次實(shí)驗(yàn)樣本量較小，可能不能全面反映客觀結(jié)果，還需進(jìn)一步增大研究樣本量。同時(shí)，追蹤間隔期也有待進(jìn)一步研究。另外，獻(xiàn)血者追蹤過程中的流失也對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成一定影響。

綜上所述，制定和實(shí)施可行的血液酶免篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者確證指南和歸隊(duì)策略勢(shì)在必行，有利于采供血機(jī)構(gòu)服務(wù)、保留、關(guān)愛獻(xiàn)血者，最大限度地減少血源（獻(xiàn)血者）流失，從而進(jìn)一步推動(dòng)我國(guó)無償獻(xiàn)血事業(yè)的健康發(fā)展。

[1]劉穎，馬麗媛.無償獻(xiàn)血者HBsAg酶免篩查結(jié)果分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（6）：725-727.

[2]謝云崢，祝宏，朱紹文.HBsAg、Anti-HCV、Anti-HIV酶聯(lián)免疫吸附法篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者屏蔽與歸隊(duì)程序建議[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2013，15（4）：398-402.

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[4]錢榕.ELISA 4項(xiàng)初檢陽性結(jié)果分析[J].中國(guó)輸血雜志，2010，23（9）：729-730.

[5]孟毓，盧濤，張艷梅，等.單試劑有反應(yīng)性獻(xiàn)血者延期并歸隊(duì)獻(xiàn)血的可行性探討[J].中國(guó)輸血雜志，2013，26（1）：70-71.

Analysis Trace and Confirmation of HBsAg Emzyme Immune Screening in Reactivity Blood Donors

YANG Tao1LI Ling2NIU Libin1JIA Huiqin11 Changzhi City The Centre Blood Station，Changzhi 046011，China.2 Chinese Academy of Medical Sciences Beijing Xiehe Medical College Transfusion Institute，Chengdu 610052 China

Objective To confirm and track the reactivity blood donors in HBsAg ELISA screening，to provide theoretical evidence for blood donors to return to the ranks.Methods NAT tests，HBsAg ELISA，anti-HBc ELISA and HBsAg Confirmatory test were employed,then track the blood donors every 3 months.Results 19（39.6%）cases were diagnosed as HBV negative from 48 cases with HBsAg-reactivity.Conclusion To formulate and implement workable confirmation guide and decycle strategy among reactivity blood donors in ELISA screening can utmost reduce the blood loss.

ELISA screening，Reactivity，Blood donors，Confirmation

R446

B

1674-9308（2015）29-0041-03

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.29.028

1046011長(zhǎng)治市中心血站；2610052成都，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院輸血研究所