傅倩晰，周 莉，唐 敏，張名均，唐曉君

（1.重慶醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與管理學(xué)院流行病學(xué)教研室，重慶 400016；2.重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院，重慶 400016；3.重慶市九龍坡區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 400050）

據(jù)世界衛(wèi)生組織 （WHO）報(bào)道：2011年中國人群中冠心病的死亡率位于全球冠心病死亡率的第2位。高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化疾病的一個(gè)危險(xiǎn)因素，且血脂異常是多因素疾病，不僅與環(huán)境和生活方式有關(guān)，而且與基因多態(tài)性有關(guān)。人載脂蛋白E（apolipoprotein E，APOE）基因位于19號(hào)染色體長臂3區(qū)，含有4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子。APOE主要是由肝臟合成的299個(gè)氨基酸組成的糖蛋白，并參與氨基酸多肽的合成及分泌，在脂蛋白代謝中起到重要作用，主要表達(dá)于大腦及肝臟［1］。APOE基因約束低密度脂蛋白 （LDL－C）的接收，從而促進(jìn)細(xì)胞脂蛋白交換和新陳代謝［2］。APOE具有遺傳多態(tài)性，并且構(gòu)成了3個(gè)常見的主要的異構(gòu)體E2、E3和E4，由此構(gòu)成了6種表型，即3種純合子E2／2、E3／3、E4／4和3種雜合子 E2／3、E2／4和E3／4。據(jù)研究［3］報(bào)道：APOE2表型攜帶者與低水平LDL－C有關(guān)聯(lián)，APOE4表型攜帶者與肥胖和血脂水平有密切關(guān)聯(lián)。但基因型與肥胖的交互作用對(duì)血脂水平的影響尚未見報(bào)道。本文作者以重慶市男性人群作為研究對(duì)象，采用基因芯片對(duì)基因進(jìn)行分型，分析APOE基因多態(tài)性與血脂的關(guān)系，為進(jìn)一步探討APOE基因?qū)ρ胺逝值挠绊憴C(jī)制提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 樣本為2014年重慶市3所醫(yī)院體驗(yàn)中心隨機(jī)抽取的男性體檢者356人，平均年齡（48.64±4.04）歲。其中高血脂患者242例作為病例組，空腹甘油三酯 （triacylglycerol，TG）≥2.26mmol· L－1或 血 漿 總 膽 固 醇 （total cholesterol，TC）≥5.72mmol·L－1；其余健康體檢者114人作為對(duì)照組 （TC＜5.72mmol·L－1且TG＜2.26mmol·L－1）。高膽固醇血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)第8版 《診斷學(xué)》，高甘油三酯血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù) 《中國成人血脂異常防治指南》［4］。所收集的研究對(duì)象均排除如冠心病、高血壓等其他心血管系統(tǒng)疾病、糖尿病和惡性腫瘤疾病史。本研究得到重慶醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)許可。所有研究對(duì)象均已簽署知情同意書。

1.2 調(diào)查方法 采用自行設(shè)計(jì)的調(diào)查表，由經(jīng)過培訓(xùn)的調(diào)查員完成。調(diào)查內(nèi)容包括一般情況、血壓、身高、體質(zhì)量、體質(zhì)量指數(shù) （BMI） ［BMI＝體質(zhì)量 （kg）／身高 （m）2］和腰臀比 （WHR）［WHR＝腰圍／臀圍］。肥胖的劃分以BMI和WHR為依據(jù)：BMI≥24kg·m－2為超重，BMI≥28kg·m－2為肥胖 （全身性肥胖）；男性 WHR≥0.90為腹型肥胖 （向心性肥胖）。

1.3 血樣采集及指標(biāo)檢測(cè) 空腹12h采外周靜脈血5mL。其中2mL置于干燥管，用以測(cè)定血脂水平，所有采集樣本均在三甲醫(yī)院檢驗(yàn)科完成生化指標(biāo)檢測(cè)；3mL置于EDTA抗凝管，用于基因芯片檢測(cè)。于－20℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 APOE基因分型 基因組DNA提?。翰捎肨iangen DP319－02抽提試劑盒 （中國天根公司），無水乙醇和異丙醇等常規(guī)化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純?；蚍中停哼x用基因芯片測(cè)序方法，基因芯片為上海百傲公司的Baio心血管易感基因芯片。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 調(diào)查結(jié)果采用Epidata 3.0軟件雙人錄入與整理，應(yīng)用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。定量資料的多組間比較采用F檢驗(yàn)，多組間兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)，采用多元線性回歸分析方法分析血脂水平與基因多態(tài)性、年齡及BMI的關(guān)聯(lián)性。

