張 冉 陳 萍 許瑞利 李元元 （山東省棗莊市市中區(qū)畜牧獸醫(yī)局 277100）

棗莊市市中區(qū)牛羊布氏桿菌病和結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查

張 冉 陳 萍 許瑞利 李元元 （山東省棗莊市市中區(qū)畜牧獸醫(yī)局 277100）

為全面了解棗莊市市中區(qū)牛羊布氏桿菌病和結(jié)核病（以下簡稱“兩病”）的流行情況，2015年6月份開展了兩病的流行病學(xué)調(diào)查研究。采用虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗結(jié)合的方式對采集的1926份血清(牛816份，羊1110份)進行布病檢測；采用牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗對816頭牛進行結(jié)核病檢測。結(jié)果顯示：布氏桿菌病檢測，檢出陽性牛16頭、陽性羊4只；牛結(jié)核病檢測，檢出陽性牛3頭。

布氏桿菌病簡稱布病，是由布氏桿菌引起的一種人畜共患的傳染病，嚴重威脅畜牧業(yè)生產(chǎn)和人體健康，我國農(nóng)業(yè)部將其列為二類動物疫病[1]。牛、羊、豬最易感[2]，給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成重大經(jīng)濟損失，嚴重危害畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類健康?；⒓t平板凝集試驗與試管凝集試驗是臨床上用于檢測布氏桿菌病的常用方法，虎紅平板凝集試驗簡便易行，方便快捷，常用于樣品的初步檢測，但其檢出陽性率較高，常有假陽性出現(xiàn)，在實際工作中，常采用虎紅平板凝集試驗初檢，試管凝集試驗復(fù)檢的方法，便可得出快速、準確的結(jié)果[3]。牛結(jié)核病主要是由牛分枝桿菌(Mycobacterium. bovis)引起的一種人獸共患的慢性消耗性傳染病[4]，該病因其易傳染，一年四季均可發(fā)生，呈世界性流行，且能通過奶制品傳染給人和犢牛，危害嚴重，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)定為B類動物傳染病，我國將其列為二類動物疫病[5]。皮內(nèi)變態(tài)反診斷，簡單易行，目前仍被世界各國廣泛使用，也是世界動物衛(wèi)生組織推薦的診斷牛結(jié)核病的唯一方法[6]。

1 材料和方法

1.1 血清的制備與保存 待血清析出時，分裝入離心管，放于4℃冰箱用于試驗檢測，將其他備份血清放于-20℃冰箱凍存。

1.2 材料 布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗抗原、陽性血清、陰性血清均購自青島易邦生物工程有限公司。結(jié)核菌素：哈藥集團生物疫苗有限公司生產(chǎn)，批準文號獸藥生字(2006)080078024。真空管、離心管、離心機、冰箱、玻璃板、試管、游標卡尺(精度為0.02mm)、毛剪、酒精棉、1ml注射器、工作服、一次性帽子、一次性口罩、膠靴、記錄表等。

1.3 布氏桿菌病檢測 對采集的1926份血清采用布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗初步篩查，待其出現(xiàn)陽性結(jié)果，再使用試管凝集試驗進行復(fù)檢。（1）布病虎紅平板凝集試驗方法及判定標準：參照國家標準GB/T18646-2002動物布氏桿菌診斷技術(shù)，在滅菌潔凈的玻璃板片上，分別吸取被 檢血清30μl與虎紅平板凝集抗原30μl混合均勻，同時以 陽、陰性血清作對照。在4min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象 判為陽性，無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性。（2）布病試管凝集試驗(SAT)方法及判定標準。首先稀釋血清，稀釋度依次為1:12.5、l:25、1:50、1:100。加入等量稀釋后的抗原，混勻，則血清稀釋度依次為l:25、1:50、1:100、1:200。同時做陰性對照和陽性對照及抗原對照，并配制比濁管。將全部試管、對照管及比濁管充分振蕩后置37℃溫箱24h，取出檢查并記錄結(jié)果[7]。參照

比濁管，按各試管上層液體亮度判讀，++++菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；+++菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮；++菌體凝集顯著，液體50%清亮；+凝集物有沉淀，液體25%清亮；－凝集物無沉淀，液體均勻混濁。

