李妮妮，南葉飛，張洵立，唐璇

(西安石油大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，陜西 西安 710065)

阿霉素(ADM)是一種抗癌抗生素，其結(jié)構(gòu)中含有糖苷和蒽環(huán)，廣泛用于治療腫瘤疾病。臨床研究表明，它對白血病、骨肉瘤、乳腺癌及小細(xì)胞肺癌具有很好的療效［1-3］。在這些相關(guān)研究和藥物質(zhì)量控制工作中，阿霉素檢測方法有高效液相色譜法、放射免疫法等［4-5］，操作步驟復(fù)雜、價格昂貴。本文利用ADM 本身有天然熒光，采用熒光分光光度計建立直接熒光分析方法，檢測鹽酸阿霉素原料藥及其注射制劑的含量。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

鹽酸阿霉素原料藥(＞99.5%)，工業(yè)品;注射用鹽酸阿霉素;去離子水。

F97 熒光分光光度計;BSA224S 型分析天平。

1.2 溶液配制

鹽酸阿霉素80.0 mg，用蒸餾水溶解至100 mL容量瓶中，作為鹽酸阿霉素儲備液，其濃度為2.76×10－3mol/L。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

取鹽酸阿霉素儲備液，加水稀釋，配制不同濃度的溶液，用熒光分光光度計測定阿霉素的熒光激發(fā)波長和熒光發(fā)射波長。儀器參數(shù)為:掃面速度1 000 nm/min，掃面間隔1.0 nm，激發(fā)帶寬10 nm，發(fā)射帶寬10 nm，增益設(shè)為中。

2 結(jié)果與討論

2.1 測定波長選擇

鹽酸阿霉素儲備液加水稀釋到6. 98 ×10－5mol/L，用硫酸調(diào)pH =6.3［6］，測定熒光激發(fā)波長和熒光發(fā)射波長，結(jié)果見圖1。

由圖1 可知，鹽酸阿霉素的最大激發(fā)波長λex=469 nm，最大發(fā)射波長λem=593 nm。

圖1 鹽酸阿霉素的熒光光譜Fig.1 Fluorescence spectrum of doxorubicin hydrochloride

2.2 鹽酸阿霉素的熒光強(qiáng)度和濃度的關(guān)系

鹽酸阿霉素儲備液加水稀釋，測定熒光強(qiáng)度，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸阿霉素濃度與熒光強(qiáng)度的關(guān)系Table 1 The relationship of doxorubicin hydrochlorideconcentration and fluorescence intensity

由表1 可知，鹽酸阿霉素的濃度在6. 98 ×10－5mol/L時熒光強(qiáng)度最大，只有在一定的濃度范圍內(nèi)，鹽酸阿霉素的濃度與其熒光強(qiáng)度呈正相關(guān)的關(guān)系。故選擇藥物濃度低于6.98 ×10－5mol/L 的溶液進(jìn)行鹽酸阿霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線的研究。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

鹽酸阿霉素儲備液加水稀釋成0.99 ×10－7，2.46 ×10－6，4.91 ×10－6，9.82 ×10－6，1.29 ×10－5，1.97 ×10－5mol/L 濃度的溶液，測定熒光值，鹽酸阿霉素?zé)晒鈴?qiáng)度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖2。

圖2 鹽酸阿霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 The standard curre of doxorubicin hydrohloride

由圖2 可知，濃度在9. 90 × 10－8～1. 97 ×10－5mol/L范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系，線性方程為y=12.124x+104.81，R2=0.994 5。

2.4 鹽酸阿霉素的檢測限

配制濃度9.82 ×10－10mol/L 的鹽酸阿霉素溶液，以二次蒸餾水作為空白對照，測定熒光強(qiáng)度，結(jié)果見表2。

表2 鹽酸阿霉素的檢測限Table 2 The determination of detection limit of doxorubicin hydrochloride

