成 遙，張 賀，孟 楣，劉 健

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥制劑三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230031;2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥 230012)

新風(fēng)膠囊(XFC)為安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院(以下簡(jiǎn)稱我院)劉健教授自創(chuàng)的經(jīng)驗(yàn)方，并由我院藥學(xué)部進(jìn)一步研發(fā)為醫(yī)院制劑，于2005年取得了安徽省醫(yī)院制劑的批準(zhǔn)文號(hào)(皖藥制字20050062)，該方由黃芪、薏苡仁、雷公藤、蜈蚣等4味中藥組成，具有益氣健脾，化濕通絡(luò)之功效。臨床主要用于治療風(fēng)濕類疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，強(qiáng)直性脊椎炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡等，療效確切安全。該制劑中雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)系衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，味苦、性寒，有大毒，歸肝、腎經(jīng)，藥用部位為根，是祖國(guó)醫(yī)學(xué)中一種常見(jiàn)草藥，應(yīng)用歷史悠久，具有祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛、消腫止痛、解毒殺蟲(chóng)等功效［1］，1960年代以來(lái)應(yīng)用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)，起效快而療效好，逐漸受到世界范圍內(nèi)的認(rèn)可［2］。與此同時(shí)，現(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)，雷公藤對(duì)人體的肝、腎、生殖等功能有一定影響，是近年來(lái)發(fā)生中毒事件最多的草藥之一，其中肝腎損害屢見(jiàn)不鮮，柯坤宇［3］報(bào)道，因類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎服用雷公藤多苷片(40 mg·d－1)30 d致急性肝損害1例。黃光照等［4］報(bào)道了4例雷公藤中毒的尸檢病理報(bào)告，其中2例死于急性腎功能衰竭。雷公藤為XFC主要構(gòu)成藥物，XFC安全性的臨床循證醫(yī)學(xué)證據(jù)較多，劉健等［5－7］均做過(guò)深入的研究，但關(guān)于XFC安全性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)較匱乏，為進(jìn)一步驗(yàn)證XFC的安全性及其是否具有雷公藤樣的肝腎毒性，本實(shí)驗(yàn)研究了XFC對(duì)大鼠的肝腎亞急性毒性，為臨床安全用藥提供依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物和儀器 SD大鼠60只，雌雄各半，體重180～220 g，由安徽長(zhǎng)臨河科技有限公司提供，SPF級(jí)，準(zhǔn)字號(hào)為scxk(皖)2014－002。我院SPF級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)飼養(yǎng)，溫度20℃，相對(duì)濕度55% ～65%。動(dòng)物食用全營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料，滅菌注射用水。ZN17-UX/UW型動(dòng)物天平。DM0421E型低速離心機(jī)。日立CA7600全自動(dòng)生化分析儀。奧林巴斯CKX31-C11BF型光學(xué)顯微鏡。

1.2 藥品及試劑 新風(fēng)膠囊(安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑，批號(hào)20140521);雷公藤飲片(購(gòu)自我院中草藥房，由我院李立華主任藥師鑒定);10%水合氯醛;10%甲醛溶液。

1.3 方法

1.3.1 分組及給藥 取60只SD大鼠常規(guī)飼養(yǎng)適應(yīng)1周后，隨機(jī)分為5組:雷公藤組、XFC組(低、中、高)和空白對(duì)照組(CON組)，每組12只。雷公藤組劑量為原生藥 1.92 g·kg－1·d－1、XFC 組(低、中、高)大鼠分別灌胃給予相應(yīng)XFC膠囊內(nèi)容物溶解藥液 0.6 、1.2 、2.4 g·kg－1·d－1。相當(dāng)于臨床成人(體重以 60 kg計(jì))用量0.06 g·kg－1·d－1的10、20、40倍。連續(xù)給藥30 d。空白組每日灌服等量滅菌注射用水。給藥體積為15 mL·kg－1。給藥期間正常供給飼料與滅菌注射用水。

