石 琳，尹 園，王 帥，齊 惠，倪春蕾，程建軍,*，朱秀清

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；2.黑龍江省大豆技術(shù)開發(fā)研究中心，黑龍江 哈爾濱 150086）

紅曲霉發(fā)酵高溫豆粕高產(chǎn)可溶性多肽

石 琳1，尹 園1，王 帥1，齊 惠1，倪春蕾1，程建軍1,*，朱秀清2

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；2.黑龍江省大豆技術(shù)開發(fā)研究中心，黑龍江 哈爾濱 150086）

通過利用紅曲霉發(fā)酵高溫豆粕產(chǎn)生可溶性多肽，確定菌株對變性蛋白質(zhì)有一定的分解作用；并采用紫外誘變紅曲霉，經(jīng)初篩和復(fù)篩，最終篩選出能高產(chǎn)可溶性多肽的菌株。結(jié)果表明：紅曲霉發(fā)酵可分解高溫豆粕中的蛋白質(zhì)，并且產(chǎn)生分子質(zhì)量介于7.8～20.1 kD的可溶性多肽。發(fā)酵120 h可產(chǎn)生（13.41±0.20） mg/mL的可溶性多肽，是原豆粕的3.60 倍。15 W紫外線燈35 cm處，攪拌條件下照射50 s，紅曲霉的致死率為（82.70±2.20）%。在此誘變條件下得到一株高產(chǎn)可溶性多肽的突變紅曲霉0501100菌株。該菌株在發(fā)酵豆粕96 h時產(chǎn)生的可溶性多肽含量達(dá)到（17.20±0.18） mg/mL，是原菌株在同等發(fā)酵時間條件下產(chǎn)生可溶性多肽的1.47 倍，是原豆粕的4.61 倍，縮短了發(fā)酵時間并且有較好的遺傳穩(wěn)定性。

紅曲霉；高溫豆粕；可溶性多肽

大豆經(jīng)浸提脫油后的碎片狀或粗粉狀的副產(chǎn)品--豆粕，是目前使用最多、最廣泛的植物性蛋白質(zhì)飼料原料。其粗蛋白含量高（40%～45%），氨基酸組成平衡，營養(yǎng)價值較高[1]，因此豆粕蛋白質(zhì)的高效利用就顯得更為重要。高溫豆粕中蛋白質(zhì)的變性程度很大，其溶解性等性質(zhì)較大豆分離蛋白差，可通過直接酶解法[2-3]或發(fā)酵法[1,4]生產(chǎn)大豆肽的方式加以利用，而發(fā)酵法既能去除大豆中各種致敏原[5]、增加蛋白質(zhì)和氨基酸總含量[6]，還能把蛋白酶的微生物生產(chǎn)和大豆肽的酶解生產(chǎn)結(jié)合在一起，降低了大豆多肽的生產(chǎn)成本，應(yīng)用前景較好。

紅曲霉（Monascus）在我國主要是用于制造傳統(tǒng)食品，在釀酒、發(fā)酵食品、食品色素、中藥等方面有著廣泛應(yīng)用[7]。它能利用多種有機(jī)碳源，可產(chǎn)生多種酶類，并有不少菌株可產(chǎn)生高活性蛋白酶[8]。誘變處理可使得微生物的突變機(jī)率增大，加上特定培養(yǎng)基的定向篩選，可篩選出高產(chǎn)某種特定產(chǎn)物（如蛋白酶）的遺傳穩(wěn)定菌株用于工業(yè)發(fā)酵。

關(guān)于紅曲霉的研究主要集中在紅曲色素[9-11]以及其他次級代謝產(chǎn)物，其中包括了具有降血脂功效的洛伐他?。╨ovastatin）[12]、降血壓功效的γ-氨基丁酸[13]、增強(qiáng)免疫力的紅曲多糖[14]、VD的前體麥角固醇（ergosterol）[15]，而對于紅曲霉作為霉菌自身產(chǎn)生的蛋白酶的利用卻較少。本研究利用高溫脫脂后的大豆豆粕作為原料，期望通過初篩和復(fù)篩分離出能高效分解蛋白的優(yōu)良紅曲霉菌株，將變性豆粕蛋白轉(zhuǎn)化為易于人體消化吸收的多肽，為進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌種與試劑

