廖予琦，侯英，楊燕，楊蕾,3，許志成，李璐蕓

［1.云南瑞升煙草技術(shù)(集團(tuán))有限公司，昆明 650106；2.云南同創(chuàng)檢測技術(shù)股份有限公司，昆明 650106；3.昆明理工大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院，昆明 650500］

甲醛次硫酸氫鈉俗稱吊白塊，分子式為NaHSO2·CH2O·2H2O，分子量為154.13。甲醛次硫酸氫鈉屬細(xì)胞原漿毒，對人體細(xì)胞功能損害較大，已被國際上列為能引起致癌作用的物質(zhì)［1］，因具有潛在的毒性而禁止在食品中使用。甲醛次硫酸氫鈉在酸性或受熱條件下可分解產(chǎn)生甲醛與亞硫酸氫鈉，其主要危害來自于分解放出的甲醛。同時甲醛次硫酸氫鈉分解產(chǎn)物之一為亞硫酸氫鈉，亞硫酸鈉具有漂白作用。食品中摻入甲醛次硫酸氫鈉可達(dá)到防腐增白，改善食品口感的目的［2］，但其會破壞食品的營養(yǎng)成分，可使蛋白質(zhì)凝固［3］。

米線是云南人的傳統(tǒng)飲食，據(jù)調(diào)查，市場上某些食品中有出現(xiàn)加入甲醛次硫酸氫鈉的情況［4］。長期食用摻有甲醛次硫酸氫鈉的食品，會損壞人體的皮膚粘膜、腎臟、肝臟及中樞神經(jīng)系統(tǒng)，嚴(yán)重的會導(dǎo)致癌癥和畸形病變等，直接危害消費(fèi)者的健康。為保證食品安全，測定食品中甲醛次硫酸氫鈉的含量對維護(hù)人體的健康有著重要作用。

目前檢測甲醛次硫酸氫鈉的方法有分光光度法，包括鹽酸苯肼法［5］、乙酰丙酮法［6］、變色酸法［7］；也有用AHMT法及直接蒸餾滴定–AHMT法［8］進(jìn)行測定的報道。這些測定方法是通過檢測甲醛次硫酸氫鈉中的甲醛或二氧化硫的含量來間接計算甲醛次硫酸氫鈉的含量。此外，近年發(fā)展起來的檢測甲醛次硫酸氫鈉的方法還有化學(xué)發(fā)光分析法［9］和高效液相色譜法［10］。

以上方法中，分光光度法和AHMT法間接測定甲醛次硫酸氫鈉，有些樣品本身就含有這兩種物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性；直接蒸餾滴定–AHMT法費(fèi)時費(fèi)力；化學(xué)發(fā)光法容易產(chǎn)生污染；高效液相色譜法需要衍生化。近年來，用離子色譜法檢測甲醛次硫酸氫鈉已經(jīng)成為趨勢。如趙士權(quán)等［11］以稀堿提取水發(fā)食品中的甲醛次硫酸氫鈉，過C18小柱除雜后，以KOH水溶液為流動相，進(jìn)行離子色譜法測定；趙新穎等［12］將樣品經(jīng)固相萃取柱處理后用離子色譜法測定食品中的甲醛次硫酸氫鈉；張建平等［13］建立了測定煙用添加劑中甲醛次硫酸氫鈉的離子色譜方法；黃鳳妹［14］采用IonPac ASl8作為分離柱，在線發(fā)生KOH淋洗液，離子色譜法測定了食品中的甲醛次硫酸氫鈉含量。

筆者采用離子色譜法測定米線中的甲醛次硫酸氫鈉，利用濃度為0.03 mol／L的NaOH溶液直接振蕩萃取，離心后過濾膜進(jìn)離子色譜儀系統(tǒng)分析，建立了米線中甲醛次硫酸氫鈉含量的測定方法，該法前處理簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

離子色譜分析儀：ICS–2000型，配有電導(dǎo)檢測器(CD)，柱溫箱，KOH自動淋洗液發(fā)生器，AS40自動進(jìn)樣器，美國戴安公司；

超純水儀：Milli-QA型，美國Millipore公司；

振蕩器：SHA–B型，中國金南儀器制造有限公司；

離心機(jī)：3K15型，15 000 r／min，德國Sigma公司；

甲醛次硫酸氫鈉標(biāo)準(zhǔn)品：98.0%，美國Sigma公司；

甲醛次硫酸氫鈉的儲備液：1 000 μg／mL，使用時逐級稀釋；

米線樣品：昆明農(nóng)貿(mào)市場；

實驗用水：電阻率為18.2 MΩ·cm的超純水。

1.2 樣品處理

準(zhǔn)確稱取樣品5.000 g，置于100 mL PET樣品瓶中，加入50 mL 0.03 mol／L的NaOH溶液，振蕩萃取30 min，放置30 min后以10 000 r／min的轉(zhuǎn)速離心8 min，萃取液過0.45 μm水系濾膜，進(jìn)離子色譜儀進(jìn)行分析檢測。

1.3 色譜條件

色譜柱：IonPac AS1l-HC型陰離子分離柱(250 mm×4 mm，)，IonPac AG11–HC 陰離子保護(hù)柱(50 mm×4 mm)，美國戴安公司；ASRS 300型抑制器；淋洗液：KOH溶液，流量為1.2 mL／min；抑制模式：自動抑制電流為179 mA；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：20 μL；檢測器：抑制型電導(dǎo)檢測器；檢測池溫度：40℃；淋洗梯度見如表1。

