田惠中，徐佳男，簡(jiǎn)心璐，張 薇，顧文政，龔細(xì)妹，何迎春*

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙410208）

高血壓是指以血壓升高為主要臨床表現(xiàn)伴有或不伴有多種心血管危險(xiǎn)因素的綜合征[1]，血管緊張素I 轉(zhuǎn)化酶抑制藥（ACEI）、利尿藥是臨床上常用的聯(lián)合用于拮抗高血壓的藥物類(lèi)別，其中常用藥物分別有卡托普利、氫氯噻嗪等，但臨床研究表明長(zhǎng)期運(yùn)用卡托普利及利尿藥可能導(dǎo)致尿蛋白升高等腎損害作用[2]。 建瓴湯出自《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》，今有諸多醫(yī)家將其運(yùn)用于臨床治療高血壓病，且療效可觀[3-4]。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察建瓴湯對(duì)高鹽飼料復(fù)制的高血壓大鼠的血壓、 尿微量白蛋白(microalbuminuria，mALB）、尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetylbeta-D-glycosidase enzyme，NAG enzyme）、 光鏡下腎病理改變的影響，探討建瓴湯的降血壓及護(hù)腎作用。 現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 SPF 級(jí)雄性SD 大鼠60 只， 體質(zhì)量（235±15）g， 購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（湘）2011-0003。

1.1.2 試藥 （1）中藥：建瓴湯（懷山藥30 g，懷牛膝30 g，代赭石24 g，龍骨18 g，牡蠣18 g，生地黃18 g，白芍12 g，柏子仁12 g）由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房煎制并真空包裝， 每袋200 mL（含生藥0.81 g/mL）。 （2）西藥：卡托普利片由華中藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn) （規(guī)格25 mg/片， 批號(hào)：20130302）， 氫氯噻嗪片由山西云鵬制藥有限公司生產(chǎn)（規(guī)格25 mg/片，批號(hào)：A130104）。

1.1.3 飼料 普通飼料和8%高鹽飼料由湖南省中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心負(fù)責(zé)加工制成。

1.1.4 主要儀器 Softron BP-2010A 大鼠無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量?jī)x（北京軟隆科技有限責(zé)任公司）；大鼠尿NAG酶檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：201310)及大鼠尿mALB 檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：201310)購(gòu)于武漢貝茵萊生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 造模 60 只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)4 d 后，按隨機(jī)數(shù)字表法從60 只大鼠中隨機(jī)抽選10 只標(biāo)記為正常對(duì)照組，飼喂正常飼料及飲水。 另外50 只大鼠為造模組，用于復(fù)制高血壓大鼠模型[5]，飼喂高鹽飼料（含8.0%氯化鈉）和飲用0.85%氯化鈉液，復(fù)制期10 周，期間每周測(cè)定1 次大鼠尾動(dòng)脈壓，當(dāng)大鼠血壓比處理前高20 mmHg（大于正常血壓3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差值） 以上且高于115 mmHg 者確定為高血壓模型[6]。

1.2.2 分組 造模過(guò)程中死亡13 只大鼠（其中正常組3 只、造模組10 只），模型復(fù)制成功后，將喂養(yǎng)高鹽飼料的40 只大鼠再按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為5 組，即模型組8 只、中藥（予建瓴湯）組8只、西藥（予卡托普利）組8 只、西聯(lián)（予卡托普利加氫氯噻嗪） 組6 只、 中西 （予建瓴湯加卡托普利）組10 只。

1.3 給藥

中藥組按照人與動(dòng)物體表面積折算的等效劑量比值，灌胃含生藥16.8 g/（kg·d）建瓴湯；西藥組灌胃卡托普利15.6 mg/（kg·d）； 西聯(lián)組灌胃卡托普利15.6 mg/（kg·d）和氫氯噻嗪7.8 mg/（kg·d）；中西組灌胃卡托普利15.6 mg/（kg·d） 和建瓴湯16.8 g/（kg·d）； 正常對(duì)照組及模型對(duì)照組均灌胃生理鹽水52.0 mL/（kg·d），持續(xù)12 周，6 組大鼠均飼喂正常飼料及飲水。

1.4 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.4.1 標(biāo)本采集及制作 （1）24 h 尿液采集：末次給藥后即收集各組大鼠24 h 尿液， 尿液指標(biāo)使用試劑盒檢測(cè)。（2）腎組織切片制作：末次給藥后24 h處死大鼠，立即剝離雙腎，用生理鹽水沖洗，濾紙擦干。 每只大鼠的左右兩腎縱切分成兩個(gè)部分，各取其中一半用10%甲醛固定。 將甲醛固定的標(biāo)本經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明、浸蠟、包埋、石蠟切片后蘇木精-伊紅（HE）染色。

