林 琳

嬰幼兒眼分泌物肺炎鏈球菌的分離情況及藥敏結(jié)果分析

林 琳①

目的：了解嬰幼兒眼分泌物肺炎鏈球菌的分離情況及對(duì)常用抗菌藥物的敏感性，為臨床合理應(yīng)用抗菌藥物提供依據(jù)。方法：對(duì)2008年1月-2014年1月本院眼科門診就診患兒的眼分泌物標(biāo)本，經(jīng)細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)檢出肺炎鏈球菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果：838例患結(jié)膜炎的嬰幼兒眼分泌物中，分離肺炎鏈球菌45株，陽性率為5.4％。氧氟沙星和利福平敏感率最高分別為77.8％和75.6％，紅霉素耐藥率最高為66.7％。結(jié)論：肺炎鏈球菌是眼部感染的主要致病菌之一，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，喹諾酮類滴眼液可作為治療肺炎鏈球菌眼部感染的首選藥物。

眼分泌物； 肺炎鏈球菌； 藥敏試驗(yàn)

肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae，S.p）屬鏈球菌屬，為革蘭陽性的兼性厭氧球菌，在正常人的口腔及鼻咽部經(jīng)常存在，一般不致病，只形成帶菌狀態(tài)，只有在免疫力下降時(shí)才致病，尤其在呼吸道病毒感染后或嬰幼兒，年老體弱者易發(fā)生肺部感染。常寄生于兒童的上呼吸道，是兒童社區(qū)獲得性感染的首位致病菌[1-2]，肺炎鏈球菌是嚴(yán)重威脅兒童健康的常見病原菌之一。肺炎鏈球菌引起的感染性疾病主要有腦膜炎、肺炎、敗血癥、中耳炎等[3-5]，而肺炎鏈球菌引起眼結(jié)膜感染的報(bào)道很少，本文從838例嬰幼兒眼結(jié)膜分泌物中分離出45例肺炎鏈球菌，總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 標(biāo)本均采自2008-2014年來本院眼科就診的10 d～1歲眼結(jié)膜感染患兒的眼部分泌物。

1.2 儀器及試劑 VITEK2 COMPACT全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀鑒定（法國生物梅里埃公司）；M-H瓊脂購自杭州天和微生物試劑有限公司；青霉素E-test條為瑞典AB-biodisk公司產(chǎn)品；OPTOCHIN紙片、慶大霉素（10 μg/片）、環(huán)丙沙星（5 μg/片）、氨芐西林（10 μg/片）、紅霉素（15 μg/片）、氧氟沙星（5 μg/片）、利福平（5 μg/片）、妥布霉素（10 μg/片）、苯唑西林（1 μg/片）、加替沙星（10 μg/片）、氯霉素（30 μg/片），購于北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 標(biāo)本采集及處理 用無菌生理鹽水清潔眼部皮膚，然后以無菌紗布或無菌棉球拭干，再用無菌棉拭子沾取或刮取眼緣結(jié)膜囊和角膜病灶分泌物，立即劃線四區(qū)接種于血平板、巧克力平板和營養(yǎng)肉湯，置35 ℃培養(yǎng)24 h（巧克力平板置5％ CO2培養(yǎng)），進(jìn)行病原菌培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)分析。

1.4 細(xì)菌鑒定 肺炎鏈球菌菌體呈矛頭狀，多成雙排列，寬端相對(duì)，尖端相背，有較厚莢膜，革蘭陽性球菌。培養(yǎng)特性和生化反應(yīng)：營養(yǎng)要求及在血平板上菌落特征基本同甲型鏈球菌，培養(yǎng)時(shí)間稍久菌落中央下陷呈臍窩狀。在血清肉湯中培養(yǎng)稍久亦因細(xì)菌自溶而使混濁的培養(yǎng)液漸變澄清。自溶酶可被膽汁或膽鹽等物質(zhì)活化，加速細(xì)菌溶解，故可用膽汁溶菌試驗(yàn)與草綠色鏈球菌相區(qū)別；肺炎鏈球菌能分解菊糖這點(diǎn)也可作為與草綠色鏈球菌相區(qū)別的依據(jù)。奧普托欣（Optochin）試驗(yàn)：用以與其他草綠色鏈球菌相鑒別，用接種環(huán)將單個(gè)待鑒定菌落均勻涂于血平板上，用含量為5 μg的optochin紙片貼于接種區(qū)中央，35 ℃需氧培養(yǎng)過夜，抑菌圈＞18 mm的為陽性，肺炎鏈球菌為陽性。所有操作依照《全國檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）[6]，培養(yǎng)48 h無菌生長或只有少量稀疏的正常寄生菌落生長者報(bào)告陰性。

