謝良才，劉天春(綜述)，范 文※，許 蓉(審校)

(長江大學附屬第一醫(yī)院 a.檢驗科，b.骨外科，湖北荊州434000)

類風濕因子(rheumatoid factors，RF)是一種臨床常見的自身抗體，常作為類風濕關節(jié)炎的重要診斷指標之一［1］，但同樣出現(xiàn)在其他自身免疫性疾?。?-3］、感染性疾?。?-4］，甚至健康人血液中［5］。RF是常見的免疫測定干擾物之一［3］，盡管RF對免疫檢測的干擾發(fā)生率并不高，但RF干擾的潛在性和嚴重危害性應引起實驗室工作人員和臨床醫(yī)師的足夠重視和警覺。目前相關研究多限于臨床個案的分析和報道，現(xiàn)主要闡述RF對各類不同種類的免疫測定干擾產(chǎn)生的機制及不同的干擾類型，同時闡述干擾的發(fā)現(xiàn)、鑒別、處理及減少RF干擾發(fā)生的措施，為消除或減少RF對免疫檢測的干擾提供參考。

1 RF對免疫測定的干擾

1.1 RF干擾的檢測項目 RF對許多免疫測定項目存在干擾。內分泌類:甲狀腺激素［6］、甲狀旁腺激素［7］;腫瘤標志物:糖類抗原 19.9［8］、糖類抗原 125［9］;心肌標志物:腦鈉肽［10］、肌鈣蛋白Ⅰ［11］;特異性微生物標志物:乙型肝炎表面抗原［12］、丙型肝炎病毒抗體［13］、風疹特異性免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)M 抗體［14］、結核分枝桿菌抗體［15］;其他:細胞因子［16］、C 反應蛋白［17］及一些藥物［18］等。

1.2 對雙抗體夾心法免疫檢測的干擾

1.2.1 正干擾(假性增高/假陽性) 雙抗體夾心法用于大部分抗原、蛋白、激素及藥物的檢測。研究證實，RF對基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附法［12，19］、固相放射免疫［14］、化學發(fā)光法［10，20-21］、微粒子免疫分析［22］等檢查系統(tǒng)，均存在不同程度的正性干擾。RF對雙抗體夾心法檢測系統(tǒng)干擾的可能機制為:雙抗體夾心法檢測系統(tǒng)中的捕獲抗體和信號抗體一般均為IgG，當樣本中的RF能同時與這兩種抗體Fc段結合時，便會將捕獲抗體與信號抗體橋接，形成捕獲抗體-RF-信號抗體的復合物，從而產(chǎn)生非特異性的檢測信號，造成檢測結果的假性增高或假陽性［16，19］，引起這種干擾的可能是IgM-RF、IgG-RF或者其他型別。

1.2.2 負干擾(假性降低/假陰性)RF對雙抗體夾心法的免疫分析系統(tǒng)的負干擾在一些文獻中被提出［23］，但被試驗或臨床證實的報道較少［19，24-25］。RF對免疫測定系統(tǒng)負干擾的機制，主要是空間位阻(屏蔽)假說［25］，即當RF只能與捕獲或信號抗體中的某一種抗體結合時，會形成空間位阻(屏蔽)，阻礙捕獲抗體-抗原-信號抗體復合物的形成，造成檢測信號的減弱或缺失，引起假性降低或假陰性的檢測結果［24-25］。對于一些三位點免疫檢測法，其干擾發(fā)生的機制與雙抗體夾心法是相似的。由于同時使用兩種捕獲抗體(或兩種信號抗體)，雖然增加了檢測的敏感性，但同時也增加了干擾發(fā)生率。

1.3 RF對捕獲法檢測IgM類抗體的干擾 捕獲法檢測IgM的干擾目前僅見假性增高的報道［13-14］，是否有假性降低的可能尚有待進一步研究。RF對捕獲法干擾有兩種可能的機制，一種是由IgM-RF引起，由于第一步IgM的捕獲是非特異性的，IgM-RF同樣被捕獲，被捕獲的IgM-RF最后與信號抗體(IgG或IgG的抗原抗體復合物)結合，產(chǎn)生檢測信號;另一種機制則與雙抗體夾心法類似，由RF直接將捕獲抗體和信號抗體橋接，同樣會引起假性增高或假陽性。這兩種機制由哪一種主導目前尚缺乏相關研究和報道。

