劉超 李英

（樂山市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，四川樂山 614000）

茶葉中甲基對硫磷的檢測

劉超 李英

（樂山市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，四川樂山 614000）

本文采用高效液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜法對綠茶、紅茶、普洱茶、烏龍茶中甲基對硫磷進(jìn)行檢測。建立了以Inertsil ODS-3為液相色譜柱，以甲醇、0.1%乙酸水為流動相，質(zhì)譜使用電噴霧離子源，正離子掃描，以264.0/125.0為定量離子對的LC-MS/ MS檢測方法。該方法所測得的甲基對硫磷在0～2.0ng/mL內(nèi)具有良好的線性，檢出限為0.47ng/kg，加標(biāo)回收率在83.5%～106.3%之間。該方法適合綠茶、紅茶、普洱茶、烏龍茶中甲基對硫磷殘留量的分析。

茶葉；甲基對硫磷；液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜

茶，屬雙子葉植物，約30個屬，500個種，分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。中國有14個屬，397種，主要生長于長江以南各地。茶葉含兒茶素、膽甾烯酮、咖啡堿、肌醇、葉酸、泛酸等成分，可以增進(jìn)人體健康。茶葉是我國傳統(tǒng)的經(jīng)濟(jì)作物，同時(shí)也是我國主要的出口商品之一。近年來，茶葉的農(nóng)藥殘留問題日益引起人們的關(guān)注，也成了國際貿(mào)易中的壁壘。茶葉中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留一般用氣相色譜法、高效液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法進(jìn)行檢測[1-3]。氣相色譜法檢測有機(jī)磷農(nóng)藥具有回收率低、穩(wěn)定性不高等缺點(diǎn)；高效液相色譜法經(jīng)常遇到靈敏度低、選擇性差等問題[4]。而高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀則具有靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，因此在茶葉農(nóng)殘檢測中較為常見[5,6]，但用其檢測茶葉中的甲基對硫磷在國內(nèi)鮮有報(bào)道。為此，研究高效液相色譜串聯(lián)四級桿質(zhì)譜法檢測茶葉中甲基對硫磷具有非常重要的意義。

本試驗(yàn)用乙腈提取，用Cleanert TPT小柱凈化，以高效液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀測定茶葉中甲基對硫磷殘留，具有前處理簡單、選擇性好、穩(wěn)定性好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)；適用于茶葉中甲基對硫磷的實(shí)際檢測工作。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

綠茶：碧螺春，犍為縣興順精制花茶廠，生產(chǎn)日期為2015年07月02日，20℃下保存，保質(zhì)期為18個月；

紅茶：碧潭飄雪，馬邊蕎壩茶葉專業(yè)合作社，購買日期為2015年4月24；

普洱：云南普洱茶，云南普洱茶有限公司，購買日期為2015年4月19日；

烏龍茶：鐵觀音，森秋茶葉有限公司，購買日期為2015年4月27日。

乙腈、甲苯、正己烷、丙酮，均為色譜純；

無水硫酸鈉，用前650℃灼燒4h，儲于干燥器中，冷卻后備用；

甲基對硫磷，100μg/mL，1mL，GSB05-1870-2008，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測所；

水，GB/T6682規(guī)定的一級水。

1.2 儀器與設(shè)備

儀器液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源，美國AB公司API3200；

分析天平（精確度0.01mg），德國賽多利斯集團(tuán)CP225D；

高速組織搗碎機(jī)，九陽股份有限公司JYL-C012；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，萊博泰克科技有限公司EV331；

氮吹儀，北京普立泰儀器有限公司EVA50A；

低速離心機(jī)，四川蜀科儀器有限公司TD420；

均質(zhì)器，艾卡儀器設(shè)備有限公司T25；

微孔濾膜（尼龍），13mm×0.22μm；

Cleanert TPT固相萃取柱，規(guī)格為2.0g/10mL。

1.3 樣品的提取

準(zhǔn)確稱取5.00g經(jīng)粉碎的綠茶于50mL離心管中，加入10mL乙腈，均質(zhì)提取1min，4200r/min離心5min，取上清液于50mL比色管中。殘?jiān)?0mL乙腈重復(fù)提取2次，合并上清液，于40℃氮吹至1mL左右，待凈化。

1.4 凈化

用10mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）預(yù)洗Cleanert TPT固相萃取柱，棄去流出液，下接雞心瓶，放入固定架上，將樣品提取液轉(zhuǎn)移至Cleanert TPT固相萃取柱中，用4mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）分兩次洗滌樣液瓶，并將洗滌液移入柱中，用25mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）洗滌小柱，收集所有流出液于雞心瓶中。流出液于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5mL，乙腈定容至1mL，供LCMS/MS用。

1.5 色譜條件

1.5.1 液相色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3（150mm×2.1mm，5μm）；

進(jìn)樣體積：10μL；

流速：0.2mL/min；

柱溫：40℃；

流動相：A：甲醇，B：0.1%乙酸，梯度洗脫見表1。

表1 流動相梯度洗脫條件Table 1Mobile phase condition

1.5.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；電噴霧電壓：4500V；氣簾氣：30psi；霧化氣壓力：30psi；碰撞氣：5psi；輔助氣：30psi；離子源溫度為450℃。

