王 堯， 程宗琦， 吳 憩

（蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科，江蘇蘇州215006）

正交試驗(yàn)優(yōu)選絞股藍(lán)口服液的最佳工藝

王 堯， 程宗琦， 吳 憩

（蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科，江蘇蘇州215006）

目的 優(yōu)選絞股藍(lán)口服液的最佳工藝。方法 以絞股藍(lán)總皂苷為指標(biāo)，紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定其含有量，L9（34）正交試驗(yàn)法優(yōu)選最佳工藝。結(jié)果 最佳提取條件為12倍量水，煎煮3次，每次1 h。結(jié)論 該工藝穩(wěn)定可靠，可為制劑生產(chǎn)提供依據(jù)。

絞股藍(lán)口服液；絞股藍(lán)總皂苷；紫外-可見(jiàn)分光光度法；正交試驗(yàn)

絞股藍(lán)別名七葉膽、南人參，系葫蘆科植物絞股藍(lán)Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）Makino的干燥根狀莖或全草，在我國(guó)主要分布于秦嶺和長(zhǎng)江以南地區(qū)，如陜西安康、湖北神農(nóng)架、廣西金秀等，其中陜西安康為該植物原產(chǎn)地。中醫(yī)認(rèn)為，絞股藍(lán)具有清熱解毒、祛痰止咳、鎮(zhèn)靜安神、益氣強(qiáng)身等功效，藥理和臨床試驗(yàn)表明，其提取物具有明顯的降血脂、降血糖、抗?jié)儭⒖鼓[瘤、抗疲勞、抗衰老、保肝及增強(qiáng)免疫功能等作用，該植物的主要藥效成分為絞股藍(lán)總皂苷，其中絞股藍(lán)皂苷Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ、Ⅻ分別與人參皂苷Rb1、Rb3、Rd、K的結(jié)構(gòu)相同。本實(shí)驗(yàn)采用正交試驗(yàn)法對(duì)其工藝進(jìn)行優(yōu)化，以期獲得最佳工藝參數(shù)，為制劑生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

UV-1800型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) （日本島津公司）；AL-204型電子天平 （瑞士梅特勒-托利多公司）；RE-3000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 （上海亞榮生化儀器廠）；HHS型電熱恒溫水浴鍋 （天津市華北實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。

人參皂苷Rb1對(duì)照品 （批號(hào)110704-200420，中國(guó)食品藥品檢定研究院）。絞股藍(lán) （批號(hào)131116，產(chǎn)地陜西安康）。95%乙醇 （太倉(cāng)新太酒精有限公司）；甲醇、高氯酸、冰醋酸均為分析純 （天津市大茂化學(xué)試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同溶劑提取試驗(yàn)

2.1.1 提取溶劑的選擇 針對(duì)絞股藍(lán)所含的活性成分，本實(shí)驗(yàn)以絞股藍(lán)總皂苷含有量為指標(biāo)，比較水、70%乙醇對(duì)其提取率的影響。

2.1.2 提取方法

2.1.2.1 水提法 取絞股藍(lán)80 g，加入8倍量水，回流提取兩次，每次1 h，過(guò)濾，濾液合并，減壓濃縮至200 mL左右。

2.1.2.2 醇提法 取絞股藍(lán)80 g，加入8倍量70%乙醇，回流提取兩次，每次1 h，過(guò)濾，濾液合并，減壓濃縮至200 mL左右。

2.2 絞股藍(lán)總皂苷含有量測(cè)定方法學(xué)考察

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥的人參皂苷Rb1對(duì)照品10 mg，置于5 mL量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為2.0 mg/m L的貯備液。

2.2.2 樣品溶液的制備 按 “2.1.2.1”項(xiàng)下方法制備。

2.2.3 吸收波長(zhǎng)的確定 精密量取對(duì)照品貯備液100μL，置于15 mL具塞試管中，揮干甲醇，加入新配制的5%香草醛冰醋酸溶液0.4 mL、高氯酸1.6 mL，搖勻，密塞，置60℃水浴中加熱15 min后取出，立即用冷水冷卻至室溫，精密加入冰醋酸10 m L，搖勻。另精密量取甲醇溶液100μL，置于15 mL具塞試管中，同法操作，作為空白溶液，于400～800 nm處進(jìn)行紫外掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)。結(jié)果表明，人參皂苷Rb1在550 nm處有最大吸收。