1.5 藥敏試驗(yàn) 采用K-B紙片法，選取含5％綿羊血的瓊脂平板上18～20 h培養(yǎng)物，用M-H 肉湯或0.9％ NaCl溶液直接調(diào)制成相當(dāng)于0.5號(hào)麥?zhǔn)蠞岫染鷳乙海苽浜玫慕臃N菌液必須在15 min內(nèi)使用。用滅菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓幾次，去掉過多的菌液。用拭子在含5％綿羊血的MH平板瓊脂表面均勻涂抹接種3次，每次將平板旋轉(zhuǎn)60°，最后沿平皿周邊繞兩圈，保證均勻涂布滿整個(gè)培養(yǎng)基表面。孵育條件為5％ CO2，（35±2）℃，孵育20～24 h。對(duì)苯唑西林的抑菌環(huán)直徑≥20 mm，為肺炎鏈球菌對(duì)青霉素敏感，抑菌環(huán)直徑≤19 mm的肺炎鏈球菌不能報(bào)告青霉素耐藥，應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，本文采用青霉素的E-test試驗(yàn)。質(zhì)控菌株采用肺炎鏈球菌ATCC49619，結(jié)果判定按2014版CLSI標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[7]。

1.6 E-test試驗(yàn) 即抗生素濃度梯度法，0.5號(hào)麥?zhǔn)蠞岫染鷳乙褐苽浜?％綿羊血的MH平板瓊脂表面涂抹菌懸液同K-B紙片擴(kuò)散法，取青霉素的E-test試驗(yàn)藥敏片，正面朝上貼到含5％綿羊血的MH平皿培養(yǎng)基表面，為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。5％ CO2，（35±2）℃，孵育20～24 h。當(dāng)青霉素的MIC值≤2 μg/mL時(shí)，報(bào)告青霉素敏感，青霉素的MIC值為4 μg/mL時(shí)，報(bào)告青霉素中介，青霉素的MIC值為≥8 μg/mL時(shí)，報(bào)告青霉素敏感。同時(shí)采用肺炎鏈球菌ATCC49619進(jìn)行質(zhì)控。

2 結(jié)果

838例患結(jié)膜炎的嬰幼兒眼分泌物中，分離肺炎鏈球菌45株，陽性率為5.4％。對(duì)45株肺炎鏈球菌進(jìn)行了11種抗菌藥物（青霉素、氨芐西林、慶大霉素、妥布霉素、紅霉素、利福平、氯霉素、加替沙星、環(huán)丙沙星和氧氟沙星）的藥敏試驗(yàn)，其中氧氟沙星、利福平、環(huán)丙沙星和氯霉素的敏感率分別為77.8％、75.6％、73.3％和71.1％以上，而紅霉素敏感率只有24.4％，慶大霉素的敏感率也只有28.9％。詳細(xì)情況見表1。

表1 45株肺炎鏈球菌的藥敏結(jié)果

3 討論

正常人的眼部是無菌的[8]。眼睛有分泌物是眼睛輕度感染性疾病，可能由于分娩過程中接觸陰道含有細(xì)菌的分泌物，接生操作者污染的手或者出生后所接觸的用品不清潔，引起嬰兒的結(jié)膜發(fā)炎，使得嬰兒眼屎過多、黏稠。也可能由于有的孩子鼻淚管被上皮細(xì)胞殘?jiān)氯虮菧I管黏膜閉塞，使得淚液和淚道內(nèi)的分泌物積留在淚囊而引起淚囊炎，這樣的患兒在淚囊處有一囊性腫物，表面略發(fā)青，如果輕輕壓迫眼睛內(nèi)側(cè)的淚囊部，可有黏液性或黏液性分泌物溢出，腫物消失。肺炎鏈球菌感染可致多種疾病，包括肺炎鏈球菌肺炎、敗血癥、膿胸、白血病及化膿性腦膜炎，甚至可影響患者的神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育。肺炎鏈球菌在成人眼部感染在是僅次于葡萄球菌的主要革蘭陽性球菌[9]，也是嬰幼兒感染的主要致病菌之一，可以引起中耳炎，甚至更嚴(yán)重的侵襲性感染[10]，但嬰兒眼分泌物感染肺炎鏈球菌的報(bào)道不多見，本文從838例患眼結(jié)膜炎的嬰兒眼分泌物中分離出45株肺炎鏈球菌，可見肺炎鏈球菌可以引起嬰兒的眼部感染，在臨床診治中不容忽視。

隨著抗生素頻繁的不合理使用，肺炎鏈球菌的耐藥性也有所改變，其耐藥性的變遷已經(jīng)成為抗感染治療面臨的一大難題。近年來，肺炎鏈球菌對(duì)青霉素的耐藥情況日趨嚴(yán)重，給臨床治療帶來困難，其耐藥機(jī)制主要是青霉素結(jié)合蛋白（PBP）基因的改變，從而改變細(xì)胞壁上高分子質(zhì)量青霉素結(jié)合蛋白結(jié)構(gòu)，降低了對(duì)內(nèi)酰胺酶的親和力而產(chǎn)生耐藥[11]。目前肺炎鏈球菌的耐藥性已經(jīng)成為全球化的問題，耐藥率呈逐年增高的趨勢[12]。