紫紅曲霉（Monascus purpureus）3.5833 中國普通微生物菌種保藏管理中心（China General Microbiological Culture Collection Center，CGMCC）。

豆粕 黑龍江省陽霖油脂集團(tuán)有限公司；偶氮酪蛋白（azocasein） 美國Sigma公司；脫脂奶粉 市售；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 培養(yǎng)基

斜面培養(yǎng)基（麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基）：蛋白胨4 g/L、葡萄糖10 g/L、酵母浸粉3 g/L、麥芽粉10 g/L、瓊脂粉13 g/L，pH值自然。

液體培養(yǎng)基：葡萄糖20 g/L、蛋白胨15 g/L、酵母提取物5 g/L，pH值自然。

初篩培養(yǎng)基[16]：脫脂奶粉25 g，溶于250 mL水中；瓊脂10 g，溶于250 mL水中，分開滅菌，待冷卻至45～50 ℃后混合。

復(fù)篩培養(yǎng)基（液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基）：高溫豆粕與水之比為1∶9（m/V），pH值自然。

基礎(chǔ)發(fā)酵條件：80 g/500 mL的裝料量，107CFU/mL的接種量，（28.0±0.5）℃、180 r/min的搖床培養(yǎng)條件。

除初篩培養(yǎng)基采用115 ℃滅菌15 min外，其他培養(yǎng)基均采用121 ℃滅菌20 min后備用。

1.3 儀器與設(shè)備

5430R小型臺式高速離心機(jī) 艾本德中國有限公司；SW-CJ-1D型超凈工作臺 蘇州凈化設(shè)備有限公司；HZQ-F100振蕩培養(yǎng)箱 哈爾濱市東聯(lián)生化儀器有限公司；TU-1800紫外-可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.4 紅曲霉發(fā)酵高溫豆粕產(chǎn)可溶性多肽的研究

1.4.1 高溫豆粕中蛋白質(zhì)的測定

采用國標(biāo)GB 5009.5-2010《食品中蛋白質(zhì)的測定》中的凱氏定氮法測定豆粕中蛋白質(zhì)含量。

粉碎高溫豆粕后過80 目篩，取篩下物測定原豆粕中粗蛋白含量。在室溫條件下，將篩下物按照料水比1∶9，180 r/min搖床振蕩提取2 h，而后7 000×g離心15 min，取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，測定原豆粕中可溶性蛋白含量。

將篩下物在121 ℃熱處理20 min后，7 000×g離心15 min，取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，測定加熱處理后高溫豆粕中可溶性蛋白含量。

1.4.2 生長曲線的測定

將活化后的菌種斜面制成孢子懸液，接種于液體培養(yǎng)基，按照40 mL/250 mL的裝料量，106CFU/mL的接種量，在（28.0±0.5）℃、180 r/min的搖床培養(yǎng)條件下振蕩培養(yǎng)192 h。每24 h取培養(yǎng)基梯度稀釋涂布，每個稀釋度涂3 個麥芽汁瓊脂平板，（28.0±0.5）℃恒溫箱中培養(yǎng)40～48 h，按照菌落總數(shù)計數(shù)法測定活菌數(shù)。

1.4.3 總蛋白酶活力的測定

取液體培養(yǎng)基，4 ℃、12 000×g離心10 min，而后取少量上清液，參照Hirano等[17]方法測定總蛋白酶活力。一個酶活力單位定義為在37 ℃每小時吸光度升高0.01為1 U。

1.4.4 紅曲霉發(fā)酵高溫豆粕發(fā)酵液的制備

將紅曲霉菌株孢子懸液接種于液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)72 h左右。接種于液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵數(shù)天后7 000×g離心15 min，取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，測定發(fā)酵液中可溶性多肽含量和分子質(zhì)量。

1.4.5 可溶性多肽含量的測定

可溶性多肽的含量以酸可溶性多肽計算，取1 mL發(fā)酵液加入1 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）溶液，以去除酸不溶性的蛋白質(zhì)和長鏈肽的沉淀，取上清液根據(jù)雙縮脲法[18]測定酸可溶性多肽的含量。

