陳功義 郝振芳

(河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，鄭州 451450)

微生態(tài)制劑(microecologics)是運用微生態(tài)原理制成的含有有益活菌制劑，能有效補充畜禽動物消化道內(nèi)的益生菌，改善消化道菌群平衡［1－3］。乳酸菌是微生態(tài)制劑中應(yīng)用最早、目前種類最多、應(yīng)用最廣泛的一種益生菌，在改善飼料利用率、改善畜禽生產(chǎn)性能和增強免疫機能等方面發(fā)揮著重要作用［4］。幼鴿的傳統(tǒng)喂養(yǎng)是靠母鴿采食后再從嗉囊、口腔吐出后哺育幼鴿，幼鴿成活率高、生長發(fā)育快，是因為母鴿嗉囊內(nèi)有大量乳酸菌，乳酸菌不僅可以維持幼鴿菌群平衡，還能促進食物的消化吸收，產(chǎn)生多種維生素，并促進微量元素的吸收，增強幼鴿的免疫力［5］，但傳統(tǒng)幼鴿喂養(yǎng)方式并不適合大規(guī)模養(yǎng)殖。白羽王鴿是國內(nèi)生產(chǎn)性能最好的肉用鴿種之一，生長速度快，一般18～21 d即可出欄。本研究通過添加不同劑量的乳酸菌微生態(tài)制劑，探討對白羽王鴿生產(chǎn)性能和免疫機能的影響，為其在實際生產(chǎn)中提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

乳酸菌微生態(tài)制劑中乳酸菌的有效活菌數(shù)量為5×108CFU/g，由河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院牧業(yè)工程學(xué)院實驗室提供。鴿子血清免疫球蛋白G(IgG)酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒購自美國MARKET有限公司。

1.2 試驗動物及飼糧

試驗動物選取產(chǎn)鴿自然孵化1日齡白羽王鴿60只，隨機分成3個組，每組20只鴿。預(yù)試期2 d，飼喂基礎(chǔ)飼糧，飲用涼透的白開水;正試期16 d。為精確比較不同劑量試驗結(jié)果，試驗組每日每只口腔滴入乳酸菌微生態(tài)制劑1 mL，第1組為對照組，每日每只口腔滴入生理鹽水1 mL;第2和3組分別補充劑量是2×106和5×106CFU的乳酸菌微生態(tài)制劑。鴿群采用多層籠養(yǎng)，免疫程序按常規(guī)進行，1～6日齡采用注射器灌喂飼糧，每日8 次(08:00、10:00、12:00、14:00、16:00、18:00、20:00、22:00進行)，7～19日齡自由采食飼糧，定時提供，每日 5 次(08:00、11:00、14:00、17:00、22:00進行)，保健砂自由采食，自由飲水，保證衛(wèi)生和充足的光照。

基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1994)家禽營養(yǎng)需要配制，飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。保健砂組成:中粗砂60%、黃泥25%、熟石膏8%、木炭粉4%、明礬1%、龍膽草1%、甘草1%。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.3 測定指標和方法

1.3.1 生產(chǎn)性能

分別于乳鴿11和19日齡07:00時空腹進行稱末重(FBW)，計算各組平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.3.2 免疫器官重量級免疫器官指數(shù)測定

分別于乳鴿11和19日齡稱重后，每組隨機抽取6只乳鴿，摘取脾臟、胸腺、法氏囊，剔除脂肪組織后用濾紙吸取表面水分，迅速稱其鮮重。免疫器官指數(shù)計算公式為:

免疫器官指數(shù)=免疫器官鮮重(mg)/活重(g)。

1.3.3 血清IgG含量測定

分別于乳鴿11和19日齡稱重后，每組隨機抽取6只乳鴿剝離免疫器官后，心臟采血2 mL，37℃水浴1 h后，3 000 r/min離心15 min，分離血清，按購自美國MARKET有限公司的鴿子血清IgG ELISA試劑盒方法測定血清IgG含量。

1.3.4 腸道菌群的測定

于乳鴿11和19日齡稱重后，每組隨機抽取6只乳鴿剝離免疫器官、采血后，無菌采集乳鴿盲腸內(nèi)容物 0.5 g，進行倍比稀釋，取10－5、10－6、10－73個稀釋度，每個稀釋度3個重復(fù)，分別滴入伊紅美藍培養(yǎng)基(EMB)平板于37℃恒溫培養(yǎng)24 h和乳桿菌培養(yǎng)基(MRS)平板于厭氧培養(yǎng)箱36℃培養(yǎng)72 h［6］。分別計數(shù)測定腸道內(nèi)容物中大腸桿菌和乳酸菌的數(shù)量，以lg(CFU/g)表示。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗結(jié)果以“平均值±標準差”表示，用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析，采用LSD單因素方差分析(one-way ANOVA)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 乳酸菌微生態(tài)制劑對各組乳鴿生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，11日齡時，第3組乳鴿的平均日增重、末重最高，均顯著高于第2組和對照組(P＜0.05)，第3組料重比顯著低于第2組和對照組(P＜0.05);第2組乳鴿料重比顯著低于對照組(P＜0.05)，但平均日增重、末重與對照組差異不顯著(P＞0.05)。19日齡時，第3組乳鴿末重最高，高出第2組6.37%(P ＜0.05)，高出對照組15.1%(P＜0.05)，試驗組第2組和第3組平均日增重和料重比均顯著優(yōu)于對照組(P＜0.05)，但第2組乳鴿平均日增重和料重比與第3組差異不顯著(P＞0.05)。