1.4 牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗方法及判定標準 注射部位及術(shù)前處理：將牛只編號后在頸側(cè)中部上三分之一處剪毛(或提前1d剃毛)，3個月以內(nèi)的犢牛，也可在肩胛部進行，直徑約10cm。用卡尺測量術(shù)部中央皮皺厚度，作好記錄。注意術(shù)部應(yīng)無明顯的病變。注射劑量：不論大小牛只，一律皮內(nèi)注射0.1ml(含2000IU)。即將牛型結(jié)核分枝桿菌PPD稀釋成每毫升含2萬IU后，皮內(nèi)注射0.1ml。凍干PPD 稀釋后當天用完。注射方法：先以75%酒精消毒術(shù)部，然后皮內(nèi)注射定量的牛型結(jié)核分枝桿菌PPD，注射后局部應(yīng)出現(xiàn)小皰，如對注射有疑問時，應(yīng)另選15cm以外的部位或?qū)?cè)重做。注射次數(shù)和觀察反應(yīng)：皮內(nèi)注射后經(jīng)72h判定，仔細觀察局部有無熱痛、腫脹等炎性反應(yīng)，并以卡尺測量皮皺厚度，作好詳細記錄。對疑似反應(yīng)牛應(yīng)立即在另一側(cè)以同一批PPD同一劑量進行第二回皮內(nèi)注射，再經(jīng)72h觀察反應(yīng)結(jié)果。對陰性牛和疑似反應(yīng)牛，于注射后96h和120h再分別觀察一次，以防個別牛出現(xiàn)較晚的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。結(jié)果判定：局部有明顯的炎性反應(yīng)，皮厚差大于或等于4.0mm，判為陽性反應(yīng)；局部炎性反應(yīng)不明顯，皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm判為疑似反應(yīng)；無炎性反應(yīng)，皮厚差在2.0mm以下判為陰性反應(yīng)。凡判定為疑似反應(yīng)的牛，于第一次檢疫60d后進行復(fù)檢，其結(jié)果仍為疑似反應(yīng)時，經(jīng)60d再復(fù)檢，如仍為疑似反應(yīng)應(yīng)判為陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛羊布氏桿菌病 布氏桿菌初篩及復(fù)檢結(jié)果見表1。由表1可知，初檢結(jié)果牛16頭陽性、羊4頭陽性；經(jīng)試管凝集試驗復(fù)檢，牛16頭陽性、羊4頭陽性。

表1 牛羊布氏桿菌病的檢測結(jié)果 （頭）

2.2 牛結(jié)核病 牛結(jié)核病初檢及可疑病例復(fù)檢結(jié)果見表2。由表2可知，檢測結(jié)果牛3頭陽性。

表2 牛結(jié)核病初檢及可疑病例復(fù)檢結(jié)果 （頭）

4 討論

通過這次調(diào)研，檢測出本區(qū)存在布氏桿菌病及牛結(jié)核病陽性畜。對于所有陽性畜采取及時撲殺、焚燒、消毒、深埋等無害化處理，并做好登記備案、消毒滅源等其它疫點拔除工作，達到凈化家畜兩病的目的。本區(qū)對于“兩病”采取以預(yù)防為主和撲殺病畜為主的綜合性措施。具體方法是：（1）加大“兩病”防治知識的宣傳力度，使養(yǎng)殖戶真正具備自我防范兩病的自覺性及技能性[8]；（2）應(yīng)嚴格按防治程序進行無害化處理，定期消毒，減少畜間傳播機率；（3）牛、羊的流產(chǎn)物要深埋；對污染的畜圈和場地進行徹底消毒；（4）嚴禁買賣病畜，外引入新畜時，必須經(jīng)檢疫證實無病后方可合群；（5）大搞環(huán)境衛(wèi)生，接觸牛、羊后要洗手，不要在牛、羊圈舍內(nèi)吃食物，不吃未熟的肉和奶，不要玩羊羔、牛犢；（6）人畜屋舍要分離，牛、羊接產(chǎn)時要做好個人防護，如穿工作服、戴口罩及橡膠手套等。

[1] 羅明星, 周碧君, 王開功等. 貴州省家畜布氏桿菌病血清學(xué)檢測

[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009, 37(1): 109-110.

[2] 蔡一非. 奶牛布氏桿菌的分離鑒定、血清學(xué)檢測方法比較與流行病學(xué)調(diào)查[D]. 新疆: 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué), 2008,

[3] 田峰. 湖北省2005-2009年畜間布魯氏菌病血清學(xué)檢測分析[D]. 湖北: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2010.

[4] Ahmed N,Mohanty A K,Mukhopadhyay U, et al.PCR-based rapid detection of Mycobacterium tuberculosis in blood from immunocompetent patients with pulmonary tuberculosis[J]. Journal of Clinical Microbiology, 1998, 36(10): 3094-3095.

[5] 王忠仁. 牛結(jié)核病與人結(jié)核病的相互關(guān)系[J]. 中國防癆雜志, 2005, 27(2): 123-125.

[6] 李金嶺, 郭宏軍, 王麗艷等. 國內(nèi)外牛結(jié)核病的防制現(xiàn)狀及檢測手段[J]. 獸醫(yī)導(dǎo)刊, 2007, 124(12): 18.

[7] 胡登林, 馬長麗, 愛爾拜爾等. 塔城地區(qū)牛羊布魯氏桿菌病血清學(xué)調(diào)查與風險分析[J]. 湖北畜牧獸醫(yī), 2013, 34(1): 26-27.

[8] 孫延星, 竇玉鳳, 劉建平等. 新疆兵團農(nóng)五師地區(qū)牛羊布魯氏菌病流行病學(xué)調(diào)查及防制[J]. 中國畜牧獸醫(yī)文摘, 2011, 44(8): 70-71.

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