2 結(jié) 果

2.1 研究對(duì)象的臨床生物學(xué)特征 本組研究對(duì)象平均身高為 （168.40±7.27）cm，平均體質(zhì)量為（73.05±11.30）kg， 平 均 BMI 為 （25.62±11.15）kg·m－2；TC 為 （5.28±0.90）mmol·L－1，TG為 （2.03±1.39）mmol·L－1，高密度脂蛋白（LDL－C）為 （3.21±0.79）mmol·L－1，低密度脂蛋白 （HDL－C）為 （1.15±0.40）mmol·L－1。與對(duì)照組比較，病例組患者年齡、收縮壓 （SBP）、舒張壓 （DBP）、BMI和血漿 TC、TG、LDL－C、HDL－C及血糖 （Glu）水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。見表1。

表1 病例組和對(duì)照組研究對(duì)象的一般資料Tab.1 General characterisitics of subjects in case group and control group （）

表1 病例組和對(duì)照組研究對(duì)象的一般資料Tab.1 General characterisitics of subjects in case group and control group （）

＊ P＜0.05compared with control group.

）］Control 114 49.65±4.28 121.84±13.52 77.84±1 Group n Age（year） SBP（P／mmHg） DBP（P／mmHg） TC［cB／（mmol·L－1）］TG［cB／（mmol·L－1 0.32 4.71±0.50 1.12±0.32 Case 242 47.96±4.07＊ 125.50±14.51＊ 81.40±12.98＊ 5.52±0.93＊ 2.44±1.49＊Group n LDL－C［cB／（mmol·L－1）］HDL－C［cB／（mmol·L－1）］Glu［cB／（mmol·L－1）］BMI（kg·m－2）Control 114 2.82±0.57 1.27±0.39 5.10±0.65 24.29±2.95 Case 242 3.40±0.82＊ 1.10±0.40＊ 5.73±0.76＊ 26.21±3.32＊

2.2 APOE各等位基因的頻數(shù)分布及不同人群中APOE等位基因頻數(shù)的比較 共檢測(cè)出6種基因型，以 E3／3頻數(shù)最高 （69.10%），其次為 E2／3和 E2／2，E2／4 和 E3／4 型 均 較 少 見 （＜3%）。APOE等位基因E3頻數(shù)最高，占75.84%。病例組與對(duì)照組APOE基因型與等位基因頻數(shù)分布比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （χ2＝3.77，P＝0.24；χ2＝4.57，P＝0.10），病例組與對(duì)照組基因分布符合Hardy－Weinberg遺傳平衡定律，樣本具有群體代表性，見表2。與國內(nèi)不同民族和不同地區(qū)漢族人群比較，APOE基因等位基因頻數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），重慶漢族人群E3等位基因頻數(shù)均小于廣西壯族自治區(qū)漢族及壯族人群；與其他國家人群比較，APOE基因等位基因頻數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），E3等位基因頻數(shù)小于日本和德國，大于瑞典、新西蘭和非洲裔美國人。見表3。

表2 病例組和對(duì)照組APOE基因型與等位基因頻數(shù)分布Tab.2 Distribution of genotypic and allelic frequencies of APOE in case and control group ［n（η／%）］

表3 重慶市漢族人群與其他不同地區(qū)、不同民族人群APOE等位基因頻數(shù)比較Tab.3 Comparison of APOE allele frequencies in different ethnic Han population in Chongqing and other different regions［n（η／%）］

2.3 APOE基因不同基因型病例組患者血脂水平因雜合子E2／4、E3／4例數(shù)較少，同時(shí)根據(jù)功能基本相同原則，將E2／2、E2／3和E2／4基因型人群歸為APOE2組，E3／3基因型人群歸為APOE3組，E3／4、E4／4基因型人群歸為APOE4組。在病例組中，APOE基因不同基因型攜帶者TC水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。APOE4基因攜帶者的TC水平明顯高于APOE2、APOE3基因攜帶者，且APOE4基因型攜帶者血脂水平與APOE2基因型攜帶者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 APOE不同基因型與血脂水平的關(guān)聯(lián)性Tab．4 Association between different genotypes of APOE and blood lipid levels［，cB／（mmol·L－1）］

表4 APOE不同基因型與血脂水平的關(guān)聯(lián)性Tab．4 Association between different genotypes of APOE and blood lipid levels［，cB／（mmol·L－1）］

Group nTC TG HDL－C LDL－C Control 114 APOE2 4．17±0．48 1．22±0．31 1．19±0．24 2．83±0．44 APOE3 4．71±0．52 1．09±0．32 1．29±0．44 2．82±0．57 APOE4 4．79±0．46 1．11±0．35 1．37±0．18 2．49±1．06 PANOVA 0．938 0．217 0．432 0．491 Case 242 APOE2 5．37±0．89 2．42±1．31 1．07±0．23 3．25±0．80 APOE3 5．53±0．95 2．39±1．61 1．12±0．46 3．41±0．83 APOE4 6．00±0．73 2．92±0．73 1．00±0．19 3．73±0．66 PANOVA 0．039 0．356 0．389 0．083