表2 微生態(tài)制劑對乳鴿生產(chǎn)性能的影響Table 2 Effects of microecologics on growth performance of pigeons

2.2 乳酸菌微生態(tài)制劑對乳鴿免疫器官的影響

由表3可知，11日齡時，脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)和胸腺指數(shù)各組間差異均不顯著(P＞0.05)。19日齡時，脾臟指數(shù)各組間差異不顯著(P＞0.05);第3組乳鴿法氏囊指數(shù)和胸腺指數(shù)最高，均顯著高于第2組和對照組(P＜0.05)，第2組乳鴿法氏囊指數(shù)顯著高于對照組(P＜0.05)，但胸腺指數(shù)與對照組相比無顯著差異(P＞0.05)。

表3 微生態(tài)制劑對乳鴿免疫器官指數(shù)的影響Table 3 Effects of microecologics on index of immune organs of pigeons mg/g

2.3 乳酸菌微生態(tài)制劑對乳鴿血清IgG含量的影響

由表4可知，11日齡時，乳鴿血清IgG含量各組間差異不顯著(P＞0.05)。19日齡時，第3組乳鴿血清IgG含量最高，顯著高于第2組和對照組(P＜0.05);第2組乳鴿血清IgG含量顯著高于對照組(P ＜0.05)。

表4 微生態(tài)制劑對乳鴿血清IgG含量的影響Table 4 Effects of microecologics on serum IgG concentration of pigeons ng/mL

2.4 乳酸菌微生態(tài)制劑對乳鴿腸道菌群的影響

由表5可知，11日齡時，乳鴿腸道內(nèi)容物中大腸桿菌的數(shù)量各組間差異不顯著(P＞0.05);第3組乳鴿腸道中乳酸菌的數(shù)量最高，顯著高于第2組和對照組(P＜0.05)，但第2組與對照組對比差異不顯著(P＞0.05)。19日齡時，第3組乳鴿腸道內(nèi)容物中大腸桿菌的數(shù)量最低，顯著低于第2組和對照組(P＜0.05)，第2組乳鴿腸道大腸桿菌的數(shù)量顯著低于對照組(P＜0.05);第3組乳鴿腸道中乳酸菌的數(shù)量最高，顯著高于第2組和對照組(P＜0.05)，第2組乳鴿腸道乳酸菌的數(shù)量顯著高于對照組(P ＜0.05)。

表5 微生態(tài)制劑對乳鴿腸道菌群的影響Table 5 Effects of microecologics on intestinal microflora of pigeons lg(CFU/g)

3 討論

3.1 乳酸菌微生態(tài)制劑對乳鴿生產(chǎn)性能的影響

國內(nèi)外關(guān)于乳酸菌在動物生產(chǎn)中應(yīng)用的報道很多，主要從動物生產(chǎn)性能、腸道菌群、免疫器官和指標等方面研究。大部分研究認為，乳酸菌能產(chǎn)生蛋白酶和淀粉酶等物質(zhì)，可將分子量較大的蛋白質(zhì)降解為易于吸收的小分子肽和游離氨基酸，促進腸道對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的消化，提高飼料的利用率。同時產(chǎn)生大量的B族維生素和氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)，能明顯提高動物生產(chǎn)性能［7］。也有研究認為，飼糧中添加乳酸菌能降低動物腸道的pH，調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，可促進營養(yǎng)物質(zhì)的代謝和吸收，從而提高動物生產(chǎn)性能［8］。

Kalavathy 等［9］和徐海燕等［10］研究均表明，飼糧中添加乳酸菌可使肉雞體重、平均日增重等顯著提高。楚青惠等［11］和 Gianga 等［12］研究表明，母豬飼糧中添加乳酸菌可使仔豬斷奶重、平均日增重、仔豬皮毛發(fā)育狀況評分較對照組均極顯著提高，其腹瀉率均有降低趨勢。曹瑋娜等［13］研究表明，在飲水中添加乳酸菌能提高獺兔生產(chǎn)性能。本研究中添加不同濃度的乳酸菌微生態(tài)制劑，當(dāng)添加量在5×106CFU/d時，11和19日齡乳鴿的平均日增重、末重最高，料重比最低，表明乳酸菌微生態(tài)制劑能顯著提高乳鴿的生產(chǎn)性能。