將恒質(zhì)量的酪蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.6 可溶性蛋白質(zhì)（多肽）分子質(zhì)量分布的測定

采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodiam dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）法對可溶性蛋白質(zhì)（多肽）分子質(zhì)量分布進(jìn)行測定，參考并修改Laemmli[19]和Sch?gger[20]的方法。

將處理后的發(fā)酵液于14 000×g離心10 min后測定可溶性蛋白分子質(zhì)量分布。

取1 mL發(fā)酵液加入1 mL 10%的TCA溶液，室溫放置30 min后5 000×g離心10 min，取上清液14 000×g離心10 min后測定可溶性多肽分子質(zhì)量分布。

1.5 紅曲霉菌株的篩選

1.5.1 紫外誘變條件的確定

調(diào)整孢子濃度為106CFU/mL。取孢子懸液5 mL置于15 W紫外線燈35 cm處，磁力攪拌條件下照射10～70 s，而后稀釋液涂布于麥芽汁瓊脂平板，于（28.0±0.5）℃恒溫避光培養(yǎng)48 h后記錄菌落數(shù)。以未經(jīng)紫外處理的孢子懸液稀釋涂布平板作為對照。

計算致死率，選擇致死率在80%左右的紫外照射時間作為最適誘變劑量。

1.5.2 初篩

將最適誘變劑量處理后的孢子懸液接種于液體培養(yǎng)基，按照基礎(chǔ)培養(yǎng)條件培養(yǎng)24 h后，稀釋涂布于麥芽汁瓊脂平板上，在（28.0±0.5）℃條件下培養(yǎng)48 h后，將各菌株點種于初篩培養(yǎng)基上，以未處理的原菌株作為對照。每12 h用卡尺測量每株菌的水解圈直徑和菌落直徑，將其比值（水解圈直徑與菌落直徑的比值，HC值）顯著大于對照的突變菌株轉(zhuǎn)接到麥芽汁瓊脂斜面上培養(yǎng)7 d，以備復(fù)篩使用。

1.5.3 復(fù)篩

將初篩菌株制成孢子濃度為107CFU/mL的孢子懸液，接種于液體培養(yǎng)基培養(yǎng)72 h左右。而后按照基礎(chǔ)發(fā)酵條件接種于復(fù)篩培養(yǎng)基，將培養(yǎng)數(shù)天后的液體培養(yǎng)基按照基礎(chǔ)發(fā)酵條件接種于液態(tài)培養(yǎng)基中，發(fā)酵數(shù)天后取發(fā)酵液7 000×g離心15 min后，取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，測定發(fā)酵液中可溶性多肽含量，將其多肽含量顯著高于原菌株的突變菌株定義為高產(chǎn)菌株。

1.5.4 遺傳穩(wěn)定性的測定

篩選出的突變菌株經(jīng)4～6 次復(fù)篩培養(yǎng)基傳代，測定培養(yǎng)96 h后發(fā)酵液中可溶性多肽含量的變化，比較其遺傳穩(wěn)定性。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

每個指標(biāo)測定重復(fù)3 次。并采用SPSS 17統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因子方差分析，結(jié)果以±s表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 加熱處理前后高溫豆粕中可溶性蛋白含量變化的比較

采用GB 5009.5-2010中的凱氏定氮法測定高溫豆粕中的粗蛋白、可溶性蛋白及加熱處理后可溶性蛋白含量。高溫豆粕中粗蛋白含量為（39.26±0.77）%，雖然含量很高，但可溶性蛋白的含量較少，僅為（8.70±0.09）%，占粗蛋白含量的22.16%左右，這為紅曲霉發(fā)酵豆粕產(chǎn)生更多可溶性蛋白提供了條件。加熱處理后的高溫豆粕中可溶性蛋白含量有所上升，達(dá)到（19.19±0.14）%，這是由于高溫高壓處理促使不溶性蛋白部分轉(zhuǎn)變成可溶性蛋白。

