丁潤梅，田大年

（1.寧夏醫(yī)科大學高等衛(wèi)生職業(yè)技術學院，寧夏銀川750004；2.寧夏醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院，寧夏銀川750004）

決明子茶提取物中黃酮含量的測定及抗自由基活性研究

丁潤梅1，田大年2

（1.寧夏醫(yī)科大學高等衛(wèi)生職業(yè)技術學院，寧夏銀川750004；2.寧夏醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院，寧夏銀川750004）

以水、不同含量乙醇為溶劑，采用超聲、回流等方法提取決明子茶中的總黃酮，采用亞硝酸鈉-氯化鋁法，通過紫外分光光度計在494 nm處測定樣品吸收，計算總黃酮含量；采用DPPH法研究提取物抗自由基活性。研究發(fā)現(xiàn)超聲和回流提取均含有一定量的黃酮，采用水回流提取的含量最低為3.39%，55%醇超聲提取的含量最高為6.10%。決明子醇提取物對DPPH自由基有較好的清除作用，55%醇回流提取物自由基清除率為71.90%。

決明子茶；總黃酮；亞硝酸鈉-氯化鋁法；抗自由基活性；DPPH法

決明子為豆科植物決明（Cassia obtusifolia L.）或小決明（Cassia tora L.）的干燥成熟種子，為常用中藥。決明子入藥最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，以明目之功而名，性味甘、苦、咸、微寒、無毒，歸肝、腎、大腸經(jīng)。具有清肝明目、潤腸通便的作用[1]，現(xiàn)代藥理學研究表明，決明子有降血壓，降血脂，保肝抑菌等活性[2-3]，被廣泛應用。另外，決明子又是可以作為藥食兩用的中藥，是保健飲料的良好原料。近年來又發(fā)現(xiàn)決明子提取物具有清除自由基、抵抗氧化的作用[4-6]，因此決明子作為一種保健食品的原料越來越引起重視，極具開發(fā)應用價值。決明子茶是在決明子的基礎上進行炒制后所得的產(chǎn)品，具有潤腸通便功效，也是減肥佳品。決明子的這些功能與其含有的黃酮有關，但有關決明子黃酮的含量未見報道。

自由基是生物體新陳代謝過程中產(chǎn)生的一類可以單獨存在的具有高度氧化活性的帶有一個或幾個不配對電子的分子或原子，其化學性質(zhì)相當活躍。自由基很活潑，具有高度的化學反應活性，自由基過多或清除過慢，會加速機體的衰老進程并誘發(fā)各種疾病[7]。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，自由基與一百多種人類疾病有關[8]。而黃酮類化合物通過酚羥基可與自由基反應，生成比較穩(wěn)定的半醌式自由基，從而終止了自由基鏈式反應，其清除自由基的能力與其結構特別是芳香環(huán)核失電子有關[9-10]。近年來，對一些黃酮類物質(zhì)清除自由基性能的相關研究發(fā)現(xiàn)，不同的黃酮類化合物對自由基的清除活性有一定差異。黃酮類化合物種類較多，種類之間結構也有一定差異，因此不同的黃酮類化合物其生物活性也有所不同。本文對決明子茶中總黃酮含量進行了測定，及抗自由基活性研究，旨在為決明子的保健食品的研究及資源開發(fā)上提供理論依據(jù)及檢測手段。

1 材料與儀器

1.1 儀器

紫外分光光度計（UV-2550）、精密分析天平（210）：日本島津；回流提取裝置，電熱恒溫水浴鍋：北京長源實驗設備廠。

1.2 試劑及材料

決明子茶：銀川市雅麗茶食品有限公司，保健型80g裝；蘆丁標準品（sigma分裝）純度＞99%，DPPH 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（Alfaaesar）純度＞95%，乙酸鈉為化學純，NaNO2、AlCl3、NaOH、乙醇、甲醇均為分析純。