剛出生的乳鴿腸道中是無菌的，傳統(tǒng)的喂養(yǎng)方式是母鴿喂養(yǎng)，成活率高，生長發(fā)育良好，可能與母鴿嗉囊中存在大量乳酸菌關(guān)系密切。給乳鴿灌服一定劑量的乳酸菌，可使乳酸菌在腸道中較早植入，并有效競爭性地抑制病原菌的附著，有利于降低腹瀉等疾病的發(fā)病率，促進生長發(fā)育。

3.2 乳酸菌微生態(tài)制劑對乳鴿免疫器官指數(shù)的影響

益生菌主要通過2個途徑提高動物機體的免疫力，一是通過促進免疫細胞、組織和器官生長發(fā)育;二是刺激機體產(chǎn)生抗體，提高免疫細胞活性［14］。脾臟是禽類最大的外周免疫器官，參與全身的細胞免疫和體液免疫，法氏囊是禽類特有的體液免疫器官，胸腺是細胞免疫的中樞器官。Rivas等［15］研究表明脾臟、法氏囊和胸腺的重量和相對重量越大，說明禽類機體的細胞免疫和體液免疫機能越高。乳酸菌在腸道中繁殖后，不斷合成對動物生長發(fā)育所需要的B族維生素、氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)，不僅保證了動物免疫器官發(fā)育的物質(zhì)所需，還可以作為抗原物質(zhì)刺激免疫器官的發(fā)育。石峰等［16］研究表明，飲水中添加乳酸菌微生態(tài)制劑能顯著提高肉雞的脾臟、法氏囊和胸腺指數(shù)。李文立等［17］研究表明，添加復(fù)合乳酸菌制劑可提高蛋雛雞的胸腺指數(shù)。本研究結(jié)果表明，日添加量為5×106CFU時，19日齡乳鴿法氏囊指數(shù)和胸腺指數(shù)有一定程度的提高，表明乳酸菌微生態(tài)制劑能提高乳鴿的免疫力，增強其抗病能力。

3.3 乳酸菌微生態(tài)制劑對乳鴿血清IgG含量的影響

免疫球蛋白是介導(dǎo)動物體液免疫的主要免疫分子，能夠特異性地與相應(yīng)的抗原結(jié)合，血清中IgG、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)的含量是反映機體免疫功能的重要指標。其中IgG主要由脾臟和淋巴結(jié)中的漿細胞合成和分泌，約占總免疫球蛋白總量的70%～80%，是鴿子抗感染免疫的主力抗體［18］。IgG是體液免疫反應(yīng)的主要抗體，在結(jié)合補體、增強免疫細胞吞噬能力和中和細菌毒素方面，具有重要作用。徐海燕等［10］研究表明，復(fù)合微生物制劑可提高雞血清 IgG含量。劉輝等［19］和Kunavue等［20］研究發(fā)現(xiàn)，豬采食含微生態(tài)制劑的飼糧后，血清IgG含量顯著提高。本研究結(jié)果表明，乳酸菌微生態(tài)制劑能夠提高白羽王鴿血清IgG含量的作用，尤其是日添加量為5×106CFU時效果最為明顯。

3.4 乳酸菌微生態(tài)制劑對乳鴿腸道菌群的影響

傳統(tǒng)的乳鴿飼養(yǎng)是靠母鴿哺育乳鴿，乳鴿成活率高、生長發(fā)育快，是因為母鴿嗉囊內(nèi)有大量乳酸菌，能促進食物的消化吸收，增強幼鴿的免疫力［5］。乳酸菌是健康鴿腸道正常菌群的優(yōu)勢菌群［6］，主要存在嗉囊、盲腸和直腸。乳酸菌定植于腸道大量繁殖后，可競爭性抑制傷寒桿菌等致病菌在腸道內(nèi)的繁殖，可使腸道形成一個穩(wěn)定的環(huán)境，減少疾病的發(fā)生。Mogilner等［21］研究表明，微生態(tài)制劑中的活菌進入動物腸道內(nèi)迅速形成優(yōu)勢菌群，并產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物如有機酸等降低了腸道pH，不利于大腸桿菌的生長。謝全喜等［22］研究發(fā)現(xiàn)，肉雞采食含微生態(tài)制劑的飼糧后，盲腸乳酸菌數(shù)量顯著增加。本研究結(jié)果也證實，乳酸菌微生態(tài)制劑可增加白羽王鴿腸道中乳酸菌數(shù)量，而對大腸桿菌有明顯的抑制作用。表明乳酸菌微生態(tài)制劑能促進腸道益生菌的生長，競爭性抑制有害菌生長，維持正常腸道菌群，促進乳鴿生長，提高其免疫力。

4 結(jié)論

添加乳酸菌微生態(tài)制劑能提高白羽王鴿生產(chǎn)性能，提高乳鴿法氏囊指數(shù)和胸腺指數(shù)，提高血清中IgG含量，提高腸道內(nèi)容物中乳酸菌的數(shù)量，并減低大腸桿菌的數(shù)量，增強白羽王鴿的免疫力。本試驗條件下，白羽王鴿日添加量為5×106CFU時效果最為顯著。

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