1.4 RF對其他免疫測定的干擾 RF干擾免疫比濁法和乳膠光度免疫分析法也有報道，RF對免疫比濁法干擾機制主要是發(fā)生在反應的第二步，增加抗原抗體復合物聚集形成多聚體，引起檢測結果的假性增高［17］。

2 RF對免疫測定系統(tǒng)的干擾特點

2.1 干擾的發(fā)生具有隨機性 RF對免疫測定系統(tǒng)的干擾是由RF與檢測系統(tǒng)中抗體(主要是IgG)Fc段的非特異性結合引起的，但這種非特異性的結合并不是絕對的。某一個體，RF的干擾沒有規(guī)律可循。而其中的原因可能與RF自身的特異性和同系的特異性有關，一種RF不能與所有的IgG分子Fc部分的抗原結合，只有當RF抗原的決定簇與IgG分子上Fc段對應的空間結構有互補性時才有可能結合，所以RF與IgG Fc段的結合是隨機的，沒有結合規(guī)律可循。因此，某一標本中的RF是否能夠引起檢測系統(tǒng)的干擾，事前無法預料到［26］。

2.2 干擾程度與RF濃度的劑量效應不明確 無論高濃度還是低濃度的RF均會對免疫檢測引起干擾。盡管某些研究證實高濃度的RF較低濃度的RF更易引起干擾，但干擾發(fā)生與RF濃度的量效關系目前尚不明確［24-26］。一方面是由于RF本身有IgM、IgG、IgA、IgD、IgE等多種成分，干擾是由哪種或哪幾種成分引起，各種成分的干擾效果等均有待進一步研究;另一方面是由于RF能夠自身發(fā)生聚集，而形成多聚體;另外，RF可與天然IgG反應，但與凝集IgG及免疫復合物中變性IgG親和力更強［24］。因此，干擾程度可能與分析物濃度也有一定的相關性(因為這些分析物會與檢測系統(tǒng)抗體形成抗原抗體復合物)［26］。

3 干擾的發(fā)現(xiàn)和確認

3.1 追溯用于檢測干擾抗體的存在 結果追溯是指當化驗結果受到質疑(因與臨床結果不符或超過極端限制的分析結果)時，在發(fā)出報告結果之前，依據(jù)完善的機制或程序，追索確認干擾的存在［27］。干擾的可能性應始終考慮，即使在管理最好的實驗室，尤其當結果出現(xiàn)與臨床表現(xiàn)不符合時，早期的調查始終是可取的［28］。追溯方法有明顯的缺點，比如很多檢測結果本身病理、生理下會出現(xiàn)大的生物學差異，缺乏充分的臨床資料及臨床表現(xiàn)的復雜性。因此，利用生理學上不合理的閾值做判斷，提醒技術人員所有免疫檢測的潛在干擾是不實際的。

3.2 積極的用于確認干擾抗體存在的方法

3.2.1 樣本連續(xù)稀釋法 通過對分析樣本進行連續(xù)稀釋，分析稀釋系數(shù)與濃度梯度改變的線性關系，是較為簡單、可行的用于干擾發(fā)現(xiàn)和鑒別的方法［10，29］。例如，有報道，利用稀釋法可較好地消除由于異嗜性抗體引起的雅培化學發(fā)光檢測系統(tǒng)測定血清人絨毛膜促性腺激素的干擾［30］。

3.2.2 加標或加樣回收實驗 加標或加樣回收實驗也可鑒定和確認干擾的存在與否［29］。通過向檢測樣本中加入已知量的分析物，計算回收率，如果回收率在檢測系統(tǒng)預定回收率范圍內，可排除干擾的存在;如果回收率遠高于檢測系統(tǒng)正?；厥章?，提示檢測結果偏高，樣本檢測結果可能存在假性增高;如果回收率遠低于檢測系統(tǒng)正?；厥章剩崾緳z測結果偏低，樣本檢測結果可能存在假性降低［10］。

