張亞茹 王 忠 蔡少敏 張璐爽劉 洋 袁建敏 夏兆飛*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100193;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，北京 100193)

玉米是我國(guó)主要儲(chǔ)備糧品種之一，是飼料工業(yè)中使用最廣泛的谷物。研究表明隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，玉米品質(zhì)以及營(yíng)養(yǎng)發(fā)生退化［1-2］，尤其是由于玉米胚部不飽和脂肪酸含量高，而易發(fā)生氧化酸敗［3］。動(dòng)物使用長(zhǎng)期儲(chǔ)存玉米會(huì)引發(fā)不良影響，本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，肉雞飼糧中使用長(zhǎng)期儲(chǔ)存的玉米后，肉雞抗氧化功能下降［4］;同時(shí)崔小燕等［5］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中使用長(zhǎng)期儲(chǔ)存玉米會(huì)降低肉雞的免疫功能。因此緩解長(zhǎng)期儲(chǔ)存玉米的不良影響，對(duì)促進(jìn)動(dòng)物健康養(yǎng)殖意義重大。生產(chǎn)實(shí)踐中，通常加入抗氧化劑防止飼料的氧化變質(zhì)，以減緩對(duì)動(dòng)物的氧化損傷。二丁基羥基甲苯(butylated hydroxytoluene，BHT)作為飼料工業(yè)中廣泛使用的抗氧化劑，能清除自由基，防止飼料中不飽和脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的氧化變質(zhì)［6］。維生素E作為天然的強(qiáng)效抗氧化劑，能清除自由基，阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，以應(yīng)對(duì)氧化應(yīng)激的不良影響［7］。而茶多酚(tea polyphenol，TP)是新興的抗氧化劑，具有抗氧化、清除自由基、增強(qiáng)免疫力等多種生物學(xué)功能［8］。

陳玉米對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生的不良影響是否能通過(guò)添加抗氧化劑來(lái)緩解，目前還不清楚。因此，本試驗(yàn)選取糧庫(kù)中儲(chǔ)存3年的玉米，分別添加上述3種抗氧化劑進(jìn)行全價(jià)飼糧的配制，旨在探究這3種抗氧化劑對(duì)肉鴨生長(zhǎng)性能和抗氧化功能的影響，并確定出最適宜的抗氧化劑，為陳玉米的合理使用提供相應(yīng)參考以及科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

儲(chǔ)存3年玉米來(lái)自于北京周邊糧庫(kù)，儲(chǔ)存條件符合GB/T 7415—2008標(biāo)準(zhǔn)(玉米的理化性質(zhì)見(jiàn)表1)。嘔吐毒素(GB/T 23503)、玉米赤霉烯酮(GB/T 23504)、黃曲霉毒素 B1(GB/T 5009.22)含量由譜尼測(cè)試(北京)公司檢測(cè)。煙曲霉素B1、煙曲霉素B2含量采用高效液相色譜熒光檢測(cè)法，由百奧明(上海)飼料添加劑公司檢測(cè)。霉菌毒素含量低于國(guó)家與歐盟委員會(huì)2006/576/EC的標(biāo)準(zhǔn)。

表1 儲(chǔ)存3年玉米的理化性質(zhì)Table 1 Physicochemical property of maize storied for 3 years

1.2 試驗(yàn)方法

選取體重均勻、健康的1日齡雄性北京鴨(北京市南口北京鴨育種中心)192只，采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只。Ⅰ組(對(duì)照組)飼喂基礎(chǔ)飼糧(不添加飼料抗氧化劑)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加120 mg/kg TP、維生素E和BHT的試驗(yàn)飼糧。TP純度≥99%，杭州禾田生物技術(shù)有限公司提供;維生素E醋酸酯，有效含量≥50%，巴斯夫維生素有限公司提供;BHT純度≥99.5%，德國(guó)朗盛有限公司提供。試驗(yàn)采用玉米-豆粕型飼糧(基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2，抗氧化劑從麥飯石的比例中扣除)，參照 NY/T 2122—2012《肉鴨飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》，使用儲(chǔ)存3年玉米作為能量原料配制成顆粒狀全價(jià)飼糧。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)肉鴨采用網(wǎng)上飼養(yǎng)，乳頭式飲水器供水，自由飲水，自由采食。24 h光照，保持舍內(nèi)良好通風(fēng)。試驗(yàn)期42 d。按照北京商品鴨飼養(yǎng)管理程序進(jìn)行飼養(yǎng)管理。試驗(yàn)期間每天記錄舍內(nèi)溫度、濕度的變化以及肉鴨死亡和淘汰情況。