2 實驗方法

2.1 黃酮含量的測定

2.1.1 樣品的提取

取樣品決明子茶10 g，粉碎后，過40目篩，裝瓶標號待用。

1）稱取決明子茶1 g，分別置于100mL錐形瓶中，分別加入水、55%乙醇、95%乙醇40mL，置于超聲波清洗器中，溫度設為45℃，功率為80 W，超聲處理30 min，靜置冷卻至室溫后抽濾到100mL容量瓶中，重復提取兩次，抽濾，洗滌濾渣后合并濾液，用溶劑定容至100mL，即得提取液。

2）稱取決明子茶1 g，分別置于100mL圓底燒瓶中，分別加入水、55%乙醇、95%乙醇30mL分別回流1 h，再各加入25mL溶劑重復2次，抽濾，洗滌濾渣后合并溶液，于100mL容量瓶中定容至刻度備用。

2.1.2 試劑的配制

1）蘆丁標準品溶液的配制：精密稱取25.0mg蘆丁標準品，置于25mL容量瓶中，用55%乙醇定容，配制成濃度為1.0mg/mL的蘆丁標準貯備液。

2）5%NaNO2溶液的配制：精密稱取2.50 gNaNO2置于50mL容量瓶中，用蒸餾水定容，配置成5% NaNO2溶液。

3）10%AlCl3溶液的配制：精密稱取5.00 g AlCl3置于50mL容量瓶中，用蒸餾水定容，配置成10%Al-Cl3溶液。

4）1.0mol/l NaOH溶液的配制：精密稱取2.00 g NaOH置于50mL容量瓶中，用蒸餾水定容，配置成1.0mol/LNaOH溶液。

2.1.3 標準曲線繪制

精密吸取蘆丁標準貯備液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分別置于5mL容量瓶中，加入55%的乙醇1mL、5%NaNO2溶液0.3mL，混勻后放置6min，加10% AlCl3溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加1.0mol/LNaOH溶液1.0mL，再加55%乙醇至刻度，搖勻，放置15min。在494 nm的波長處測定吸光度。

2.1.4 樣品的測定

精密吸取0.2mL樣品提取液至5mL容量瓶中，加55%的乙醇1mL、5%NaNO2溶液0.3mL，混勻后放置6min，加10%AlCl3溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加1.0mol/LNaOH溶液1.0mL，再加55%乙醇至刻度，搖勻，放置15min。在494 nm波長處測定吸光度，平行3次，取其平均值。

2.2 決明子DPPH自由基清除率

2.2.1 試劑的配制

1）DPPH儲備液：稱取DPPH自由基20mg，置于100mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，在-20℃條件下避光保存?zhèn)溆谩?/p>

2）DPPH工作液：（現(xiàn)配現(xiàn)用）按1.8∶8.2的DPPH儲備液：甲醇的比例配制DPPH工作液。在515 nm處測其吸光度，為A control。

2.2.2 樣品的測定

各樣品取20μL的提取液于5mL容量瓶中，用現(xiàn)配的DPPH工作液定容。在515 nm處測其吸光度，為A simple，平行測3次。

3 結果分析

3.1 標準曲線

標準曲線見表1。

表1 蘆丁標準曲線數(shù)據(jù)Table1 Rutin standard curvedata

以蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準的曲線（圖1）。統(tǒng)計學處理得回歸方程為y= 10.984x＋0.002，R2=0.999 8線性范圍為0～0.1mg/mL。

3.2 黃酮含量

樣品中總黃酮的含量在標準曲線中查出相應的值，樣品中總黃酮含量以蘆丁的相對量表示，見表2。

圖1 蘆丁標準曲線Fig.1 Rutin standard curve

表2 不同提取物中黃酮含量Tab le2 The content of flavonoid in the different extract

通過上述系列公式可以計算出各樣品所含黃酮量分別為：水回流為4.96%，55%醇回流為6.10%，95%醇回流為5.17%，水超聲為3.39%，55%醇超聲為5.58%，95%醇超聲為4.12%。

