李英霞， 侯立靜， 高 華， 劉桂霞， 蘇麗君， 慈倩倩

（1.青島大學(xué)藥學(xué)院，山東青島266021；2.山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟(jì)南250014；3.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院研究生教育中心，山東章丘250202）

千金子霜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李英霞1， 侯立靜2， 高 華1， 劉桂霞2， 蘇麗君1， 慈倩倩3

（1.青島大學(xué)藥學(xué)院，山東青島266021；2.山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟(jì)南250014；3.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院研究生教育中心，山東章丘250202）

目的 對(duì)千金子霜進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。方法 以瀉下成分千金子甾醇及千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯為對(duì)照品，建立薄層色譜 （TLC）法，并對(duì)10批不同產(chǎn)地的千金子霜進(jìn)行鑒別。高效液相色譜 （HPLC）法對(duì)千金子霜中這兩種瀉下成分、水分、灰分及脂肪油的含有量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 10批千金子霜在與千金子甾醇及千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯對(duì)應(yīng)的TLC位置上，均顯示出相同顏色的斑點(diǎn)，水分含有量為5.55%～7.22%，總灰分、酸不溶性灰分含有量分別為5.95%～6.82%和0.12%～0.45%，含油量為18.04%～20.00%，千金子甾醇和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯含有量分別為0.134%～0.182%和0.212%～0.248%。結(jié)論 該方法可用于千金子霜的定性鑒別及定量分析，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步完善提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

千金子霜；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；千金子甾醇；千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯；TLC；HPLC

千金子又名續(xù)隨子，是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材之一，來(lái)源于大戟科植物續(xù)隨子Euphorbia lathyris L.的干燥成熟種子，其性溫，味辛，有小毒，瀉下作用強(qiáng)烈，屬峻下逐水藥，具有逐水消腫，破血散結(jié)之功效，用于水腫痰飲、積滯脹滿、二便不通、血瘀經(jīng)閉等癥，外治頑癬、疣贅［1］，而且在抗腫瘤、抗白血病等方面具有較大的開(kāi)發(fā)潛力［2-9］。千金子中含有大量脂肪油，包括二萜酯類、游離二萜醇及多種脂肪酸，另外還含有香豆素、甾醇類等成分［10］，近年來(lái)又發(fā)現(xiàn)了兩種新骨架化合物［11-12］。一般認(rèn)為，脂肪油為千金子導(dǎo)瀉的有效部位，也是毒性部位，其中的二萜酯類成分6，20-環(huán)氧千金二萜醇苯乙酸酯 （俗稱千金子甾醇）和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯為千金子的主要瀉下成分之一［13-14］，故為了緩和其峻烈之性，降低其毒性，一般要求去油制霜炮制后使用?！吨袊?guó)藥典》2010年版將千金子甾醇確定為千金子藥材中的 “含量測(cè)定”指標(biāo)，并規(guī)定了其含有量限度標(biāo)準(zhǔn)不得少于0.35%。另外，將炮制品千金子霜單列，規(guī)定了其 “制法”、 “性狀”、秦皮乙素的 “TLC鑒別”、脂肪油的 “含量測(cè)定”及 “限度標(biāo)準(zhǔn)”（18.0%～20.0%），但仍缺乏對(duì)毒性成分的質(zhì)控方法及限度標(biāo)準(zhǔn)，難以保證臨床使用的安全性和有效性。因此，本課題組前期采用新研制的制霜設(shè)備，對(duì)千金子制霜新工藝進(jìn)行了考察［15］，比較了制霜前后脂肪油及主要瀉下成分的含有量［16］，發(fā)現(xiàn)制霜后其含有量均明顯下降。本實(shí)驗(yàn)將10批不同產(chǎn)地的千金子霜繼續(xù)進(jìn)行研究，旨為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步完善提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 儀器、試劑與試藥

Waters2695HPLC色譜儀（美國(guó)Waters公司）；2996二級(jí)管陣列檢測(cè)器、R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （上海申勝生物技術(shù)有限公司）。