表2 質(zhì)譜條件Table 2Condition list of rod mass spectrometry

2 結(jié)果與分析

2.1 檢出限

由自動進(jìn)樣器吸取0.2ng/mL的甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液10μL，注入色譜儀中，平行進(jìn)樣3次，求出儀器檢出限的平均值，而后求出方法檢出限，結(jié)果見表3。

由表3可知，儀器的平均檢出限為0.00932ng/mL，方法檢出限為1.88ng/kg，可見該儀器和方法靈敏度很高。

表3 甲基對硫磷的檢出限Table 3Detection limit of methyl parathion

2.2 線性范圍

根據(jù)甲基對硫磷的靈敏度，用空白樣品提取液分別配成濃度為0ng/mL、0.2ng/mL、0.4ng/mL、0.6ng/mL、0.8ng/ mL、1ng/mL和2ng/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。4℃保存，現(xiàn)用現(xiàn)配。此標(biāo)準(zhǔn)系列供LC-MS/MS用，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，見圖1。

圖1 甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：Fig.1Standard curve regression equation of methyl parathion

圖1顯示，甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=77978x+386.96，R2值為0.9991，由此可見，甲基對硫磷在0～2.0ng/mL范圍內(nèi)，具有良好的線性。

2.3 回收率

準(zhǔn)確稱取9份研磨均勻的5.00g空白試樣于50mL具塞比色管中，分別準(zhǔn)確移取0.02mL、0.03mL、0.04mL濃度為100ng/mL的甲基對硫磷準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液各3份至9份試樣中，加入10mL乙腈溶液在高度組織搗碎機(jī)上以15000r/min勻漿提取1min。4200r/min離心5min，取上清液于50mL比色管中。殘?jiān)?0mL乙腈重復(fù)提取2次，合并上清液，于40℃氮吹至1mL左右，用10mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）預(yù)洗Cleanert TPT固相萃取柱，棄去流出液，下接雞心瓶，放入固定架上，將樣品提取液轉(zhuǎn)移至Cleanert TPT固相萃取柱中，用4mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）分兩次洗滌樣液瓶，并將洗滌液移入柱中，用25mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）洗滌小柱，收集所有流出液于雞心瓶中。流出液于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5mL，乙腈定容至1mL，供LC-MS/MS用。

式中：C1—標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的加標(biāo)樣品的濃度，ng/mL；

C2—標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的樣品的濃度，ng/mL；

M—加標(biāo)質(zhì)量，ng；

表4 甲基對硫磷加標(biāo)回收率Table 4Adding standard recovery of methyl parathion

甲基對硫磷方法回收率為83.5%～106.3%，符合GB/T27404-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測中的規(guī)定（70%～120%）。

2.4 重復(fù)性

準(zhǔn)確稱取6份研磨均勻的10.00g空白試樣于50mL具塞比色管中，分別準(zhǔn)確移取0.80mL濃度為10ng/mL的甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)液，加入30mL乙腈溶液在高度組織搗碎機(jī)上以15000r/min勻漿提取1min。以下步驟同1.3、1.4的步驟，得到凈化的樣品提取液。

由自動進(jìn)樣器吸取凈化后的樣品溶液10μL，注入色譜儀中，記錄色譜圖，測定峰面積。計(jì)算出RSD值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，RSD為2.82%，說明該方法重復(fù)性良好。

3 實(shí)際樣品檢測

用建立的方法對試驗(yàn)中準(zhǔn)備的綠茶、紅茶、普洱、烏龍茶進(jìn)行測定，結(jié)果表明：甲基對硫磷在這4種樣品中均未檢出。原因可能是所測樣品是市面上抽檢的，為明前茶，由于溫度較低，明前茶的農(nóng)藥施用量較少，農(nóng)殘較低，因此未檢測出甲基對硫磷。

4 結(jié)論

建立了高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測茶葉中的甲基對硫磷殘留，此方法檢出限為0.47ng/kg，線性范圍為0～2.0ng/mL，方法回收率為83.5%～106.3%，方法精密度為2.82%。因此，所建方法能夠滿足實(shí)際檢測的需要。

[1]羅逢健,劉光明,陳宗燮.茶葉中23種農(nóng)藥殘留的多檢出分析技術(shù)[J].現(xiàn)代科學(xué)儀器,2003,(1):13-16.

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Detection of Methyl Parathion in Tea

LIU Chao LI Ying
(Leshan Food and Drug Inspection and Testing Center,Leshan 614000,China)

In this paper,we tested methyl parathion in green tea,black tea,Puer tea,oolong tea with LC-MS/MS method. The method was developed based on novel HPLC column Inertsil ODS-3 with methanol and 0.1%acetic acid as mobile phase,combined with MS,which used positive ion scanning,and quantification ion pair was 264.0/125.0.A good linear in 0～2.0ng/mL was obtained.And the detection limit was 0.47ng/kg.The adding standard recovery was 83.5%～106.3%.This method is suitable for methyl parathion residues analysis in green tea,black tea,Puer tea,oolong tea.

Tea;methyl parathion;LC-MS/MS

O657

A

1008-1038(2015)08-0024-04

2015-04-20

劉超（1984—），男，助理工程師，研究方向?yàn)槭称钒踩?/p>