劉浩強(qiáng)，李鴻筠，向可海，冉　春，胡軍華，姚廷山，向　琴，楊　華，陳洪明

（1.西南大學(xué)柑桔研究所/中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑桔研究所，重慶400712；2.國(guó)家柑橘工程技術(shù)研究中心，重慶400712；3.重慶開(kāi)縣南門鎮(zhèn)人民政府，重慶405403；4.重慶萬(wàn)州三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，重慶405403；5.遼寧省果樹科學(xué)研究所，遼寧營(yíng)口115009）

生物源保鮮劑枯草芽孢桿菌對(duì)錦橙貯藏病菌敏感性和保鮮效果

劉浩強(qiáng)1，2，李鴻筠1，向可海3，冉春1，胡軍華1，姚廷山1，向琴4，楊華5，陳洪明1

（1.西南大學(xué)柑桔研究所/中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑桔研究所，重慶400712；2.國(guó)家柑橘工程技術(shù)研究中心，重慶400712；3.重慶開(kāi)縣南門鎮(zhèn)人民政府，重慶405403；4.重慶萬(wàn)州三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，重慶405403；5.遼寧省果樹科學(xué)研究所，遼寧營(yíng)口115009）

研究了生物源保鮮劑枯草芽孢桿菌對(duì)錦橙采后主要病菌的毒性及對(duì)錦橙果實(shí)的貯藏保鮮效果。結(jié)果表明：枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)青霉菌和綠霉病的毒性較大，EC50值分別為7.4970μg/mL和8.8832μg/mL。保鮮結(jié)果表明：枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液對(duì)青霉病、綠霉病、炭疽病等總病害均有較好的防治效果，比對(duì)照藥劑250g/L咪鮮胺乳油667倍液效果好。在15～45d時(shí)，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑各處理對(duì)錦橙的失重率沒(méi)有影響；貯藏到60d后，對(duì)失重率有一定的影響，枯草芽孢桿菌2000倍液對(duì)果實(shí)品質(zhì)的影響和清水對(duì)照比較沒(méi)有差異性，并且對(duì)外觀色澤和口感沒(méi)有負(fù)面影響?？偟膩?lái)說(shuō)：枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液對(duì)錦橙儲(chǔ)藏保鮮效果較好。

生物源保鮮劑，敏感性，錦橙，致病菌，保鮮效果

柑橘是世界上最重要的水果之一，全球有多個(gè)國(guó)家和地區(qū)種植柑橘，但主要分布在南北緯度40°區(qū)域內(nèi)具有適宜土壤和氣候條件的熱帶和亞熱帶地區(qū)。在我國(guó)南方，柑橘是最廣泛種植的水果品種之一。近年柑橘產(chǎn)業(yè)發(fā)展勢(shì)頭迅猛，產(chǎn)量顯著提高，已經(jīng)成為柑橘主產(chǎn)區(qū)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的支柱產(chǎn)業(yè)之一[1-3]，為促進(jìn)農(nóng)村經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展、有效改善生態(tài)環(huán)境做出了積極貢獻(xiàn)，尤其對(duì)我國(guó)三峽庫(kù)區(qū)生態(tài)建設(shè)起到了不可磨滅的作用。但柑橘果實(shí)在運(yùn)輸、貯藏過(guò)程中容易受到青霉、綠霉和炭疽菌等傳染性病害的侵染而造成腐爛損失達(dá)10%～30%，嚴(yán)重時(shí)高達(dá)50%以上[4-7]，通過(guò)柑橘采后貯藏保鮮技術(shù)來(lái)延長(zhǎng)果品供應(yīng)的時(shí)間，增加銷售期，錯(cuò)開(kāi)銷售高峰，可以更好地減輕集中上市所帶來(lái)的壓力，提高農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)收益[8-10]。

目前控制柑橘采后病害的主要手段是使用化學(xué)保鮮劑，但在我國(guó)廣大柑橘產(chǎn)區(qū)，長(zhǎng)期單一使用一種單劑，并且連續(xù)多年使用，病菌已經(jīng)對(duì)其產(chǎn)生了抗藥性，防治效果大幅下降，并且存在農(nóng)殘問(wèn)題，對(duì)人類健康有潛在危險(xiǎn)，現(xiàn)在陸續(xù)已被禁止使用，如雙胍鹽、多菌靈等保鮮劑[11]。為了減輕柑橘在貯藏運(yùn)輸過(guò)程中由病害造成的損失，迫切需要研究者們不斷尋求一些低毒、高效以及低殘留的生物源防腐保鮮新藥劑，以取代高毒的、已有抗藥性的化學(xué)保鮮劑[11-17]。本實(shí)驗(yàn)選用1種低毒高效的生物源保鮮劑對(duì)柑桔不同貯藏病菌的敏感性以及保鮮效果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，進(jìn)而為其實(shí)際應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