2.2.4 線性關(guān)系的考察 精密量取對(duì)照品貯備液50、100、150、200、250μL，分別置于 15 mL具塞試管中，按“2.2.3”項(xiàng)下方法操作。另精密量取甲醇溶液250μL，置于15 mL具塞試管中，同法操作，作為空白溶液，在550 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以吸光度 （A）對(duì)人參皂苷Rb1取樣量（C）進(jìn)行回歸，得到回歸方程A=0.672C+0.020 2，r=0.990 9，說(shuō)明人參皂苷Rb1取樣量在0.10～0.50 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液100μL，按 “2.2.3”項(xiàng)下方法操作，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD。結(jié)果，RSD為0.11%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品溶液20μL，共5份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法操作，測(cè)得RSD為0.23%，說(shuō)明該方法重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品溶液20μL，分別在0、2、4、8、12、24 h測(cè)定吸光度。結(jié)果，RSD為1.02%，說(shuō)明樣

品溶液在24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取樣品溶液20μL，分別加入對(duì)照品溶液20、30、40μL，按 “2.2.3”項(xiàng)下方法操作，測(cè)得平均回收率為99.8%，RSD為1.08%。

2.3 不同提取方法結(jié)果的比較 精密量取提取液20μL，按 “2.2.3”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定吸收度，計(jì)算絞股藍(lán)總皂苷的含有量，結(jié)果見(jiàn)表1。由表可知，水和70%乙醇提取效果相當(dāng)，從經(jīng)濟(jì)效益角度考慮，絞股藍(lán)宜采用水煎煮的提取方法。

表1 不同提取溶劑對(duì)絞股藍(lán)總皂苷提取得率的影響

2.4 正交試驗(yàn)

2.4.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 為考察提取工藝條件對(duì)絞股藍(lán)總皂苷提取率的影響，采用L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行設(shè)計(jì)，對(duì)加水量 （A）、煎煮時(shí)間 （B）、煎煮次數(shù) （C）進(jìn)行工藝研究，以絞股藍(lán)總皂苷的含有量為指標(biāo)，確定工藝最佳參數(shù)。因素水平表見(jiàn)表2。

表2 因素水平

2.4.2 正交試驗(yàn)結(jié)果 按照因素水平進(jìn)行操作，將各樣品提取液濃縮成一定量，測(cè)定各正交樣品中絞股藍(lán)總皂苷的含有量，計(jì)算總皂苷提取率 （提取液中總皂苷量/藥材量×100%），結(jié)果見(jiàn)表3、表4。由表3可知，3個(gè)因素的極差順序?yàn)镃＞A＞B，因此C（煎煮次數(shù)）對(duì)提取工藝影響最大，其次為A（加水量），B（煎煮時(shí)間）影響最小。由表4可知，因素C對(duì)提取有顯著影響，A次之，B幾乎無(wú)影響。考慮成本因素，確定最佳提取工藝為A3B1C3，即藥材加12倍量水，煎煮3次，每次1 h。

表3 L9（34）正交試驗(yàn)

表4 方差分析

2.4.3 最佳提取工藝驗(yàn)證 按照正交試驗(yàn)所得的最佳提取工藝條件提取3批樣品，測(cè)定其總皂苷含有量。結(jié)果表明，該工藝重復(fù)性好、條件合理、穩(wěn)定可行，見(jiàn)表5。

表5 工藝條件的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇 在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，比較水和醇的提取效果，結(jié)合文獻(xiàn) ［3］，選擇70%乙醇進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果表明，水和70%乙醇提取對(duì)絞股藍(lán)總皂苷含有量無(wú)顯著性影響，但水提成本低，溶劑不需回收，而醇提須回收乙醇。因此，從經(jīng)濟(jì)效益、工藝步驟及安全角度考慮，本實(shí)驗(yàn)采用水煎煮工藝。

3.2 提取部位 絞股藍(lán)受產(chǎn)地氣候、土壤條件、采收時(shí)間、采樣部位等因素影響，其總皂苷的含有量會(huì)有很大不同。本實(shí)驗(yàn)雖未對(duì)絞股藍(lán)入藥部位進(jìn)行考察，但結(jié)合文獻(xiàn)［8］報(bào)道，絞股藍(lán)葉中總皂苷含有量比莖高4～5倍，而且以陜西安康產(chǎn)者為最優(yōu)［9］。因此，在工藝生產(chǎn)中大多選擇陜西安康產(chǎn)絞股藍(lán)葉作為入藥部位。

3.3 煎煮參數(shù) 正交試驗(yàn)結(jié)果顯示，煎煮次數(shù)對(duì)提取工藝影響最大，其次加水量，煎煮時(shí)間影響最小。綜合生產(chǎn)成本因素后，確定最佳工藝參數(shù)為12倍量水，煎煮3次，每次1 h。經(jīng)驗(yàn)證，該工藝條件穩(wěn)定可靠，可為制劑生產(chǎn)提供依據(jù)。

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1001-1528（2015）12-2767-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.044

2014-09-03

王 堯 （1983—），女，助理研究員，研究方向?yàn)獒t(yī)院制劑。Tel：（0512）67780477、13812777984，E-mail：wangyao01301 @126.com