地中海藍鐘花(Scillaperuviana)的葉片胚狀體誘導(dǎo)及不定芽發(fā)生

屈云慧，楊春梅， 吳麗芳*， 單芹麗

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所，云南昆明 650205)

摘要[目的]建立地中海藍鐘花(Scilla peruviana)的離體快繁體系。[方法]以地中海藍鐘花的葉片為外植體進行離體培養(yǎng)，研究不同培養(yǎng)基對葉片誘導(dǎo)胚狀體及不定芽發(fā)生的影響。[結(jié)果]適于地中海藍鐘花葉片愈傷組織誘導(dǎo)及胚狀體發(fā)生的培養(yǎng)基為MS+ 6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L，不定芽分化培養(yǎng)基為MS+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L。[結(jié)論]該研究為地中海藍鐘花的快速穩(wěn)定繁殖提供較好的技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞地中海藍鐘花；胚狀體；快繁體系

中圖分類號S188

作者簡介屈云慧(1972- )，女，云南大理人，研究員，博士，從事園藝植物組織培養(yǎng)相關(guān)生物技術(shù)研究。*通訊作者。

收稿日期2015-06-02

Embryoid Induction and Adventitious Buds ofScillaperuviana

QU Yun-hui，YANG Chun-mei，WU Li-fang*et al(Flowers ResearchInstitute of Yunnan Agriculture SciencesAcademy，Kunming,Yunnan 65020)

Abstract[Objective] The aim was to establish in vitro rapid system for Scilla peruviana. [Method] Using leaves of Scilia Peruriana as explants，the effect of different culture medium on embryoid induction and adventitious buds of Scilla peruviana was studied. [Result] The results showed that MS+ 6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L culture medium was suitable for embryoid induction and adventitious buds of Scilla peruviana; MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L was suitable for differentiation of adventitious bud. [Conclusion] The study provided technical support for quickly stable reproduction of Scilla peruviana.

Key wordsSciliaperuviana; Embryo genesis; Rapid propagation system

地中海藍鐘花(Scillaperuviana)為多年生草本植物，地下具鱗莖。原產(chǎn)于葡萄牙、阿爾及利亞等國，是單子葉植物亞綱百合科綿棗兒屬植物。其抗寒耐貧瘠，葉片基生，披針形，平鋪地面呈蓮座狀，開花之后逐漸豎起，蘭紫色多朵小花排成頂生的總狀花序。其花株叢低矮，花序碩大，是配植庭園的好材料，也適于盆栽觀賞，在國外廣為引種和栽培。

因其有性繁殖較困難且難以保持母本的優(yōu)良性狀，在我國境內(nèi)極少引種。筆者以地中海藍鐘花的葉片為材料進行培養(yǎng)，在不同基本培養(yǎng)基中附加不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑對其進行誘導(dǎo)，獲得高頻不定芽和體細胞胚，以期為地中海藍鐘花的快速穩(wěn)定繁殖提供技術(shù)支持。

1材料與方法

1.1材料及處理取地中海藍鐘花(圖1a)新萌發(fā)的葉片為外植體，用自來水沖洗干凈后，75%乙醇浸泡1～2 min，再用0.1% HgCl2溶液消毒15～20 min，無菌水沖洗4～5次。

1.2方法將葉片切成1 cm大小的段。將葉片切塊平放到附加不同激素的MS培養(yǎng)基上[1-2]，每瓶培養(yǎng)基放置6～8個葉片切塊。試驗設(shè)置3個重復(fù)，每個重復(fù)8瓶。接種50 d后統(tǒng)計誘導(dǎo)出胚狀體的數(shù)量及其誘導(dǎo)率。對誘導(dǎo)培養(yǎng)的各階段形態(tài)進行拍照。

1.3培養(yǎng)條件培養(yǎng)基中蔗糖30 g/L，瓊脂6 g/L，pH 5.8。在培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度(25±2)℃，光照12 h/d，光照強度2 000～3 000 lx(2只日光燈)。