1.4 樣品采集和指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 肉鴨生長(zhǎng)性能的測(cè)定

在試驗(yàn)開(kāi)始及肉鴨21和42日齡時(shí)，分別以重復(fù)為單位，對(duì)試驗(yàn)肉鴨進(jìn)行空腹稱重，記錄初生重及21和42日齡體重，并統(tǒng)計(jì)前期和后期的耗料量，對(duì)死亡肉鴨以及淘汰肉鴨的耗料量進(jìn)行校正，計(jì)算平均日采食量(average daily feed intake，ADFI)、平均日增重(average daily gain，ADG)以及料重比(feed/gain，F(xiàn)/G)。

1.4.2 肉鴨血清抗氧化指標(biāo)的檢測(cè)

肉鴨21和42日齡時(shí)，從每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1只，每組6只，通過(guò)頸靜脈采血，置于一次性真空采血管中。室溫放置1 h至全部凝集，3 000 r/min離心10 min，制備血清，置于-20℃保存。按照試劑盒(南京建成生物工程研究所)的方法，使用752紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海菁華儀器有限公司)檢測(cè)總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSHPx)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)等抗氧化指標(biāo)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 20.0進(jìn)行單因子方差分析(oneway ANOVA)，并且使用Duncan氏法多重比較檢驗(yàn)，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果以 平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 2 Composition and nutrient levels of basal diets(air-dry basis) %

2 結(jié)果

2.1 TP、維生素E、BHT對(duì)肉鴨生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，1～21日齡時(shí)，添加抗氧化劑后，ADFI以及ADG提高，維生素E能顯著提高 ADFI、ADG(P ＜0.05)，而 TP 和 BHT對(duì) ADFI、ADG 影響不顯著(P＞0.05);22～42日齡時(shí)，TP和維生素E都能顯著提高ADG(P＜0.05)，分別提高了 6.39% 、6.90%，對(duì) ADFI無(wú)顯著影響(P＞0.05);無(wú)論1～21日齡還是22～42日齡，TP、維生素E和BHT對(duì)F/G都沒(méi)有顯著影響(P ＞0.05)。

2.2 TP、維生素E、BHT對(duì)肉鴨血清抗氧化功能的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，TP能顯著提高21和42日齡肉鴨血清的T-AOC(P＜0.05)，顯著提高42日齡血清CAT活性(P＜0.05);維生素E能顯著提高42日齡血清CAT活性(P＜0.05)，對(duì)血清T-AOC的影響不顯著(P＞0.05);BHT能顯著提高21日齡血清T-AOC以及21和42日齡血清CAT活性(P＜0.05);3種抗氧化劑對(duì)21日齡血清MDA含量影響均不顯著(P＞0.05)，有降低42日齡血清MDA含量的趨勢(shì)(P=0.079);3種抗氧化劑對(duì)血清GSH-Px、T-SOD活性的影響均不顯著(P ＞0.05)。

表3 TP、維生素E、BHT對(duì)肉鴨生長(zhǎng)性能的影響Table 3 Effects of tea polyphenol，vitamin E and butylated hydroxytoluene on growth performance of meat ducks

表4 TP、維生素E、BHT對(duì)肉鴨血清抗氧化功能的影響Table 4 Effects of tea polyphenol，vitamin E and butylated hydroxytoluene on serum antioxidant function of meat ducks

3 討論

玉米陳化、品質(zhì)劣變的主要原因是脂肪酸積累、過(guò)氧化物酶(POD)活性的降低［9］等，同時(shí)脂肪酸價(jià)是目前評(píng)價(jià)玉米儲(chǔ)存品質(zhì)的重要指標(biāo)。由表1可知本試驗(yàn)中選取的玉米為輕度不宜存(參照GB/T 20570—2006《玉米儲(chǔ)存品質(zhì)判定規(guī)則》)，并且儲(chǔ)存3年玉米POD活性低于文獻(xiàn)［10］中儲(chǔ)存0年的玉米。由此可知，本試驗(yàn)選取的玉米屬于陳玉米。由于其來(lái)自于糧庫(kù)，儲(chǔ)存條件適宜，霉菌毒素的含量并不超標(biāo)，因此本試驗(yàn)中肉鴨抗氧化功能改變顯然是玉米自身營(yíng)養(yǎng)成分的改變?nèi)缰舅嵫趸人鸬摹?/p>