3.2.3 使用不同方法學或不同廠商的檢測系統(tǒng)復查 使用不同方法學或不同廠商的檢測系統(tǒng)復查，尋找與測量的替代方法之間的差異［27，31］。由于RF對檢測系統(tǒng)的干擾是偶然的，不同檢查系統(tǒng)試劑中使用的抗體有一定的差異，因此同一樣本對一種檢測系統(tǒng)有干擾，但對另一檢測系統(tǒng)干擾不一定存在。所以對于一些樣本，尤其是當初次檢測結果與臨床不符時，可采取更換檢測系統(tǒng)的方法復查樣本，以發(fā)現(xiàn)和確認干擾。

3.3 其他發(fā)現(xiàn)鑒別干擾存在的方法 對于在生理、病理、臨床上有相關性的項目(如肌酸激酶及其同工酶與肌鈣蛋白、乙型肝炎e抗原與乙型肝炎表面抗原等)，比較相關檢測項目結果之間的一致性也是發(fā)現(xiàn)干擾的方法之一。另一種積極的做法是要求提供相關病史(如風濕病史)。實施這一方法也較為困難，且很可能是無效的，因為在未知干擾發(fā)生率、程度及干擾物量效關系等信息時，很難預測干擾發(fā)生與否。對所有待檢樣本進行盲篩也是不可取的。實驗室和臨床工作人員之間應建立良好的溝通，以最大限度地減少因意料之外的干擾而造成錯誤檢測結果的風險。

4 干擾的處理

4.1 樣本前處理 在檢測和分析前對樣本進行預處理以消除或盡可能降低樣本中的RF，以達到消除或降低RF對檢測系統(tǒng)的干擾。常用的樣本預處理方法包括:分析前在樣本中加入動物血清或 IgG［7，19］或加入封閉阻斷試劑［32］;用包被IgG 的 固 體 顆 粒 吸 附［10，26］;使 用 阻 斷 試 管 采 集 檢 測 樣本［23，33］;使用聚乙二醇 6000［34］處理樣本，這樣的選擇有一個很好的理由，因為與IgG結合形成復合物而干擾免疫檢測的RF主要成分被認為是多克隆IgM型RF，而與聚乙二醇6000沉淀的主要是此類較大的復合物，而對其他小分子單體RF沉淀很少;用蛋白L沉淀［16，35］，但價格較高，使得L蛋白不可能用于臨床試驗。盡管這些方法在減少或消除RF干擾方面被證實是有效的，且其中一些方法也較為簡單實用，但這些預處理方法已被證實并不是對所有RF樣本都有效［19，26，36］。

4.2 改進檢測系統(tǒng) 利用抗體工程，在免疫測定中截斷Fc部分(RF的結合位點)，僅保留Fab段的抗體作為檢測試劑，或使用活體的生物素單鏈是一個較為理想的解決RF干擾的方法［37-39］。但檢測系統(tǒng)中，無論是捕獲抗體的包被固化，還是信號抗體的標記，多在抗體的Fc段，這樣的修改可能增加抗體的包被和標記的難度，在工程上依然有一定的困難，因此，目前市場上也無此類檢測系統(tǒng)，但其可能成為今后抗體免疫檢測抗干擾研究的方向之一［37］。也有報道，RF不與卵黃抗體反應，如果將捕獲抗體或信號抗體(或兩者)使用卵黃抗體，能夠避免 RF 的干擾［40］。

5 小結

盡管對RF免疫檢測干擾的研究有了很大的進步，并提出很多干擾鑒定和解決的方法，但到目前為止還沒有一種方法可徹底消除RF的干擾。當出現(xiàn)與臨床不符的可疑結果時，檢驗人員應立即告知實驗室負責人，及時與臨床聯(lián)系，尋找干擾原因，運用多種檢驗技術進行檢驗，力求得出較為準確的結果。相信隨著RF相關干擾的進一步研究及免疫檢測技術、抗體工程技術的發(fā)展，在不久的將來能徹底解決由此帶來的困擾。

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