供試錦橙品種錦橙采摘自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院錦橙研究所實(shí)驗(yàn)果園；供試菌種青霉菌（Penicillium italicumWehmer）、綠霉菌（Penicilliumdigitatum Saccardo）、炭疽桿菌（Colletotrichum gloeosporiorides Penz）、酸腐?。∣ospora citriaurantii ex Persoon）；供試混配保鮮劑1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑（WP）（2000倍液、3000倍液和4000倍液），德強(qiáng)生物股份有限公司；對(duì)照藥劑250g/L咪鮮胺乳油Prochloraz667倍液（使用劑量375μg/mL），江蘇省揚(yáng)州市蘇靈農(nóng)藥化工有限公司；無(wú)水乙醇、氫氧化鈉、氯化鋇、葸酮、L-甲硫氨酸、抗壞血酸、鄰苯二甲酸氫鉀、四氮唑藍(lán)、冰乙酸（均為分析純） 上海試劑廠。

FA2004電子天平上海方瑞儀器有限公司；UV1800PC分光光度計(jì)上海奧析儀器有限公司。PYX-DHS隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠；GL-10高速冷凍離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠；S212攪拌器上海予華儀器；MLR-351H智能人工氣候箱日本三洋公司；DK-S26電熱恒溫水浴鍋上海一科儀器公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1室內(nèi)毒力測(cè)定方法采用菌絲生長(zhǎng)速率測(cè)定法[18-19]。在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將各藥劑分別設(shè)置為5個(gè)質(zhì)量濃度梯度，先將保鮮劑分別制成有效成分含量為1、5、10、50、100μg/mL（其中炭疽桿菌酸腐病菌濃度分別為5、10、50、100、200μg/mL）的系列質(zhì)量濃度馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基[potato dextrose agar（medium），PDA]平面，每個(gè)處理的保鮮劑的每個(gè)質(zhì)量濃度均設(shè)3次重復(fù)。另設(shè)加入無(wú)菌水的PDA培養(yǎng)基平板作對(duì)照。然后用直徑6mm的打孔器在病原菌菌落邊緣切取生長(zhǎng)力一致的菌塊，分別移植于各含藥PDA培養(yǎng)基平板中央，然后置于（26±0.5）℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)一定時(shí)間后，用游標(biāo)卡尺測(cè)量菌落直徑（以十字交叉法測(cè)量），由菌落直徑平均值計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。用質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)值（X）與抑制百分率的機(jī)率值（Y）進(jìn)行直線回歸分析，檢驗(yàn)相關(guān)系數(shù)的顯著性，并求出直線回歸方程Y＝a＋bX。根據(jù)回歸方程求出藥劑的半數(shù)有效量（median effective concentration，EC50）值及相關(guān)系數(shù)R。比較1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)幾種柑桔貯藏病原菌的毒力大小。

1.2.2貯藏保鮮效果的研究實(shí)驗(yàn)在重慶市北碚區(qū)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑桔研究所自然通風(fēng)貯藏庫(kù)內(nèi)進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行消毒。實(shí)驗(yàn)錦橙轉(zhuǎn)熟期間尚未噴過(guò)任何殺菌劑。庫(kù)房?jī)?nèi)的溫度為自然室溫，適當(dāng)利用開(kāi)關(guān)通風(fēng)窗的自然換氣方法來(lái)調(diào)節(jié)室溫。各處理的貯藏條件保持一致。實(shí)驗(yàn)期間，貯藏庫(kù)內(nèi)的平均溫度為15℃，極端最高溫度為22℃，極端最低溫度為11.0℃，平均相對(duì)濕度為81.3%。每處理4次重復(fù)（小區(qū)），每小區(qū)用果100個(gè)，每處理共用果400個(gè)，使用浸漬法。將不同處理分別完全浸漬于該藥液1min撈起晾干，對(duì)照用清水浸漬。處理完畢，待藥液瀝干后將各個(gè)小區(qū)的果實(shí)裝進(jìn)一個(gè)塑料果箱，置于通風(fēng)貯藏庫(kù)內(nèi)的鐵架上，完全隨機(jī)排列，2～3d后用聚乙烯薄膜果袋單果套袋，同時(shí)記錄病果，統(tǒng)計(jì)時(shí)加以校正。