2.4 影響血脂水平相關(guān)因素的多因素分析 分別以TC、TG、HDL－C和LDL－C為因變量，APOE基因型為自變量，調(diào)整年齡和BMI連續(xù)變量，進(jìn)行多元線性回歸分析，結(jié)果顯示：APOE基因型與TC水平呈正相關(guān)關(guān)系 （β＝0.948，P＝0.029，r＝0.157），與 TG 水平呈正相關(guān)關(guān)系 （β＝0.086，P＜0.01，r＝0.276），與 HDL－C水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系 （β＝－0.007，P＜0.01，r＝0.153）。見表5。

表5 影響血脂水平相關(guān)因素的多元線性回歸分析Tab.5 Multivariate liner analysis on related factors influcing blood lipid levels

3 討 論

本研究首次分析重慶市男性漢族人群APOE等位基因頻率分布、APOE基因型與血脂水平的關(guān)系，并利用多重線性回歸分析APOE基因型與BMI及WHR的交互作用。

在3個(gè)純合子基因型 （E2／3、E3／3和E4／4）和3個(gè)雜合子的基因型 （E2／3、E3／4和 E2／4）中，E3／3頻率最高，為69.10%，是男性人群中分布最廣的基因型，而E2／2、E4／4和E2／4頻率較低。這一研究結(jié)果與國內(nèi)外不同人種間的研究結(jié)果相符［1－3］。本研究將APOE基因型分析結(jié)果與其他中國地區(qū)、民族及其他國家地區(qū)的APOE基因型分布比較發(fā)現(xiàn)：E3等位基因在各個(gè)地區(qū)、民族中的分布最廣，但重慶地區(qū)的漢族男性人群中的APOE基因型與其他地區(qū)、其他人種分布仍有差異（P＜0.05）。不同人群不同種族APOE等位基因頻率不同，如在芬蘭E4等位基因頻率較高，約0.227，而在亞洲則較低，約為0.049±0.049［11］。E2／4和E3／4基因型人數(shù)少的原因可能是：在中國人群中，分布頻率最高的E3等位基因被認(rèn)為是野生型，頻率較低的等位基因E2和E4被認(rèn)為是變異型。

APOE是參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代謝的一種糖蛋白，其結(jié)合TC或TG形成一個(gè)脂蛋白粒子［12］。由于APOE2與受體的結(jié)合能力低并且肝臟攝取極低密度脂蛋白 （VLDL、）殘粒微粒 （CM）發(fā)生障礙，因此表現(xiàn)為高甘油三酯血癥；同時(shí)肝臟中的膽固醇相對(duì)減少，LDL－C受體上調(diào)，導(dǎo)致血液循環(huán)中肝臟對(duì)LDL－C較低的攝入，而TC基本取決于LDL－C水平，因此APOE2基因型表現(xiàn)為低TC和低LDL－C水平［13］。本研究針對(duì)這一問題，通過收集人群資料，得出APOE基因型分型：APOE2表型攜帶者的TC水平相對(duì)其他表型攜帶者更低，APOE4表型攜帶者的TC水平更高，這一研究結(jié)果與國內(nèi)外諸多報(bào)道相符［14－16］。同時(shí)也有研究［17］顯示：APOE基因多態(tài)性與TG之間無關(guān)聯(lián)性。但諸多文獻(xiàn)表明不論血脂異常與否，不同基因型與TC、LDL－C水平有密切關(guān)聯(lián)。本研究結(jié)果顯示：在血脂異常人群中，APOE基因多態(tài)性與TC水平有關(guān)聯(lián)，而在正常人群中APOE基因多態(tài)性對(duì)血脂的影響不大。本研究進(jìn)一步運(yùn)用多元線性回歸方程分析APOE基因型與血脂水平的關(guān)聯(lián)性發(fā)現(xiàn)：APOE基因型與TC和TG水平有關(guān)聯(lián)，且APOE基因型與TC呈正相關(guān)關(guān)系，單因素分析及多因素分析結(jié)果保持一致，說明APOE4有使TC升高的趨勢(shì)。但在線性回歸模型中，APOE基因多態(tài)性與LDL－C水平有關(guān)聯(lián) （P＝0.004），但整個(gè)模型無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＝0.057），說明校正年齡、BMI后，APOE基因多態(tài)性與LDL－C無關(guān)聯(lián)。在線性回歸模型中，APOE基因多態(tài)性與HDL－C水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，與TG水平呈正相關(guān)關(guān)系，但APOE基因與血脂水平無關(guān)聯(lián)，說明APOE基因多態(tài)性易受其他相關(guān)因素影響導(dǎo)致其在單因素分析中無意義，但經(jīng)過線性回歸模型的年齡和BMI值矯正后，與TG水平呈正相關(guān)關(guān)系。因此，本研究結(jié)果表明：APOE基因多態(tài)性與TC和TG有一定關(guān)聯(lián)。BMI值是影響TC和LDL－C的一個(gè)重要因素，但本研究加入了基因－BMI交互作用和基因－WHR交互作用后發(fā)現(xiàn)：雖然交互作用對(duì)LDL－C和TC有影響，但r值較小，且P＞0.05，因此也不能完全否認(rèn)APOE基因多態(tài)性與LDL水平和TC水平無關(guān)聯(lián)。