2.2 菌株的生長曲線

圖1 紅曲霉菌株生長曲線Fig.1 Growth curve of Monascus purpureus

由圖1可知，紅曲霉在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)48～72 h后達(dá)到對數(shù)生長末期，而后進(jìn)入穩(wěn)定期，此時活菌數(shù)為1.48×108CFU/mL（lg活菌數(shù)為8.32）。由于在對數(shù)生長末期時，菌體數(shù)量最多，而進(jìn)入穩(wěn)定期以后，菌體數(shù)量趨于穩(wěn)定，不再增加。因此在微生物實驗中，一般采用對數(shù)生長末期的菌懸液作為種子液接種到篩選培養(yǎng)基中[21]。與此同時，菌株的蛋白酶活力在0～72 h呈上升趨勢，而后又下降，在72 h達(dá)到2.18 U/mL，更有利于豆粕中蛋白質(zhì)的分解，因此采用培養(yǎng)72 h后的液體培養(yǎng)基作為種子接種到菌株的液態(tài)培養(yǎng)基上。

2.3 紅曲霉發(fā)酵高溫豆粕的研究

2.3.1 發(fā)酵對高溫豆粕中可溶性蛋白（多肽）分子質(zhì)量的影響

通過SDS-PAGE分析紅曲霉發(fā)酵高溫豆粕后可溶性蛋白和多肽分子質(zhì)量的變化，其結(jié)果如圖2所示。加熱處理后的高溫豆粕中，分子質(zhì)量大于43.0 kD的可溶性蛋白明顯減少，而分子質(zhì)量小于14.4 kD的可溶性蛋白有所增加，紅曲霉的發(fā)酵作用可使分子質(zhì)量在31.0～43.0 kD的可溶性蛋白徹底分解（圖2A中泳道3）。隨著菌株發(fā)酵時間的延長，發(fā)酵24、48 h時發(fā)酵液中分子質(zhì)量小于31.0 kD的可溶性蛋白明顯減少（圖2A中泳道3和4），而72、96 h時又明顯增加（圖2A中泳道5和6）。這是因為0～72 h內(nèi)紅曲霉處于生長階段，可溶性蛋白在紅曲霉分泌的蛋白酶作用下，分解成小分子的蛋白質(zhì)用于自身生長代謝。而后，蛋白酶作用于不溶性的蛋白質(zhì)，分解產(chǎn)生的可溶性蛋白質(zhì)含量增加，并且大于自身生長代謝所消耗的量，產(chǎn)生大量的積累。

在這個過程中可溶性多肽的含量也在不斷地積累，如圖2B所示，紅曲霉發(fā)酵高溫豆粕可大量產(chǎn)生分子質(zhì)量7.8～20.1 kD的可溶性多肽，且大部分集中在14.4 kD左右。在發(fā)酵120 h時分子質(zhì)量為14.4～20.1 kD的可溶性多肽明顯減少（圖2B中泳道6），這說明大分子的多肽在不斷地分解成小分子的多肽。

圖2 紅曲霉發(fā)酵高溫豆粕產(chǎn)可溶性蛋白（多肽）的電泳圖Fig.2 Electrophoresis patterns of soluble protein (polypeptide) from Monascus purpureus fermented high-temperature soybean meal

2.3.2 發(fā)酵對高溫豆粕中可溶性多肽含量的影響

圖3 紅曲霉發(fā)酵高溫豆粕對可溶性多肽含量的影響Fig.3 Effect of fermentation time on the content of soluble protein in high-temperature soybean meal fermented by Monascus purpureus

圖3為對2.3.1節(jié)中可溶性多肽（圖2B）的定量分析。原豆粕中可溶性多肽含量為（3.73±0.03） mg/mL，而發(fā)酵24 h時達(dá)到（9.90±0.20） mg/mL，其可溶性多肽含量顯著增加。隨著發(fā)酵時間的延長，發(fā)酵液中可溶性多肽含量呈先下降而后上升的趨勢，在48～120 h的發(fā)酵過程中，可溶性多肽含量不斷地上升，這與圖2B顯示的結(jié)果一致。當(dāng)發(fā)酵48 h時達(dá)到最低（7.46±0.05） mg/mL，之后120 h時上升至（13.41±0.20） mg/mL，是原豆粕的3.60 倍，這說明紅曲霉發(fā)酵高溫豆粕能顯著地提高可溶性多肽的含量。