千金子霜為河南南陽(yáng)、河南社旗、廣西、新疆、云南5個(gè)產(chǎn)地的千金子藥材經(jīng)制霜新工藝所得到的樣品，共10批，批號(hào)為20090622-1～20090622-10。

秦皮乙素對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110741-200506，供含有量測(cè)定用；千金子甾醇和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯對(duì)照品均購(gòu)自北京顯通時(shí)代醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)分別為20081106和200812228，經(jīng)HPLC面積歸一化法測(cè)定，純度分別達(dá)98.00%和99.67%，與文獻(xiàn) ［17-18］報(bào)道基本一致。硅膠G（青島海洋化工有限公司）。甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 外觀性狀 5個(gè)產(chǎn)地的10批千金子霜均為均勻、疏松的淡黃色粉末 （河南社旗和新疆產(chǎn)樣品的顏色比其他產(chǎn)地略深），微顯油性，味辛辣。

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1 秦皮乙素的鑒別 千金子制霜炮制后其脂肪油含有量明顯下降，而香豆素類成分 （如秦皮乙素等）提高。因此，按照 《中國(guó)藥典》2010年版 （一部）千金子霜 “鑒別 （2）”項(xiàng)下方法，對(duì)不同產(chǎn)地的10批千金子霜樣品進(jìn)行了薄層色譜 （TLC）鑒別。結(jié)果顯示，在與秦皮乙素對(duì)照品相應(yīng)的TLC位置上，它們均顯示出相同的亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，見(jiàn)圖1。

圖1 千金子霜中秦皮乙素的TLC圖

2.2.2 兩種瀉下成分的鑒別 《中國(guó)藥典》2010年版（一部）千金子和其炮制品千金子霜的 “鑒別”項(xiàng)下只有香豆素類成分秦皮乙素的TLC鑒別方法，而其作為峻下逐水藥，卻沒(méi)有主要瀉下成分的定性鑒別方法。因此，本實(shí)驗(yàn)建立了以瀉下成分千金子甾醇和千金子二萜醇二乙酸苯甲酸酯為對(duì)照品的千金子霜的TLC鑒別方法，并應(yīng)用于10批樣品。

2.2.2.1 供試品溶液的制備 取千金子霜樣品10批，每批2g，加甲醇15mL，超聲（300W、45kHz）5min，濾過(guò)，濾液蒸干，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至2mL量瓶中，甲醇稀釋至刻度，即得。

2.2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取千金子甾醇和千金子二萜醇二乙酸苯甲酸酯對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1mL含2mg上述成分的對(duì)照品溶液。

2.2.2.3 TLC鑒別 按照 《中國(guó)藥典》2010年版 （一部）附錄ⅥB方法進(jìn)行試驗(yàn)，分別吸取上述對(duì)照品和供試品溶液5μL，點(diǎn)于同一硅膠薄層G板 （以羧甲基纖維素鈉為黏合劑）上，以石油醚 （60～90℃）-乙酸乙酯-環(huán)己烷-丙酮（18∶6∶12∶1）為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，噴5%硫酸乙醇溶液，揮干后于105℃下烘烤5min。結(jié)果，在與對(duì)照品相應(yīng)的TLC位置上，千金子甾醇顯淡黃色斑點(diǎn)，而千金子二萜醇二乙酸苯甲酸酯先顯褐色，后漸變?yōu)榛宜{(lán)色，斑點(diǎn)比較清晰，見(jiàn)圖2。

2.3 含水量、總灰分及酸不溶性灰分含量測(cè)定 《中國(guó)藥典》2010年版 （一部）千金子霜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)缺少 “檢查”項(xiàng)，本實(shí)驗(yàn)按照 《中國(guó)藥典》2010年版 （一部）附錄IX H水分測(cè)定法 （烘干法）及附錄IXK項(xiàng)下方法，分別對(duì)10批千金子霜的含水量、總灰分及酸不溶性灰分含有量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