表1 淋洗液的淋洗梯度

1.4 色譜圖

由于所采集的米線樣品中未檢出有甲醛次硫酸氫鈉，因此在樣品中加入甲醛次硫酸氫鈉標(biāo)準(zhǔn)品，米線樣品加標(biāo)的離子色譜圖如圖1所示。由圖1可知，樣品中的其它雜質(zhì)對甲醛次硫酸氫鈉無影響，甲醛次硫酸氫鈉的分離度較好。采用的淋洗方式為梯度淋洗，在13 min后基線有向上飄的趨勢，但不影響甲醛次硫酸氫鈉的定性、定量，甲醛次硫酸氫鈉出峰的位置(5 min左右)基線較平穩(wěn)。

圖1 米線樣品加標(biāo)的離子色譜圖

2 結(jié)果與討論

2.1 萃取條件的選擇

2.1.1 萃取溶液

為選擇適宜的萃取溶液提取米線中的甲醛次硫酸氫鈉，分別用0.01，0.03，0.05 mol／L的NaOH溶液及超純水對米線進(jìn)行萃取試驗(樣品中甲醛次硫酸氫鈉含量低于檢出限，故在樣品處理的過程中加入微量甲醛次硫酸氫鈉標(biāo)品)。當(dāng)萃取溶液為超純水、0.01，0.03，0.05 mol／L NaOH溶液時，不同濃度萃取液的萃取效果見圖2。由圖2可知，0.03 mol／L NaOH溶液的萃取效果更好，故選擇0.03 mol／L的NaOH溶液作為萃取溶液。

圖2 不同萃取溶液的萃取效果

2.1.2 萃取時間

將米線切細(xì)后，分別稱取幾份5.0 g左右的樣品，同時加入微量甲醛次硫酸氫鈉標(biāo)準(zhǔn)品。加入一定量的超純水作為萃取劑，分別振蕩器上振蕩10，20，30，30，40 min，不同萃取時間的萃取效果見圖3。由圖3可知，振蕩30 min 能達(dá)到最好的萃取效果。因此選擇萃取時間為30 min。

圖3 不同萃取時間的萃取效果

2.1.3 淋洗液流速、柱溫和檢測池溫度

淋洗液流速、柱溫和檢測池溫度是影響分離效果的3個主要因素。淋洗液流速的增大和柱溫的升高可以使出峰提前，分析時間縮短，但系統(tǒng)壓力增大，造成靈敏度下降及分離度降低?？紤]到分離柱的使用壽命，選擇的儀器條件為：淋洗液流量為1.2 mL／min，柱溫為30℃，檢測池溫度為40℃。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線、線性范圍與檢出限

配制質(zhì)量濃度分別為2.00，5.00，10.00，20.00，50.00 μg／mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按優(yōu)化的離子色譜條件進(jìn)行測定，甲醛次硫酸氫鈉的質(zhì)量濃度在2.0～50 μg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.044 3X+0.001，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 7，檢出限(LOD)和定量檢測限(LOQ)分別由3倍和10倍信噪比來確定，通過計算得出甲醛次硫酸氫鈉的檢出限為0.007 μg／mL，定量限為0.024 μg／mL。

2.3 重復(fù)性試驗

分別在不同3個工作日處理相同的樣品，所選樣品中甲醛次硫酸氫鈉含量低于檢出限，向每個樣品當(dāng)中加入相同體積的甲醛次硫酸氫鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。前處理條件相同，每天處理6 份樣品，在1.3色譜條件下進(jìn)行分析，測定結(jié)果見表2。

表2 米線樣品的測量重現(xiàn)性

由表2可知，樣品的日內(nèi)精度不大于2.72%，樣品的日間精密度為0.82%，說明采用1.2方法處理樣品，重現(xiàn)性良好。

2.4 加標(biāo)回收試驗

根據(jù)所測得的米線中甲醛次硫酸氫鈉的含量，依次加入高、中、低三個水平濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液之后，采用相同的處理方法對樣品進(jìn)行處理。對加有標(biāo)準(zhǔn)溶液的樣品進(jìn)行分析測定，計算回收率，結(jié)果見表3。由表3可知，加標(biāo)準(zhǔn)米線樣品的回收率在91.4%～110.7%之間，不同水平的平均回收率在95.1%～101.2%之間，說明此方法測定米線中甲醛次硫酸氫鈉的含量準(zhǔn)確度較高。

表3 米線樣品甲醛次硫酸氫鈉的回收率

2.5 穩(wěn)定性試驗

將處理好的樣品(在樣品處理的過程中加入微量甲醛次硫酸氫鈉標(biāo)準(zhǔn)樣品)，置于冰箱0～5℃條件下分別保存6，12，24，48 h后進(jìn)行測試，考察樣品溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果見表4。由表4可知，萃取液在48 h內(nèi)穩(wěn)定，因此樣品在處理后48 h內(nèi)進(jìn)樣即可。

表4 樣品穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.6 樣品測定

配制10.00 μg／mL的濃度的甲醛次硫酸氫鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為質(zhì)控樣，每隔10次樣品檢測一個質(zhì)控樣，以保證方法的可靠性。在樣品測定過程中檢測質(zhì)控樣6次，結(jié)果見表5。由表5可知，質(zhì)控樣檢測平均值為10.10 μg／mL，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.23%。

表5 質(zhì)控樣品的測定結(jié)果

3 結(jié)語

以0.03 mol／L的NaOH溶液提取米線樣品中的甲醛次硫酸氫鈉，利用離子色譜抑制電導(dǎo)檢測法測定云南傳統(tǒng)食品–米線中的甲醛次硫酸氫鈉。該方法具有前處理簡單、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)。該法不需要過固相萃取小柱除雜也能使目標(biāo)物與其它雜質(zhì)得到很好的分離。該方法可在食品安全檢驗工作中(特別是水發(fā)食品中甲醛次硫酸氫鈉的檢測方面)發(fā)揮重要作用，具有較高的推廣應(yīng)用價值。

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