眼部肺炎鏈球菌感染，可以發(fā)生在眼瞼、眼表和眼內(nèi)等不同部位，引起瞼緣炎、結(jié)膜炎、角膜炎和眼內(nèi)炎等疾病。瞼緣炎、結(jié)膜炎等會(huì)造成嚴(yán)重不適。角膜炎可以導(dǎo)致角膜渾濁，產(chǎn)生嚴(yán)重的視力下降。眼內(nèi)炎可以破壞眼球，如不及時(shí)控制，會(huì)導(dǎo)致失明。治療眼部感染的目標(biāo)是控制感染，保護(hù)眼組織及其功能。值得注意的是從眼部感染患兒分離的肺炎鏈球菌的青霉素不敏感株（PNSP）為26株，占57.8％，低于金國強(qiáng)等[13-14]的報(bào)道，可能與來自不同感染部位及不同地區(qū)肺炎的菌株的耐藥性存在差異有關(guān)。對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥率達(dá)到66.7％，低于李玲萍等[15]的報(bào)道，推測本醫(yī)院大環(huán)內(nèi)酯類藥物使用的相對(duì)合理，未導(dǎo)致肺炎鏈球菌耐藥性升高為主要原因，可見紅霉素在藥敏試驗(yàn)結(jié)果為敏感的情況下可以用于肺炎鏈球菌引起的嬰幼兒的眼部感染的治療。對(duì)慶大霉素的耐藥率也達(dá)到60％。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出氯霉素的敏感率是71.1％，而且氯霉素滴眼液具有廣譜抗菌活性，是治療眼表淺層感染的可供選擇的藥物，滴用本品后耐受性良好。但是滴用氯霉素滴眼液后存在不易發(fā)現(xiàn)的再生障礙性貧血的風(fēng)險(xiǎn)，因此在臨床中應(yīng)當(dāng)慎用。其他具有廣譜抗菌活性的抗菌藥包括氟喹諾酮類藥物，如諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星，氨基糖苷類藥物，如妥布霉素、慶大霉素、新霉素等對(duì)肺炎鏈球菌引起的感染治療有效。氟喹諾酮類藥對(duì)嬰幼兒的安全性尚未確定，可能會(huì)對(duì)軟骨發(fā)育有影響，因此對(duì)18歲以下兒童不推薦使用。

綜上所述，目前嬰幼兒肺炎鏈球菌引起的眼部感染不容忽視。隨著不同地區(qū)肺炎鏈球菌耐藥性的不斷改變，有效抗菌藥物的合理應(yīng)用對(duì)于肺炎鏈球菌的感染治療至關(guān)重要。同時(shí)伴隨多重耐藥株的出現(xiàn)，如何選擇正確的抗菌藥物這一問題亟待解決。因此，加強(qiáng)對(duì)不同地區(qū)兒童肺炎鏈球菌耐藥性的監(jiān)測，減少該地區(qū)抗菌藥物的不合理使用，降低肺炎鏈球菌所致醫(yī)院感染的比例，對(duì)兒童肺炎鏈球菌感染預(yù)后甚至臨床診療都具有重要的意義[15]。

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Analysis of the Results of Separation and Antimicrobial Susceptibility Tests of Infant Eye Secretions of Streptococcus Pneumoniae

LIN Lin.//Medical Innovation of China，2015，12（09）：106-108

Objective：To understand the separation condition of infant eye secretions of streptococcus pneumoniae and their antimicrobial susceptibility tests， and provide evidence for clinical rational use of antimicrobial agents. Method： Children eye secretion specimens were cultured and antimicrobial susceptibility test results of detection of streptococcus pneumoniae were retrospectively analyzed from January 2008 to January 2014 in our hospital outpatient department of ophthalmology. Result： In the 838 secretion specimens of child patients of conjunctivitis， 45 pathogens were carried out streptococcus pneumoniae， with a positive rate of 5.4％. The sensitivity rates of Ofloxacin and Rifampin were higher， 77.8％ and 75.6％ respectively， while the drug resistance rate of Erythromycin was the highest，66.7％. Conclusion：Streptococcus pneumoniae is one of the main pathogenic bacteria of ocular infections， according to the result of drug sensitivity test， fluoroquinolones eye drops can be used as the drug of choice for the treatment of pneumococcalinfections of the eye.

Eye secretions； Streptococcus pneumoniae； Antimicrobial susceptibility test

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.09.035

2014-09-10） （本文編輯：蔡元元）

①沈陽市兒童醫(yī)院 遼寧 沈陽 110032

林琳

First-author’s address： The Children’s Hospital of Shenyang，Shenyang 110032，China