由表2 可知，9.82 ×10－10mol/L 鹽酸阿霉素的熒光強(qiáng)度的平均值F =2.14，標(biāo)準(zhǔn)偏差S =0.032。

其檢測限［7］。

2.5 鹽酸阿霉素的穩(wěn)定性

對9.82 ×10－5mol/L 鹽酸阿霉素溶液在不同時間內(nèi)進(jìn)行熒光檢測，結(jié)果見表3。

表3 鹽酸阿霉素穩(wěn)定性Table 3 Doxorubicin hydrochloride stability

由表3 可知，不避光保存條件下，鹽酸阿霉素溶液熒光強(qiáng)度在1 h 內(nèi)略有下降，10 d 后明顯減弱，一個月后減弱了近1/2 多。避光保存時，熒光強(qiáng)度相對穩(wěn)定，符合藥物含量檢測的要求。

2.6 鹽酸阿霉素的回收率

對濃度分別為1.24 ×10－5，4.31 ×10－6，4.97 ×10－7mol/L 的阿霉素溶液測定熒光值，每組測5 次，取平均值，其平均回收率見表4。

表4 鹽酸阿霉素的回收率Table 4 The recovery rate detection of doxorubicinhydrochloride

2.7 樣品分析

2.7.1 制劑含量的檢測 準(zhǔn)確稱取鹽酸阿霉素制劑2.1，3.0，3.5 mg 分別置于50 mL 的容量瓶中，用蒸餾水溶解、定容，測定熒光值，平行5 次，扣除空白對照，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度、分別為8. 79 ×10－6，1.27 ×10－5，1.49 ×10－5mol/L，含藥率，結(jié)果見表5。

表5 阿霉素制劑的含藥量Table 5 The including the dosage of detection of ADM doxorubicin hydrochloride injection

2.7.2 加標(biāo)回收率 準(zhǔn)確稱取鹽酸阿霉素注射劑6.5 mg，置100 mL 容量瓶中，用蒸餾水溶解、定容。稱取阿霉素3.9 mg，用蒸餾水溶解在50 mL 的容量瓶中，其濃度為1.34 ×10－4mol/L。按低、中、高三個不同水平將其加入待測樣品溶液，測定加標(biāo)回收率，見表6。

分別量取10 mL 鹽酸阿霉素注射劑溶液，置于3 個50 mL 容量瓶中，分別加入0.5，1.0，1.5 mL。

濃度1.34 ×10－4mol/L 的阿霉素溶液，用蒸餾水定容，測其熒光強(qiáng)度，平行3 次，取平均值，然后計算回收率。

表6 鹽酸阿霉素的加標(biāo)回收率Table 6 Standard addition recovery rate test of doxorubicin hydrochloride

3 結(jié)論

采用熒光分光光度計檢測鹽酸阿霉素的含量，在 鹽 酸 阿 霉 素 濃 度9. 90 × 10－8～1. 97 ×10－5mol/L，熒光強(qiáng)度和濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R 為0.994 5，回收率98.91% ～101.0%，注射用鹽酸阿霉素的含藥量12. 24%，加標(biāo)回收率100.32% ～102.19%。熒光分析法測定鹽酸阿霉素具有操作簡單、精密度高、檢出限低等優(yōu)點(diǎn)，能夠用于鹽酸阿霉素原料藥及其制劑的檢測。

［1］ Liu X，Chen Z，Chua C C，et al.Melatonin as an effective protect-tor against doxorubicin-induced cardiotoxicity［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2002，283(1):H254.

［2］ 韓銳.腫瘤化學(xué)預(yù)防及藥物治療［M］.北京:北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1994:266-272.

［3］ 國家醫(yī)藥管理局，醫(yī)藥工業(yè)情報站編.新藥指南［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，1990:458-459.

［4］ Gilbert C M，F(xiàn)ilippich L J，MoGeary R P，et al.Pharmacokinetics of doxorubicinol in dogs［J］. J Vet Pharmacol Ther，2006，29(5):433-438.

［5］ Lewis A L，Taylor R R，Hall B，et al.Pharmacokinetic and safety study of doxorubicin-eluting beads in a porcine model of hepatic arterial embolization［J］. J Vasc Interv Radiol，2006，17(8):1335-1343.

［6］ 李桂云. 熒光分析法測定注射用的鹽酸阿霉素含量［J］.中國藥物與臨床，2013(13):26-27.

［7］ Hernandez F H，Escriche J M. Fluorimetric detemination of aluminium with morin after extraction with isobuty methyl ketone［J］.J Analyst，1984，119(2):1585-1592.