綜上所述，APOE基因多態(tài)性與血脂水平具有一定的關(guān)聯(lián)性，特別是對(duì)于TC水平。但本研究由于樣本量較少，對(duì)于其他血脂水平如TG、HDL－C和LDL－C與APOE基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)性研究的論證不夠充分，有待進(jìn)一步研究。

［1］Hu P，Qin YH，Jing CX，et al.Does the geographical gradient of ApoE4allele exist in China？A systemic comparison among multiple Chinese populations ［J］.Mol Biol Reports，2011，38 （1）：489－494.

［2］Singh PP，Singh M，Mastana SS.APOE distribution in world populations with new data from India and the UK ［J］.Annals of human biology，2006，33 （3）：279－308.

［3］陳 燕，趙 明，劉允桂，等.心肌梗死患者及其同胞者血脂水平和 ApoE基因分析 ［J］.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2003，7 （4）：316－319.

［4］中國成人血脂異常防治指南制訂聯(lián)合委員會(huì).中國成人血脂異常防治指南 ［J］.中華心血管病雜志，2007，35（5）：390－419.

［5］白千帆，朱世樂，王海燕，壯族與漢族載脂蛋白E基因頻率的比較 ［J］.北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，30（1）：91.

［6］Eto M， Watanabe K，Ishii K. Reciprocal effects of apolipoprotein E alleles（epsilon 2and epsilon 4）on plasma lipid levels in normolipidemic subjects ［J］.Clin Genet，1986，29 （6）：477－484.

［7］Eggertsen G，Tegelman R，Ericsson S，et al.Apolipoprotein E polymorphism in a healthy Swedish population：variation of allele frequency with age and relation to serum lipid concentrations［J］.Clin Chem，1993，39（10）：2125－2129.

［8］Assmann G，Schmitz G，Menzel HJ，et al.Apolipoprotein E polymorphism and hyperlipidemia ［J］.Clin Chem，1984，30 （5）：641－643.

［9］Wardell MR，Suckling PA，Janus ED.Genetic variation in human apolipoprotein E ［J］.J Lipid Res，1982，23 （8）：1174－1182.

［10］Anuurad E，Lu G，Rubin J，et al.ApoE genotype affects allele－specific apo ［a］levels for large apo ［a］sizes in African Americans：the Harlem－Basset Study ［J］.J Lipid Res，2007，48 （3）：693－698.

［11］Nakai K，F(xiàn)usazaki T，Zhang T，et al.Polymorphism of the apolipoprotein E and angiotensin I converting enzyme genes in Japanese patients with myocardial infarction ［J］.Coronary artery disease，1998，9 （6）：329－334.

［12］Kaneva AM，Bojko ER，Potolitsyna NN，et al.Plasma levels of apolipoprotein－E in residents of the European North of Russia［J］.Lipids Health Dis，2013，12：43.doi：10.1186／1476－511x－12－13.

［13］龍愛梅，左彥方，黃曉青，等.中國人群載脂蛋白E基因多態(tài)性與2型糖尿病相關(guān)性的薈萃分析［J］.循證醫(yī)學(xué)，2013，13（1）：57－60.

［14］Petkeviciene J，Smalinskiene A， Luksiene DI，et al.Associations between Apolipoprotein E genotype，diet，body mass index，and serum lipids in lithuanian adult population ［J］.PLoS One，2012，7 （7）：e41525.

［15］Machal J，Vasku A，Hlinomaz O，et al.Apolipoprotein E polymorphism is associated with both number of diseased vessels and extent of coronary artery disease in Czech patientswith CAD ［J］.Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub，2012，156 （2）：151－158.

［16］Setarehbadi R，Vatannejad A， Vaisi－Raygani A，et al.Apolipoprotein E genotypes of fertile and infertile men ［J］.Syst Biol Reprod Med，2012，58 （5）：263－267.

［17］Hsueh WC，Mitchell BD，Hixson JE，et al.Effects of the ApoE polymorphism on plasma lipoproteins in Mexican Americans ［J］.Ann Epidemiol，2000，10 （8）：524－531.