1.3.2 觀察指標(biāo)和檢測(cè)方法 實(shí)驗(yàn)期間，考察大鼠的一般狀態(tài):包括毛色變化、精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食飲水量等，稱取大鼠逐日體重。于第31天給藥后，10%水合氯醛輕度麻醉后腹主動(dòng)脈取血，留取的血樣靜置后，于4 500 r·min－1離心15 min，分離血清，－20℃保存，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酸(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酸(AST)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)。解剖大鼠，留肝、腎組織，稱質(zhì)量，計(jì)算臟器系數(shù)，留取肝、腎組織于10%甲醛中保存，制作組織切片(取材、固定、脫水、浸蠟、包埋、切片、脫蠟、HE染色)，顯微鏡下觀察。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS 19統(tǒng)計(jì)軟件處理，各組數(shù)據(jù)以(±s)表示，多組之間比較采用單因素方差分析(one way－ANOVA)表示，方差齊性檢驗(yàn)采用t檢驗(yàn)，多組之間兩兩比較采用LSD－t檢驗(yàn)的方法，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 動(dòng)物一般狀況 給藥期間無(wú)大鼠死亡，與空白組比較，其余各組大鼠毛色、精神、活動(dòng)等一般狀況均未見(jiàn)明顯異常，體重增長(zhǎng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);各組大鼠肝、腎臟器官均未見(jiàn)明顯腫脹，其肝腎指數(shù)也無(wú)明顯差異(P＞0.05)，見(jiàn)表1。

表1 新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠肝腎功能體質(zhì)量及肝腎指數(shù)的影響(±s，n=12)

表1 新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠肝腎功能體質(zhì)量及肝腎指數(shù)的影響(±s，n=12)

組別 初質(zhì)量/g 處死時(shí)質(zhì)量/g 肝臟指數(shù)/mg·g－1 腎臟指數(shù)/mg·g －1雷公藤組 202.0 ±10.1 323.2 ±20.5 37.15 ±2.43 16.58 ±3.23空白對(duì)照組 194.5 ±8.0 267.5 ±10.4 35.67 ±1.89 16.43 ±2.82 XFC 低劑量組 216.6 ±5.6 295.4 ±20.7 36.15 ±2.02 16.51 ±2.08 XFC 中劑量組 204.9 ±10.3 302.6 ±13.8 36.65 ±1.83 16.09 ±3.14 XFC 高劑量組 206.6 ±11.2 314.3 ±15.6 37.04 ±2.12 16.23 ±3.07

2.2 血清生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 給藥30 d后，與空白組比較，雷公藤組各肝腎功能指標(biāo)水平均明顯升高(P＜0.05)，見(jiàn)表2。由表2可知，XFC的低、中、高三個(gè)劑量組測(cè)得的ALT、AST值與空白組比較P＞0.05，雷公藤組 P ＜0.05，由此可見(jiàn)雷公藤組的轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)顯著升高，提示肝功能有所惡化，而XFC各個(gè)劑量組對(duì)肝功能無(wú)明顯影響;XFC的低、中、高三個(gè)劑量組測(cè)得的BUN、SCr值與空白組比較P＞0.05，與雷公藤組比較 P ＜0.05，由此可見(jiàn)雷公藤組的BUN、SCr水平顯著升高，提示腎功能有所惡化，而XFC各個(gè)劑量組對(duì)腎功能無(wú)明顯影響。

2.3 新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠肝、腎組織學(xué)的影響

2.3.1 對(duì)肝組織學(xué)的影響 結(jié)果見(jiàn)圖1，空白對(duì)照組大鼠的肝切片可見(jiàn)，肝組織結(jié)構(gòu)完整，匯管區(qū)及小葉內(nèi)無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞無(wú)變性(圖1A)。雷公藤組可見(jiàn)，肝組織結(jié)構(gòu)完整，少量匯管區(qū)可見(jiàn)炎細(xì)胞(以中性粒細(xì)胞為主)浸潤(rùn)，小葉內(nèi)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，中央靜脈周?chē)渭?xì)胞胞漿疏松水腫，其余肝細(xì)胞變性不顯著(圖1B)。XFC各組可見(jiàn)肝組織結(jié)構(gòu)完整，匯管區(qū)及小葉內(nèi)未見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞胞漿略微疏松水腫，其余肝細(xì)胞變性不顯著(圖1C，1D，1E)。

表2 新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠肝腎功能血液學(xué)指標(biāo)的影響(±s，n=12)

表2 新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠肝腎功能血液學(xué)指標(biāo)的影響(±s，n=12)

注:與空白對(duì)照組相比▲P＜0.05。

組別 ALT/IU·L－1 AST/IU·L－1 BUN/mmol·L－1 SCr/μmol·L －1雷公藤組 55.00±12.13▲ 121.17 ±20.15▲ 8.45±1.21▲ 34.43 ±6.37▲空白對(duì)照組 44.50 ±8.06 102.50 ±8.09 7.76 ±0.87 31.83 ±5.23 XFC 低劑量組 46.63 ±7.34 106.25 ±7.39 8.15 ±1.00 30.15 ±3.31 XFC 中劑量組 47.04 ±9.11 116.80 ±6.75 6.65 ±0.76 29.18 ±4.36 XFC 高劑量組 46.60 ±8.24 104.32 ±8.65 8.04 ±0.98 30.23 ±5.09