處理后15d進(jìn)行第1次調(diào)查，以后每15d調(diào)查1次，前后共調(diào)查4次，即貯藏15、30、45、60d。調(diào)查時(shí)各處理果實(shí)自上而下逐果翻檢，將病果取出，然后果蒂朝上放好。每次每小區(qū)分別調(diào)查記載錦橙青霉病、綠霉病、炭疽病、酸腐病和其他病果數(shù)，并將病果取出，然后分別計(jì)算病果率和保鮮效果。同時(shí)肉眼觀察每個(gè)處理的果實(shí)外觀，最后對(duì)各處理已編號(hào)的果實(shí)進(jìn)行單果稱重，并從已編號(hào)的果實(shí)中選出10個(gè)好果的前后單果重來(lái)計(jì)算失重率。

1.2.3失重的稱量處理前每個(gè)重復(fù)稱10kg果，并統(tǒng)計(jì)個(gè)數(shù)，處理前從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)取出20個(gè)果實(shí)進(jìn)行編號(hào)，分別用電子天平稱量單果重量。同時(shí)肉眼觀察每個(gè)處理的處理后果實(shí)外觀，對(duì)各處理已編號(hào)的果實(shí)進(jìn)行單果稱重，并從已編號(hào)的果實(shí)中選出10個(gè)好果的前后單果重來(lái)計(jì)算失重率（以平均值為準(zhǔn)）。

1.2.4枯草芽孢桿菌可濕性粉劑處理后各生理指標(biāo)變化可溶性固型物：用手持折光儀進(jìn)行測(cè)定；總糖：用葸酮比色法測(cè)定[20]；有機(jī)酸含量：酸堿滴定法測(cè)定[20]；維生素含量：依照GB/T 8210-2011《錦橙鮮果檢驗(yàn)方法》中的2，6-二氯酚靛酚法測(cè)定[20]。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，在實(shí)驗(yàn)后15、30、45、60d分別抽樣測(cè)定。

1.2.5數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2000軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，應(yīng)用DPS軟件進(jìn)行方差分析[21]。顯著性測(cè)定采用鄧肯氏新復(fù)極差（DMRT）法。

2　結(jié)果與分析

2.1枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙貯藏病菌的敏感性

經(jīng)DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分析得到濃度對(duì)數(shù)值（X）與抑制百分率值（Y）的毒力回歸方程、EC50值、相關(guān)系數(shù)，如表1所示。結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌WP對(duì)青霉菌、綠霉菌、炭疽病菌和酸腐病菌都有一定的抑菌效果，尤其對(duì)青霉菌的抑制效果最好，EC50值為7.4970μg/mL，對(duì)綠霉菌效果次之，EC50值為8.8832μg/mL，對(duì)酸腐病菌的抑制效果最差，EC50值為57.5406μg/mL。

表1　1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙貯藏病菌的毒力回歸分析Table.1　Regression analysis for the toxicity of preservation effect of 100 billion/brevibacterium WP on Penicillium italicum Wehmer

2.2枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙貯藏保鮮的整體效果

通過(guò)在自然通風(fēng)貯藏庫(kù)內(nèi)用1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙貯藏期間病害的防治效果實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000～4000倍液對(duì)錦橙防腐保鮮均有一定的效果，見(jiàn)表2。貯藏15d時(shí)各處理的防治效果均較好，在63.48%～93.50%之間，此后各處理的防治效果均隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降。貯藏30d時(shí)除枯草芽孢桿菌可濕性粉劑4000倍液為62.06%以外，其余各處理防治效果均在70%以上。然而，貯藏45d以后除枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液保鮮效果在70%以上，3000倍液和4000倍液處理均在60%以下。根據(jù)方差分析結(jié)果表明，貯藏15d時(shí)，各個(gè)處理間不存在顯著性差異；30d時(shí)，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液顯著優(yōu)于其他處理；貯藏到45d和60d時(shí)，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液極顯著優(yōu)于3000倍液和4000倍液；枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液與對(duì)照藥劑相比較，效果好于對(duì)照藥劑，綜上結(jié)果，對(duì)錦橙的貯藏保鮮整體效果，以枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液最佳，延長(zhǎng)貯藏防腐保鮮的時(shí)間最久。

