閆迎光，張學(xué)新

（山東省煙臺(tái)市蓬萊市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，山東煙臺(tái) 264000）

關(guān)于一株鴨源沙門氏菌的分離鑒定

閆迎光1，張學(xué)新2

（山東省煙臺(tái)市蓬萊市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，山東煙臺(tái) 264000）

本試驗(yàn)對(duì)蓬萊市某發(fā)病鴨場(chǎng)送檢的病死鴨進(jìn)行了細(xì)菌常規(guī)分離與鑒定，通過(guò)培養(yǎng)特性和革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定該菌為沙門氏菌。

沙門氏菌；鴨；生化試驗(yàn)

沙門氏菌病（Salmonellosis）是公共衛(wèi)生學(xué)上頗具重要意義的人畜共患病之一，其病原沙門氏菌為直桿菌，大小為0.7～1.5μm×2.0～5.0μm，革蘭氏染色陰性，兼性厭氧，菌落直徑一般為2～4mm。

1 方法

1.1 細(xì)菌的分離

在超凈臺(tái)上將送檢鴨頭露出腦組織，把經(jīng)過(guò)灼燒滅菌的接種環(huán)刺入腦組織取菌，并將細(xì)菌接種在胰蛋白胨大豆瓊脂血清培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)。37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h后觀察結(jié)果。

1.2 培養(yǎng)特性的檢測(cè)

挑取TSA血清培養(yǎng)基上純化的單個(gè)菌落，分別接種在兩組普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、TSA血清培養(yǎng)基和血液瓊脂培養(yǎng)基上。一組放于37℃恒溫箱中進(jìn)行有氧培養(yǎng)，另一組置于厭氧條件下培養(yǎng)，24 h后，觀察結(jié)果。

1.3 細(xì)菌的染色與鏡檢

挑取TSA血清培養(yǎng)基上純化的單個(gè)菌落涂布于滴有生理鹽水的載玻片上，制備成細(xì)菌涂片，然后進(jìn)行火焰固定，再進(jìn)行革蘭氏染色，置于顯微鏡油鏡下觀察待測(cè)細(xì)菌的形態(tài)特征。

1.4 革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定系統(tǒng)的鑒定

取出2～8℃避光保存的試劑盒。用滅菌接種環(huán)挑取TSA血清培養(yǎng)基上適量的菌苔于生理鹽水中，充分混勻，制成菌懸液。按照革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定系統(tǒng)使用說(shuō)明書要求，用微量移液器分別向OPNG、精氨酸（ADH）、賴氨酸（LDH）、鳥氨酸（ODC）、檸檬酸（CIT）、硫化氫（H2S）、脲酶（URE）、乳糖（LAC）、吲哚（IND）、VP、明膠（GEL）、葡萄糖（GLU）、甘露醇（MAN）、肌醇（INO）、山梨醇（SOR）、鼠李糖（RHA）、蔗糖（SAC）、蜜二糖(MEL)、苦杏仁甙(AMY)、阿拉伯糖(ARA)等生化管中加入100μL菌懸液。其中，CIT為固體斜面培養(yǎng)基，需沿斜面加入。吸取200～ 300μL無(wú)菌液體石蠟覆蓋ADH、LDH和ODC的瓶口，用封口膜將其它的安瓿瓶封口。置于37℃恒溫箱培養(yǎng)18～24h，GEL恒溫培養(yǎng)18～24h后轉(zhuǎn)冰箱2～8℃30min。取出避光紙中保存的氧化酶試紙條，使用移液器取0.85%NaCl生理鹽水100μL于試紙條的一端，用滅菌接種環(huán)挑取TSA血清培養(yǎng)基上的單菌落涂抹在浸濕的試紙條上，1min內(nèi)觀察并記錄結(jié)果。

向VP管內(nèi)加6滴甲液和2滴乙液后，搖勻，置于37℃恒溫箱繼續(xù)培養(yǎng)30min后取出，培養(yǎng)基變紅為陽(yáng)性，反之為陰性；向IND管內(nèi)加1～2滴吲哚試劑，搖勻，2min內(nèi)出現(xiàn)粉紅色環(huán)為陽(yáng)性，反之為陰性；GEL液態(tài)為陽(yáng)性，固態(tài)為陰性；其余生化反應(yīng)管的結(jié)果則按照博檢革蘭氏陰性菌鑒定系統(tǒng)判讀表進(jìn)行判斷。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌的形態(tài)及培養(yǎng)特性

由細(xì)菌的形態(tài)及培養(yǎng)特性（表1）初步判斷為沙門氏菌。

2.2 革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定系統(tǒng)的鑒定結(jié)果

根據(jù)各生化反應(yīng)管的培養(yǎng)結(jié)果（表2）,可確定該菌為沙門氏菌。

沙門氏菌病是目前影響最為廣泛的人畜共患病之一，它不僅能造成被感染家禽的大批死亡，帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而且被感染的家禽產(chǎn)品還會(huì)作為帶菌者，間接危害人類健康。及早發(fā)現(xiàn)確定病因，有利于養(yǎng)殖戶對(duì)發(fā)病鴨群盡早治療，便于控制病情，降低經(jīng)濟(jì)損失。

[1]陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)（第四版）.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2007.

[2]曾華東，等.鴨沙門氏菌的分離與鑒定.畜牧獸醫(yī)科技信息，2007，01∶28-29.

表1 細(xì)菌的形態(tài)及培養(yǎng)特性

表2 革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定系統(tǒng)的鑒定結(jié)果

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．09.070