2.4 紫外誘變劑量的選擇

采用紫外線作為誘變劑，目的是增加紅曲霉菌株突變率，提高其產(chǎn)蛋白酶的變異幅度。紫外照射時間與致死率的關(guān)系見圖4。在該條件下輻照10 s，紅曲霉菌株致死率達(dá)到（22.97±12.58）%，隨著輻照時間的不斷延長，致死率逐漸增加，當(dāng)照射時間為70 s時已達(dá)到（95.14±0.53）%。通常隨著輻照劑量的增加，微生物的突變率升高，但達(dá)到一定程度后，輻照劑量再增加突變率反而下降，研究結(jié)果證明，在輻照劑量偏低、致死率偏低的情況下，紫外線等誘變劑引起的正變率高，更容易分離到高產(chǎn)菌株[22]，因此本實驗采用致死率在80%左右的誘變劑量作為誘變劑的最適劑量。即在15 W紫外線燈35 cm處，攪拌照射50 s為最適劑量，此時致死率為（82.70±2.20）%。

圖4 紫外線誘變紅曲霉菌株結(jié)果Fig.4 Mutagenesis of Monascus purpureus by ultraviolet light

2.5 突變菌株篩選結(jié)果

2.5.1 初篩結(jié)果

將最適誘變劑量處理后的菌株點種于初篩培養(yǎng)基上，菌株產(chǎn)生的蛋白酶可水解培養(yǎng)基中酪蛋白，由于HC值與蛋白酶活力之間成正相關(guān)[23]，以產(chǎn)生的水解圈與菌落直徑的比值（HC值）來衡量菌株分解蛋白質(zhì)的能力，即是蛋白酶活力的比較。菌株在初篩培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h時才能準(zhǔn)確測定水解圈與菌落的直徑，并且隨著培養(yǎng)時間的延長，菌落不再生長或是出現(xiàn)形態(tài)上的變化，不再適合繼續(xù)培養(yǎng)和測定。因此，實驗的測定結(jié)果采取培養(yǎng)48～144 h內(nèi)、每12 h測定的水解圈與菌落直徑的比值表示，初篩菌株HC值測定結(jié)果如表1所示。

表1 初篩菌株HC值Table 1 HC values of mutant strains in initial screening experiments

如表1所示，各菌株隨著培養(yǎng)時間的延長，HC值主要呈不斷減小的趨勢。其中0310717菌株的HC值在培養(yǎng)48～144 h的測量時間范圍內(nèi)均顯著高于原菌株的HC值。而在培養(yǎng)72～132 h內(nèi)，除72 h時0409300、0501100、0501132菌株和84 h時0200104菌株的HC值外，其他時間的突變菌株的HC值均顯著高于同時間的原菌株HC值，并且96 h時0310717菌株的HC值是同時間的原菌株1.25 倍。這說明誘變后得到的突變菌株在初篩培養(yǎng)基上培養(yǎng)72～132 h內(nèi)產(chǎn)生的蛋白酶活力高于原菌株。

2.5.2 復(fù)篩結(jié)果

表2 各菌株發(fā)酵后樣品中可溶性多肽含量Table 2 Content of soluble polypeptide in the sample subjected to fermentation by each strain mg/mL

將初篩得到的紅曲霉突變菌株接種到復(fù)篩培養(yǎng)基中發(fā)酵120 h，各發(fā)酵液中可溶性多肽含量測定結(jié)果如表2所示。隨著發(fā)酵時間的延長，可溶性多肽的含量呈現(xiàn)先下降的趨勢，在發(fā)酵48 h時到達(dá)最低點，其中0501100菌株在發(fā)酵48 h時可溶性多肽含量最低，僅為（5.39±0.45） mg/mL，但仍是原豆粕的1.45 倍。而后可溶性多肽的含量又逐漸升高，在發(fā)酵96 h時部分菌株發(fā)酵液中可溶性多肽含量達(dá)到最高點，之后又再次下降；而另一部分的菌株仍然繼續(xù)上升。這說明各菌株之間產(chǎn)生蛋白酶的時間和酶的活力不同，導(dǎo)致分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生多肽含量的不同，并且達(dá)到最高含量的時間也是不同的。各菌株發(fā)酵液中可溶性多肽含量最高的是0501100菌株發(fā)酵96 h時，為（17.20±0.18） mg/mL，顯著高于其他菌株（P＜0.05），是同等發(fā)酵條件下原菌株發(fā)酵樣品的1.47 倍，是原豆粕的4.61 倍。因此選用0501100菌株進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性實驗。