陳玉米飼喂肉鴨后，機(jī)體攝入外源性自由基增多，血清抗氧化功能降低［4］。研究表明飼糧中添加玉米油能顯著提高肉雞血清和肝臟的脂質(zhì)過(guò)氧化水平，提高組織對(duì)于氧化損傷的易感性［11］。由此肉鴨采食陳玉米飼糧后更易產(chǎn)生氧化損傷，這種損傷可能會(huì)引起采食量降低，體重降低，降低生長(zhǎng)性能［12］。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TP能顯著提高22～42日齡肉鴨的ADG，維生素E能顯著提高1～21日齡肉鴨ADFI、ADG以及22～42日齡ADG。這與很多研究結(jié)果相同，王妍琪等［13］認(rèn)為茶多酚和維生素E對(duì)1～3周熱應(yīng)激肉仔雞的生長(zhǎng)性能有一定促進(jìn)作用，對(duì)試驗(yàn)全期生長(zhǎng)性能影響不顯著。Lu等［14］將維生素E添加到含有3%氧化豆油以及3%不飽和脂肪酸的飼糧中，發(fā)現(xiàn)維生素E能提高1～42日齡肉雞ADG，降低F/G，提高肉雞的生長(zhǎng)性能。這表明TP和維生素E作為強(qiáng)效的抗氧化劑能提高生長(zhǎng)性能，它們可能是通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化功能，緩解陳玉米對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的氧化損傷。

T-AOC反映機(jī)體酶類以及非酶類的抗氧化防御系統(tǒng)對(duì)于外界刺激的代償性作用，以及自由基的代謝狀態(tài)，是評(píng)估機(jī)體抗氧化功能的綜合性指標(biāo)［15］，比單一抗氧化指標(biāo)更為重要。CAT能特異性分解體內(nèi)過(guò)多的過(guò)氧化氫(H2O2)，以減少過(guò)氧化損傷，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TP能顯著提高肉鴨血清的T-AOC以及CAT活性，維生素E能顯著提高肉鴨血清CAT活性，BHT能顯著提高肉鴨血清的 T-AOC以及CAT活性。同時(shí)Hongqin［16］發(fā)現(xiàn)添加TP和維生素E能使肉雞的血清T-AOC顯著升高，血清MDA含量降低，與本試驗(yàn)結(jié)果基本一致。這可能是由于維生素E和TP能提高血清 CAT活性，有效地清除氧自由基［17-18］。TP、維生素E以及BHT都是酚類抗氧化劑，經(jīng)常用于油脂的抗氧化，茶多酚對(duì)油脂的抗氧化活性高于維生素E以及BHT［19-20］。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)TP表現(xiàn)為較好的抗氧化活性，這可能是因?yàn)門(mén)P與過(guò)氧化自由基作用后所生成的惰性自由基比BHT、維生素E穩(wěn)定。

GSH-Px以及SOD是酶類抗氧化劑中重要組成部分，能清除體內(nèi)產(chǎn)生的自由基，減少機(jī)體損傷。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，其含量反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化以及細(xì)胞損傷的程度。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)3種抗氧化劑對(duì)血清GSH-Px、T-SOD活性及MDA含量無(wú)顯著影響，只是在42日齡時(shí)對(duì)血清MDA含量有降低趨勢(shì)。A?lkg?z等［21］在輕微氧化油脂中加入維生素E后，發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)得到了改善，但是對(duì)血清GSH-Px活性無(wú)顯著影響，維生素E對(duì)血清GSH-Px活性的影響和本試驗(yàn)結(jié)果一致。這可能是由于本試驗(yàn)中選取儲(chǔ)存3年的玉米脂肪酸價(jià)稍高，屬于輕度不宜存，脂質(zhì)過(guò)氧化的程度不高，不足以對(duì)血清GSH-Px、T-SOD活性以及MDA含量產(chǎn)生顯著的影響。

4 結(jié)論

①陳玉米飼糧中添加TP和維生素E對(duì)肉鴨生長(zhǎng)性能以及抗氧化功能均有不同程度的改善，BHT只改善了肉鴨的抗氧化功能。

②陳玉米飼糧中添加TP效果最好。

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