圖2 千金子甾醇和千金子二萜醇二乙酸苯甲酸酯的TLC圖

表1 10批千金子中試霜平均含水量和含油量測(cè)定結(jié)果（n=3）

表2 10批千金子中試霜總灰分和酸不溶性灰分含有量測(cè)定結(jié)果（n=3）

2.4 含油量測(cè)定 《中國(guó)藥典》2010年版 （一部）千金子霜 “含量測(cè)定”項(xiàng)下規(guī)定，含油量限度范圍在18.0%～

20.0%之間，本實(shí)驗(yàn)按照藥典方法，對(duì)10批千金子霜的含油量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.5 瀉下成分千金子甾醇 （Ⅰ）和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯 （Ⅱ）的測(cè)定 《中國(guó)藥典》2010年版 （一部）千金子霜 “含量測(cè)定”項(xiàng)下僅有含油量測(cè)定方法與標(biāo)準(zhǔn)。作為毒性中藥，須采用更準(zhǔn)確、快速的方法測(cè)定其毒性成分含有量，規(guī)定其含有量限度標(biāo)準(zhǔn)才能保證用藥的安全性、有效性及質(zhì)量穩(wěn)定性。因此，本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法測(cè)定千金子霜中主要瀉下成分千金子甾醇 （Ⅰ）和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯 （Ⅱ）的含有量，色譜條件、對(duì)照品和供試品溶液的制備方法及方法學(xué)考察參考文獻(xiàn) ［16］，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 10批千金子中試霜中Ⅰ和Ⅱ平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論與小結(jié)

3.1 千金子作為峻下逐水藥，毒性較大，其瀉下成分既是該藥材的毒性物質(zhì)，也是有效物質(zhì)，不能完全去除。在臨床應(yīng)用或作為制劑原料使用時(shí)，大多采用毒性較低的炮制品千金子霜，故對(duì)其瀉下成分進(jìn)行有效控制是很有必要的。目前，《中國(guó)藥典》2010年版收載的千金子霜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并不完善，沒(méi)有 “檢查”項(xiàng)和主要瀉下成分 “TLC鑒別”及“含量測(cè)定”項(xiàng)。目前，迄今尚未見(jiàn)對(duì)不同產(chǎn)地千金子霜樣品進(jìn)行系統(tǒng)質(zhì)量研究的文獻(xiàn)報(bào)道。

3.2 本實(shí)驗(yàn)對(duì)瀉下成分千金子甾醇和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯TLC鑒別中樣品的提取方法、點(diǎn)樣量、展開(kāi)劑種類、溶劑比例等進(jìn)行了篩選，最終確定了鑒別方法。由圖2可知，10批千金子霜的TLC在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上，均出現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)，除廣西千金子霜斑點(diǎn)顏色略淡外，其它產(chǎn)地樣品無(wú)明顯差異。

3.3 由表1和表2可知，5個(gè)產(chǎn)地10批千金子霜的含水量均較低，在5.55%～7.22%之間，總灰分含有量在5.95%～6.82%之間，酸不溶性灰分含有量在0.12%～0.45%之間，略有差別。另外，含油量在18.04%～20.00%之間，符合藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。

3.4 10批千金子霜中兩種瀉下成分的含有量分別在0.134%～0.182%和0.212%～0.248%之間，表明不同產(chǎn)地、批次之間兩者含有量差異不大。

3.5 本課題組前期報(bào)道了HPLC測(cè)定兩種瀉下成分的方法以及比較制霜前后兩者含有量的變化，用于探討千金子制霜的目的及原理［16］。本實(shí)驗(yàn)主要從完善千金子霜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)角度出發(fā)，以新制霜設(shè)備生產(chǎn)的10批千金子霜為研究對(duì)象，首次建立了兩種瀉下成分的TLC鑒別方法，并采用已建立的HPLC法測(cè)定其含有量，同時(shí)對(duì)水分、總灰分和酸不溶性灰分進(jìn)行了考察，這為今后進(jìn)一步完善千金子霜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。

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R284.1

B

1001-1528（2015）12-2769-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.045

2014-09-09

國(guó)家 “十一五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目 （2006BAI09B06-05）

李英霞 （1964—），女，碩士，教授，從事中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)與質(zhì)量控制研究。Tel：（0532）82991202，E-mail：li_yx1964@ 163.com