表2　1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙貯藏保鮮總病害的防治效果（%）Table.2　The control effect of preservation effect of 100 billion/brevibacterium WP against citrus storage total diseases（%）

表3　1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙青、綠霉病的防治效果（%）Table.3　The control effect of preservation effect of 100 billion/brevibacterium WP against Peniciuuium and green mold（%）

2.3枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)青霉病、綠霉病的防治效果

結(jié)果見(jiàn)表3。通過(guò)在貯藏庫(kù)內(nèi)用1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙貯藏期間進(jìn)行青霉病、綠霉病防治貯藏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙貯藏期間發(fā)生的青霉病、綠霉病均有較好的防治效果?？莶菅挎邨U菌可濕性粉劑2000～4000倍液在15～30d均具有較好的防治效果，效果在68.67%以上，高的可達(dá)100%；45d后只枯草芽孢桿菌可濕性粉劑4000倍液表現(xiàn)略差些（為41.67%），其余各處理的防治效果均較為理想，在68.87%～81.14%之間；貯藏到60d后，只有對(duì)照藥劑250g/L咪鮮胺667倍液防治效果在70%以上，其余各處理效果較差（60%以下），尤其是枯草芽孢桿菌可濕性粉劑4000倍液僅11.73%。但枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液對(duì)青霉病、綠霉病均有一定的防治效果，雖然防治效果隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降，但下降程度最慢，結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙青霉病、綠霉病的各個(gè)處理中，防治效果最好的是枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液，防治效果最差的為4000倍液。

2.4枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)炭疽病的防治效果

結(jié)果見(jiàn)表4。通過(guò)在貯藏庫(kù)內(nèi)用1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙貯藏期間進(jìn)行炭疽病防治貯藏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)貯藏期間發(fā)生的炭疽病具有一定的防治效果。貯藏15d時(shí)枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液和3000倍液效果在70%以上，特別是枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液在貯藏15～60d時(shí)，效果均在69%以上，總體好于對(duì)照藥劑250g/L咪鮮胺667×（375μg/mL）。但枯草芽孢桿菌可濕性粉劑3000～4000倍液處理效果相對(duì)較差，貯藏30d以后均在50%以下。

表4　1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙炭疽病的防治效果（%）Table.4　The control effect of preservation effect of 100 billion/brevibacterium WP against anthracnose（%）

2.5枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)酸腐病的防治效果

結(jié)果見(jiàn)表5。通過(guò)在貯藏庫(kù)內(nèi)用1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙貯藏期間進(jìn)行酸腐病防治貯藏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液，在貯藏15～30d時(shí)，效果較好，達(dá)70%以上；45d以后，效果在50%以下。然而，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑3000～4000倍液，在30d以后，防治效果在30%以下，防治效果較差。

表5　1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙酸腐病的防治效果（%）Table.5　The control effect of preservation effect of 100 billion/brevibacterium WP against sour disease（%）

2.6枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙失重率的影響

結(jié)果見(jiàn)表6。據(jù)浸藥處理前和貯藏不同時(shí)間后各次的調(diào)查結(jié)果，藥后15、30、45d，不同藥劑處理后錦橙的失重率各有不同，與清水對(duì)照比較，不存在顯著性差異；貯藏到60d時(shí)，枯草芽孢桿菌3000倍液和4000倍液的失重率在5%的水平上顯著高于清水對(duì)照。結(jié)果表明貯藏15～45d，3種倍數(shù)處理對(duì)錦橙的失重率沒(méi)有影響；貯藏到60d后，枯草芽孢桿菌3000倍液和4000倍液對(duì)錦橙果實(shí)的失重率有一定的影響。

表6　1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙失重率的影響（%）Table.6　The effect of the 100 billion/brevibacterium WP on dehydration rate of the Glorious orange（%）

2.7枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙果實(shí)外觀色澤和口感的影響

藥劑處理后貯藏到60d后錦橙果實(shí)外觀色澤有一定變化，各個(gè)處理均由橙黃色逐漸變成橙紅色，果實(shí)飽滿，與清水對(duì)照無(wú)明顯差異。4個(gè)處理后果蒂多數(shù)保持綠色，清水對(duì)照果蒂則已經(jīng)枯萎?？诟薪Y(jié)果：枯草芽孢桿菌可濕性粉劑處理的和清水對(duì)照比較，風(fēng)味基本一致，屬正常，咪鮮胺略有枯水，風(fēng)味有所下降。