2.6 突變菌株遺傳穩(wěn)定性

表3 0501100菌株各代發(fā)酵96 h樣品中可溶性多肽含量Table 3 Content of soluble polypeptide in the sample fermented by each generation of mutant strain 0501100 for 96 h

復(fù)篩得到的0501100菌株經(jīng)過連續(xù)5 代接種到復(fù)篩培養(yǎng)基上發(fā)酵培養(yǎng)后，其發(fā)酵樣品中可溶性多肽含量測定結(jié)果如表3所示。該菌株連續(xù)5 代發(fā)酵樣品中可溶性多肽含量變化不顯著（P＞0.05），因此該菌株有較好的遺傳穩(wěn)定性。

3 結(jié) 論

采用紅曲霉液態(tài)發(fā)酵高溫豆粕，將其中變性蛋白轉(zhuǎn)化成了可溶性蛋白，增加了高溫豆粕中蛋白質(zhì)的利用率，并且可溶性多肽的含量顯著增加，發(fā)酵120 h時可到達(dá)（13.41±0.20） mg/mL，是原豆粕的3.60 倍。這為紅曲霉發(fā)酵高溫豆粕生產(chǎn)可溶性多肽提供了依據(jù)。

在該發(fā)酵條件下，篩選出一株高效分解高溫豆粕中變性蛋白的0501100菌株，同時該菌株在發(fā)酵96 h后產(chǎn)生的可溶性多肽含量達(dá)到（17.20±0.18） mg/mL，是原菌株同等發(fā)酵時間條件下可溶性多肽的1.47 倍，是原豆粕的4.61 倍?？s短了發(fā)酵時間并且有較好的遺傳穩(wěn)定性。

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Production of Soluble Polypeptide from Fermented High-Temperature Soybean Meal by Monascus purpureus

SHI Lin1, YIN Yuan1, WANG Shuai1, QI Hui1, NI Chunlei1, CHENG Jianjun1,*, ZHU Xiuqing2
(1. College of Food Science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China; 2. Soybean Technology Research and Development Center in Heilongjiang Province, Harbin 150086, China)

The molecular weight and content of soluble polypeptide in high-t emperature soybean meal subjected to Monascus purpureus fermentation were determined to ascertain whether denatured protein could be decomposed during the fermentation process. The strain was mutagenized with ultraviolet light. The mutant strains were inoculated into hightemperature soybean meal and scree ne d twice for the highest yield of soluble polypeptides. The results showed that proteins were decomposed in high-temperature soybean meal during Monascus purpureus fermentation, producing soluble polypeptides with molecular weight of 7.8-20.1 kD. The yield of soluble polypeptide from fermented soybean meal after 120 h of fermentation was (13.41 ± 0.20) mg/mL, which was 3.60 times higher than that from the original soybean meal. Monascus purpureus was irradiated by a 15 W UV lamp at a distance of 35 cm with stirring for 50 s, leading to a death rate of (82.70 ± 2.20)%. The mutant 0501100 could produce relatively high yield of soluble polypeptide under these conditions. The yield of soluble polypeptide from soybean meal fermented by the mutant strain 0501100 for 96 h was (17.20 ± 0.18) mg/mL, which exhibited a 1.47- and 4.61-fold increase when compared with that obtained from the original strain under the same fermentation conditions and the original soybean, respectively. Moreover, the fermentation time was shortened and the mutant strain had a good genetic stability.

Monascus purpureus; high-temperature soybean meal; soluble polypeptide

TS201.1

A

1002-6630（2015）19-0137-06

10.7506/spkx1002- 6630-201519024

2014-11-22

“十二五”國家科技支撐計劃項目（2014BA22B00）；黑龍江省應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)計劃項目（GC13B208）

石琳（1989-），女，碩士研究生，研究方向為糧食油脂及植物蛋白工程。E-mail：sl89115@hotmail.com

*通信作者：程建軍（1969-），男，教授，博士，研究方向為農(nóng)產(chǎn)品加工。E-mail：cheng577@163.com