3.3 自由基清除率

樣品吸光度的平均值為：y

線性回歸方程為：y=10.984A＋0.002

表3 不同決明子茶提取物清除DPPH自由基效果Tab le3 The effecti on of extract to remove DPPH free radical in different cassia seed tea

DPPH清除率%=[（A control-A smple）/A control] ×100%

通過上述公式可以計算出各樣品對自由基的清除率：水回流為40.94%，55%醇回流為71.90%，95%醇回流為47.36%，水超聲為12.13%，55%醇超聲為68.19%，95%醇超聲為29.39%。

4 討論

本試驗以蘆丁為標準品，采用分光光度法測量了兩種方法提取的決明子茶提取液中黃酮含量。由實驗可知，決明子茶提取物均含有一定量的黃酮。因此，決明子茶的傳統(tǒng)泡茶，泡酒飲用方法均能攝取一定量的黃酮，為其用于治療高血壓、高血脂、動脈硬化等心血管疾病，提供了理論依據(jù)。同時還發(fā)現(xiàn)提取方法不同，提取液中黃酮的含量也各不相同。結果顯示黃酮含量以回流提取法略高于超聲提取法；55%醇提物略優(yōu)于95%醇提物略優(yōu)于水提物。因此，無論是泡茶還是泡酒均可以達到對決明子茶中黃酮的攝取，且泡酒，泡茶對于黃酮含量的差別不是很大。

兩種方法提取的決明子提取液能夠有效清除DPPH自由基，表明決明子的提取液具有清除自由基的功能。從清除自由基的能力來看，回流提取液清除自由基的活性要強于超聲，說明提取方法不同，對決明子的細胞破壞程度不一致，有效成分含量也不相同，導致清除自由基的活性強弱不同。由于植物提取液活性成分復雜，含有多種物質(zhì)，包括黃酮、蒽醌、酚類、多糖等，甚至有不少尚未確定的活性成分也在發(fā)揮作用，因此通過對清除自由基的能力與黃酮含量進行相關性分析，發(fā)現(xiàn)清除自由基的活性與提取物中的黃酮含量呈顯著正相關。決明子提取物是一種很好的天然自由基清除劑，這為我們合理開發(fā)利用決明子資源和研制新型功能食品提供了理論依據(jù)。

[1]韓昌志.決明子煎劑對家兔和狗睫狀肌中乳酸脫氫酶活性的影響,同濟醫(yī)科大學學報,1994,23(6)：246-248

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[5]徐建國,胡青平.決明子水提物體外清除自由基活性的研究[J].食品科學,2006,27(6)：73-76

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[9]胡康才,胡一鳴.決明子泡飲治高血脂[J].浙江中醫(yī)雜志,1992,27 (9)：432

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Determination of Total Flavonoid Content and Anti-free Radical Activity of Juem ingzi（Cassia obtusifolia L.seed）Tea Extracts

DING Run-mei1，TIAN Da-nian2
（1.High Health Vocational Technical School of Ningxia medical university，Yinchuan 750004，Ningxia，China；2.school of public health of Ningxia medical university，Yinchuan 750004，Ningxia，China）

The total flavonoid of cassia seed tea were extracted with water or different ethanol water solution by ultrasonic or reflux.The total flavonoid contents were detected with absorption spectrophotometer in 494 nm by using NaNO2-AlCl3method.The anti-free radical activity of the extracts was measured by using DPPH method. We found the flavonoid were detected in all of the extracts.The total flavonoid content in water extract by reflux was 3.39%，which was the lowest content.And that in 55%ethanol water solution extract by ultrasonic was 6.10%，which was the highest content.The extracts showed free radical scavenging activity to DPPH radical. And that in 55%ethanol water solution extract free radicals activity by reflux was71.90%.

cassia seed tea；total flavonoid；NaNO2-AlCl3method；anti-free radicals activity；DPPH method

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.06.024

2013-12-15

寧夏自然科學基金（NZ14069）；2012寧夏醫(yī)科大學校級課題（XQ2012027）

丁潤梅（1978—），女（漢），副教授，碩研，主要從事有機合成及分析。