2.8枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)錦橙果實(shí)品質(zhì)的影響

枯草芽孢桿菌可濕性粉劑處理后對(duì)錦橙果實(shí)品質(zhì)的影響，見(jiàn)表7。結(jié)果表明：錦橙果實(shí)的可溶性固形物在15～30d均略有上升，4個(gè)藥劑處理與清水對(duì)照之間不存在顯著性差異，貯藏到60d時(shí)下降，只枯草芽孢桿菌可濕性粉劑4000倍液顯著低于清水對(duì)照。4個(gè)藥劑處理后總糖、有機(jī)酸和維生素C的含量均隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降，下降速度較為緩慢，15～45d時(shí)4個(gè)處理與清水對(duì)照相比，總糖含量無(wú)差異顯著性，60d時(shí)枯草芽孢桿菌可濕性粉劑4000倍液顯著低于清水對(duì)照；藥劑處理后的有機(jī)酸均在15～30d時(shí)與清水對(duì)照無(wú)差異，45d時(shí)，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑3000倍液顯著低于清水對(duì)照，60d時(shí)，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑3000～4000倍液處理的顯著低于清水對(duì)照；藥劑處理后的維生素C含量，15～30d時(shí)4個(gè)處理與清水對(duì)照相比，維生素C含量無(wú)差異顯著性，45d時(shí)，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑4000倍液顯著低于清水對(duì)照，60d時(shí)，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑3000～4000倍液處理顯著低于清水對(duì)照，根據(jù)以上結(jié)果枯草芽孢桿菌2000倍液處理對(duì)錦橙的生理指標(biāo)和清水對(duì)照相比，幾乎沒(méi)有影響，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑3000～4000倍液對(duì)錦橙果實(shí)的品質(zhì)有一定的影響。

表7　1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑劑處理后對(duì)錦橙生理指標(biāo)的影響Table.7　Physiological indexes influence of the 100 billion/brevibacterium WP of preservatives on Glorious orange

3　討論

柑橘果實(shí)在貯藏運(yùn)輸期間容易發(fā)生各種儲(chǔ)藏病害[7]。為了減輕貯藏病害所造成的損失，采果后需用保鮮劑處理以防腐保鮮，生產(chǎn)上常用多菌靈、甲基硫菌靈等防治田間病害和貯藏病害，病菌對(duì)這些常規(guī)殺菌劑已經(jīng)產(chǎn)生一定程度的抗藥性，因此需篩選低毒的化學(xué)保鮮劑或者生物源保鮮劑用來(lái)防治貯藏病害。生物源保鮮劑作為一種新型保鮮劑現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于柑桔儲(chǔ)藏保鮮，生物源保鮮劑枯草芽孢桿菌菌體在生長(zhǎng)過(guò)程中可產(chǎn)生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)對(duì)致病菌有明顯的抑制作用，并且枯草芽孢桿菌菌體自身合成α-淀粉劑酶、蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶等酶類，與果實(shí)體內(nèi)的消化酶類一同發(fā)揮作用，低毒、高效、環(huán)境相溶性好，在本實(shí)驗(yàn)中取得了較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

保鮮劑對(duì)柑橘貯藏病害的保鮮效果不能單一從某一方面來(lái)評(píng)價(jià)，保鮮效果是保鮮劑、果實(shí)和環(huán)境三者綜合作用的結(jié)果，應(yīng)該從貯藏保鮮效果、外觀色澤、口感、生理生化營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)等多方面來(lái)評(píng)價(jià)。水分是影響果實(shí)新鮮度、脆度和口感的關(guān)鍵因子，但果實(shí)采后水分容易散失。果實(shí)在貯藏過(guò)程中，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)柑橘各個(gè)品種的失重率逐漸增加，藥劑處理雖不會(huì)導(dǎo)致失重率增加，但也不會(huì)降低果實(shí)的失重率，因此常溫貯藏時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免造成果實(shí)失重過(guò)多、果皮皺縮，風(fēng)味變淡而失去商品經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