2結(jié)果與分析

2.1不同激素配比對誘導(dǎo)率及形態(tài)發(fā)生的影響地中海藍鐘花的葉片切塊在不同激素配比的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中較易產(chǎn)生愈傷組織及胚狀體，切塊邊緣產(chǎn)生愈傷組織的幾率高，而切塊表面易產(chǎn)生胚狀體(圖1b)。在供試的9個處理中均有愈傷組織及胚狀體的產(chǎn)生，總體誘導(dǎo)率均在80%以上。由表1可知， 6-BA濃度高時誘導(dǎo)愈傷組織的效果較好，NAA與6-BA的濃度比例相當時，有利于胚性愈傷組織的產(chǎn)生?？傮w來看，處理③愈傷組織的誘導(dǎo)頻率最高，達到89.4%，其次為處理⑥，誘導(dǎo)頻率為73.4%；在胚狀體的誘導(dǎo)上，處理②的誘導(dǎo)頻率最高，為87.6%；培養(yǎng)基中NAA濃度較高時(0.5 mg/L)或6-BA濃度較低時有少量根的再生。

表1　不同激素配比對誘導(dǎo)率及形態(tài)發(fā)生的影響

注：外植體均為靠近葉片基部的切塊。

在地中海藍鐘花葉片的誘導(dǎo)培養(yǎng)中，葉片的取材部位對誘導(dǎo)結(jié)果有一定的影響?？拷~片基部較厚的葉片切塊較易產(chǎn)生愈傷組織及胚狀體的分化，葉尖部位的切塊只能誘導(dǎo)出少量愈傷組織，無胚狀體的產(chǎn)生。所以，在外植體處理時，一般選擇生長健壯的葉片，而且在處理過程中，將葉片靠近頂部1/3的部位切去，只選擇剩下的2/3葉片作為外植體。適于葉片胚狀體發(fā)生的培養(yǎng)基為MS+ 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，胚狀體的誘導(dǎo)率達87.6%。

2.2不同激素配比對愈傷組織的繼代、胚狀體的形成與分化的影響將誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)接到繼代與分化培養(yǎng)基上進一步培養(yǎng)，在適宜的分化培養(yǎng)基上，繼代培養(yǎng)約30 d部分愈傷組織逐漸出現(xiàn)綠色不規(guī)則突起(圖1c)，其他愈傷組織則逐漸失去分化能力，直至褐化死亡。

由表2可知，在所有供試培養(yǎng)基上，均有愈傷組織和不定芽的發(fā)生，部分配比的培養(yǎng)基上有根系發(fā)生，不同濃度NAA與6-BA的配比對愈傷組織分化不定芽的培養(yǎng)差異明顯。6-BA 2.0 mg/L時，愈傷組織分化率較高，但部分出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，且分化的不定芽葉片呈筒形，不能正常伸展；愈傷組織分化不定芽的分化率與6-BA濃度呈反向相關(guān)，表現(xiàn)為隨著6-BA濃度的降低，分化率提高，且不定芽生長正常；愈傷組織出愈率與不定芽分化率與NAA的濃度關(guān)系不大，這與瞿素萍等[3]的研究結(jié)果相符。該研究結(jié)果表明，以6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L時，不定芽的誘導(dǎo)率最高，達到86.4%(圖1d)。

表2　不同激素配比對愈傷組織分化不定芽的影響

3討論

通過誘導(dǎo)地中海藍鐘花的鱗莖腋芽的萌發(fā)以及叢生芽的形成，顧福根等[4]已成功獲得再生植株，但未見建立地中海藍鐘花組培快繁體系并進行種苗擴繁生產(chǎn)的報道。該研究采用地中海藍鐘花新萌發(fā)的葉片切塊在適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上建立了組培種苗生產(chǎn)的快速繁殖體系。葉片的取材和消毒都十分方便，而且在取材過程中不損耗母株，適于引進品種的規(guī)?；敝撑c快速生產(chǎn)。

在地中海藍鐘花的繼代培養(yǎng)中，隨著繼代次數(shù)的增加，植株體內(nèi)會有一定的激素累積，需根據(jù)再生芽的生長狀況適時進行培養(yǎng)基中激素濃度的調(diào)整，逐步降低激素的用量，以保證種苗無(低)變異的發(fā)生，不斷獲得健壯的增殖苗。

參考文獻

[1] 孫駿威，方曉峰，陳珍.不同植物生長調(diào)節(jié)劑對黃秋葵組織培養(yǎng)的影響[J].北方園藝，2012(7)：139-141.

[2] 鄭志明，孫駿威，陳珍.不同植物生長調(diào)節(jié)劑對綿棗兒組織培養(yǎng)的影響[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42(3)：27-30.

[3] 瞿素萍，熊麗，王繼華，等.綿棗兒葉片植株再生體系的建立[J].植物生理學(xué)通訊，2006，42(1)：69.

[4] 顧福根，萬志剛，趙旭平.地中海綿棗兒的組織培養(yǎng)與植株再生[J].植物生理學(xué)通訊，2007，43(1):118.