2.3.2 對(duì)腎組織學(xué)的影響 結(jié)果見(jiàn)圖2?？瞻捉M腎小球和腎皮質(zhì)、髓質(zhì)未見(jiàn)充血，未見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，近曲小管及遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞無(wú)變性(圖2A)。雷公藤組腎小球和腎皮質(zhì)、髓質(zhì)現(xiàn)充血，近曲小管上皮細(xì)胞略腫脹，可見(jiàn)粉染細(xì)顆粒，皮、髓質(zhì)交界處偶見(jiàn)灶狀炎細(xì)胞浸潤(rùn)(圖2B)。XFC低、中、高組腎皮質(zhì)、髓質(zhì)未見(jiàn)充血，高劑量組皮質(zhì)內(nèi)腎小球略現(xiàn)充血，近曲小管及遠(yuǎn)曲小管無(wú)顯著改變(圖2C、2D、2E)。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)著重考察新風(fēng)膠囊對(duì)大鼠肝腎的亞急性毒性，以相當(dāng)于XFC臨床成人用量(2.4 g·d－1)的10、20、40倍劑量給藥，以常規(guī)的肝腎功能檢測(cè)指標(biāo)血清ALT、AST和血清BUN、SCr作為指標(biāo)，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果易得。結(jié)果顯示，雷公藤組所測(cè)肝腎功能指標(biāo)水平顯著升高，肝、腎功能減退，產(chǎn)生一定的病理?yè)p傷，但損傷程度較輕，大鼠的體重和肝腎指數(shù)未現(xiàn)顯著異常，主要表現(xiàn)為細(xì)胞腫脹和少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。這進(jìn)一步驗(yàn)證了雷公藤對(duì)肝腎的毒副作用，而新風(fēng)膠囊各劑量組肝腎指標(biāo)水平與空白對(duì)照組相比未見(jiàn)明顯異常，肝腎功能正常，組織病理學(xué)改變亦十分輕微，這提示在人40倍耐受劑量下XFC仍未見(jiàn)雷公藤樣肝腎毒性。

新風(fēng)膠囊為我院劉健教授在“脾虛致痹”理論啟發(fā)下，與臨床實(shí)踐相結(jié)合而自創(chuàng)的驗(yàn)方，君藥為黃芪、薏苡仁，臣藥為雷公藤、蜈蚣。作為新風(fēng)膠囊臣藥的雷公藤臨床應(yīng)用廣泛，對(duì)多種疾病尤其是風(fēng)濕類疾病療效好、見(jiàn)效快，幾乎沒(méi)有可以完全替代的藥物，與此同時(shí)，據(jù)臨床觀察，雷公藤的肝腎毒副作用發(fā)生率為58.1%［8］，肝臟與腎臟是人體重要的代謝器官，體內(nèi)產(chǎn)生的毒物與廢物必須依靠肝、腎排出，但其自身非常脆弱。如何降低雷公藤的肝腎毒副作用，已成為現(xiàn)今中藥領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，關(guān)于雷公藤配伍減毒的研究已有顯著進(jìn)展，與雷公藤配伍減毒的藥物有甘草、女貞子、鳳尾草、白芍總苷、阿魏酸鈉、茶多酚、番茄紅素等［9－17］，但雷公藤與黃芪、薏苡仁配伍減毒的用法仍不多見(jiàn)。我院劉健教授獨(dú)創(chuàng)性的提出讓黃芪和薏苡仁來(lái)和雷公藤配伍來(lái)降低它的毒副作用，本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了這一成果。黃芪和薏苡仁的現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，這兩味藥物內(nèi)不同成分對(duì)肝細(xì)胞、腎細(xì)胞有保護(hù)作用，對(duì)肝癌細(xì)胞有抑制作用。黃芪多糖可保護(hù)肝細(xì)胞化學(xué)性損傷，并對(duì)CYP1A和CYP3A的表達(dá)有積極作用。黃芪注射液能抵抗自由基介導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化，對(duì)大鼠的腎臟有保護(hù)作用［18－21］。薏苡仁脂肪酸和薏苡仁油對(duì)人肝癌細(xì)胞具有抑制作用并可誘導(dǎo)其凋亡，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)［22－23］。以薏苡仁油為主要成分的康萊特注射液已成為抗腫瘤治療輔助藥物廣泛應(yīng)用于臨床［24］。關(guān)于本制劑中單味藥黃芪、薏苡仁對(duì)大鼠肝、腎等重要器官的保護(hù)作用機(jī)制，將在后面的研究中做更深一步的探討。

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