判斷果實(shí)營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)，主要包含可溶性固形物、總糖、有機(jī)酸、維生素C等指標(biāo)[22-25]，貯藏過(guò)程中應(yīng)注意庫(kù)房通風(fēng)透氣。最好是晴天采果，采果時(shí)應(yīng)注重采果質(zhì)量，輕拿輕放，采果前剪除手指甲，并戴手套，以免對(duì)果皮造成機(jī)械傷口，影響貯藏防腐保鮮效果[26]。本研究結(jié)果中上述指標(biāo)與清水對(duì)照無(wú)差異，表明枯草芽孢桿菌處理對(duì)錦橙果實(shí)沒(méi)有負(fù)面影響。

4　結(jié)論

通過(guò)室內(nèi)保鮮研究，結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)青霉菌和綠霉病毒性最大，EC50值分別為7.4970μg/mL和8.8832μg/mL；對(duì)酸腐爛病的毒性最小，半數(shù)有效質(zhì)量濃度EC50值為57.5406μg/mL。根據(jù)保鮮效果來(lái)看：1×1011活芽孢/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液對(duì)青霉病、綠霉病、炭疽病等總病害均有較好的保鮮效果，60d對(duì)總病害的保鮮效果在70%以上，比對(duì)照藥劑250g/L咪鮮胺乳油667倍液效果好?？莶菅挎邨U菌可濕性粉劑各處理對(duì)錦橙的失重率沒(méi)有影響，只隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，失重率均逐漸增加，貯藏到60d后各處理有一定差異?？莶菅挎邨U菌可濕性粉劑處理的和清水對(duì)照比較，風(fēng)味基本一致，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑處理對(duì)果蒂保持綠色有一定效果，對(duì)錦橙果實(shí)的內(nèi)在品質(zhì)、外觀色澤和口感沒(méi)有負(fù)面影響。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果枯草芽孢桿菌可濕性粉劑2000倍液可在生產(chǎn)上大量使用。

[1]孔文斌，黃明，熊偉，等.2013/2014產(chǎn)季重慶柑桔產(chǎn)銷形勢(shì)分析與對(duì)策建議[J].中國(guó)果業(yè)信息，2004，31（1）：30-35.

[2]王川.中國(guó)柑橘生產(chǎn)與消費(fèi)現(xiàn)狀分析[J].經(jīng)濟(jì)分析，2006，21（1）：8-12.

[3]葉興乾.柑橘加工與綜合利用[M].北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，2005：l-l0.

[4]鄧雨艷，曾凱芳.柑橘果實(shí)采后侵染性病害防治技術(shù)研究進(jìn)展[J].食品科技，2008（4）：211-214.

[5]李俊凱，易金蘭，郭敦成.多菌靈有機(jī)酸鹽防治柑橘貯藏期病害的初步研究[J].湖北農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000（4）：316-318.

[6]李鴻筠，姚廷山，劉浩強(qiáng)，等.25%嘧菌酯懸浮劑對(duì)柑橘病害防治實(shí)驗(yàn)[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2006，27（8）：27-30.

[7]伯勛.臍橙在常溫下的保鮮效果[J].廣西園藝，2000，10（2）：13-15.

[8]高海生，梁建蘭，柴菊華.果蔬貯藏保鮮產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀、研究進(jìn)展與科技支持[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2008（9）：118-123.

[9]朱偉生，黃宏英，黃同陵，等.南方果樹病蟲害防治手冊(cè)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1998：22-29.

[10]Zhang JX，Timmer LW.Preharvest application of fungicides for postharvest disease control on early season tangerine hybrids in Florida[J].Crop Protection，2007，26（7）：886-893.

[11]王華，劉俊軒，馬亞琴.哈姆林橙汁在貯藏過(guò)程中的理化指標(biāo)及色澤變化[J].食品科學(xué)，2010，33（24）：321-324.

[12]孫志高，張萌萌，蔣國(guó)玲，等.柑橘主要組織SOD分布及其在生長(zhǎng)中晚期活眭變化[J].食品科學(xué)，2012，33（21）：47-52.

[13]李小芳，馬金滿，馮小強(qiáng)，等.羧甲基硫脲殼聚糖的結(jié)構(gòu)表征及抑菌活性研究[J].食品科學(xué)，2012，33（1）：64-67.

[14]劉夢(mèng)茵，劉芳，周濤，等.烏梅提取物對(duì)蠟狀芽孢桿菌的抑菌機(jī)理研究[J].食品科學(xué)，2010，33（1）：103-105.

[15]彭永宏.果實(shí)采后操作技術(shù)研究概述[J].果樹科學(xué)，1999，16（4）：393-300.

[16]ECKERT W，OGAWA J M.The chemical control of postharvest diseases：deciduous fruits，berries，vegetables and root/tuber crops[J].Annual Review of Phytopathology，1988，26（2）：433-469.

[17]龐學(xué)群，張昭其，黃雪梅.果蔬采后病害的生物防治[J].熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào)，2002，10（4）：186-192.

[18]陳年春.農(nóng)藥生物測(cè)定技術(shù)[M].北京：北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1991：161-162.

[19]周德慶.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程[M].北京：高等教育出版社，2006：196-199，372.

[20]李合生.植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)[M].北京：高等教育出版社，2000.

[21]唐啟義，馮明光.實(shí)用統(tǒng)計(jì)分析及其DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)[M].北京：科學(xué)出版社，2002.

[22]SUN Y P，JOHNSON E R.Analysis of joint action of insectioncidesagainsthousefiles[J].JournalofEconomic Entomology，1960，53（5）：887-892.

[23]KOLLER W，WILCOX W F，PARKER D M.Sensitivity of Venturia inaequalis populations to anilinopyrimidine fungicides and their contribution to scab management in new york[J].Plant Disease，2005，89（3）：357-365.

[24]AJITH T A，JANARDHANAN K K.Cytotoxic and antitumor activities of a polypore macrofungus，Phellinus rimosus（Berk）Pilat[J].Journal of Ethnopharmacol，2003，84（2）：157-162.

[25]IKEKAWA T，NAKANISHI M，UEHARA N，et al.Antitumor action of some Basidiomycetes，especially Phellinus linteus[J]. Gann，1968，59（9）：155-157.

[26]胡亮.預(yù)貯對(duì)柑桔貯藏保鮮效果影響的研究[J].中國(guó)南方果樹，2011，40（1）：30-31.

Biological preservative of 100 billion/brevibacterium wp on glorious orange storage pathogens sensitivity and preservation effect of fruit storage

LIU Hao-qiang1，2，LI Hong-jun1，XIANG Ke-hai3，RAN Chun1，HU Jun-hua1，YAO Ting-shan1，XIANG Qin4，YANG-Hua5，CHEN Hong-ming1
（1.Citrus Research Institute，Southwestern University/Citrus Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Chongqing 400712，China；2.National Citrus Engineering Research Center，Chongqing 400712，China；3.Nanmen Government of Chongqing Kaixian，Chongqing 405403，China；4.Chongqing Three Gorges Vocational College，Chongqing 405403，China；5.Liaoning Provincial Institute of Fruit Tree Science，Yingkou 115009，China）

In this study，the toxicity of the brevibacterium wettable powder（WP）on major postharvest pathogens of citrus and their efficacy in preserving the quality of glorious orange were investigated.The results showed that brevibacterium WP had the stronger toxic effects on Penicillium italicum Wehmer and Penicillium digitatum Saccardo，EC50value were 7.4970μg/mL and 8.8832μg/mL，according to preservation effect of view.The results showed that there were significant control effect of the brevibacterium WP 2000 times against Penicillium，green mold，anthracnose and total diseases，in 60 days.The brevibacterium WP had the better control effect than the control agent prochloraz EC at 667 times，comparison with water control.In 15 to 45 days the 100 billion/ brevibacterium WP dip drug treatment had no effect on the weight loss of Glorious orange.After 60 day the brevibacterium WP had some influence on fruit weight loss Glorious orange.The brevibacterium 2000 times and the water had no difference on fruit nutritional quality impact，but no negative impact on the appearance，color and taste of the Glorious orange fruit.Sum up：the brevibacterium WP 2000 times had better preservation effect of fruit storage to glorious orange.

antimicrobial；sensitivity；glorious orange；pathogens；preservation effect

TS255.3

A

1002-0306（2015）04-0315-06

10.13386/j.issn1002-0306.2015.04.060

2014－04－14

劉浩強(qiáng)（1978-），男，碩士研究生，助理研究員，主要從事柑橘貯藏病害方面的研究。

國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題（2012BAD19B06）；國(guó)家星火計(jì)劃課題（2012GA811001）；公益性行業(yè)科研專項(xiàng)（201203034）；重慶市自然科學(xué)基金（cstc2011jjA80025）。