1.4.2 檢測(cè)指標(biāo) （1）血壓：造模及用藥期間每周測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈壓1 次，于造模后、用藥1月、用藥3月后，分別測(cè)定各組大鼠血壓值；（2）尿mALB；（3）尿NAG 酶濃度；（4）光鏡下觀察腎組織切片，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)不重疊的視野（×400）采集圖片。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血壓不同時(shí)段比較

造模前，各組大鼠血壓差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 造模完成后，各造模組大鼠血壓都高于正常組（P＜0.05 或P＜0.01），說(shuō)明造模成功；給藥1個(gè)月后，與正常組比較，西藥組、中西組、西聯(lián)組血壓無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），中藥組、模型組血壓均顯著高于正常組（P＜0.01）；與模型組比較，西藥組、中西組、西聯(lián)組血壓均顯著下降（P＜0.01），而中藥組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），說(shuō)明中西組、西藥組及西聯(lián)組降壓效應(yīng)相似，且西藥降壓效果較中藥快。 治療3個(gè)月后，與正常組比較，各用藥組大鼠血壓均恢復(fù)至正常水平，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而模型組血壓仍顯著高于正常組（P＜0.01），說(shuō)明各藥物均可有效治療高血壓。 結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠不同時(shí)間段血壓比較（±s，mmHg）

表1 各組大鼠不同時(shí)間段血壓比較（±s，mmHg）

注1： 藥物劑量：a=卡托普利15.6 mg/（kg·d）；b=建瓴湯16.8 g/（kg·d）；c=a+b；d=a+氫氯噻嗪7.8 mg/（kg·d）。 下表同。注2：與正常組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較＃＃P＜0.01；與西藥組比較☆☆P＜0.01。 下表同。

組 別正常組模型組西藥組中藥組中西組西聯(lián)組n 7 8 8 8 1 0 6藥物劑量——abcd造模前119±3 120±7 116±6 117±5 118±5 119±5造模后119±5 139±3**127±6*143±6**135±7**140±5**治療1月120±4 137±6**118±6＃＃136±1**126±8＃＃126±5＃＃治療3月117±3 141±6**112±6＃＃116±5＃＃118±6＃＃118±3＃＃

2.2 治療期3月后各組大鼠24 h 尿NAG 酶和mALB 濃度比較

治療期3月后， 各組大鼠NAG 酶和mALB 均顯著高于正常組（P＜0.01）；西藥組NAG 酶和mALB均顯著高于模型組（P＜0.01）；與西藥組比較，中藥組、中西組NAG 酶和mALB 均顯著降低（P＜0.01）；西聯(lián)組與西藥組之間NAG 酶和mALB 均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。 說(shuō)明模型組和各藥物治療組都有不同程度的腎功能損害，而中藥可顯著減輕西藥對(duì)腎功能的損害。 結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 治療3個(gè)月后各組大鼠24 h 尿NAG 酶和mALB 比較

2.3 各組大鼠腎組織病理學(xué)變化

正常組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)無(wú)明顯病理改變；模型組大鼠腎組織可見(jiàn)入球小動(dòng)脈管壁增厚、 管腔狹窄、細(xì)動(dòng)脈玻璃樣變性、腎小球硬化及萎縮等病理改變，說(shuō)明高血壓本身對(duì)腎臟有損害；西藥組與西聯(lián)組大鼠， 除表現(xiàn)模型組大鼠腎臟病理改變外，另有細(xì)胞廣泛性空泡變性、 腎小管上皮細(xì)胞脫落、腎小球肥大或萎縮、基底膜增厚，西藥組可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及細(xì)動(dòng)脈充血，總體來(lái)看，西聯(lián)組大鼠腎臟損害程度輕于西藥組，說(shuō)明卡托普利對(duì)腎臟具有損害作用，而氫氯噻嗪與卡托普利聯(lián)用能緩解其腎臟損害作用； 中藥組大鼠腎臟細(xì)胞偶見(jiàn)空泡變性，其余病理改變程度較模型組輕，說(shuō)明建瓴湯對(duì)腎臟有保護(hù)作用；中西組大鼠腎臟總體病理改變程度較模型組、西藥組、西聯(lián)組少，說(shuō)明建瓴湯與卡托普利聯(lián)用時(shí)能減輕卡托普利的腎損害作用，并且其效果優(yōu)于氫氯噻嗪與卡托普利聯(lián)用。結(jié)果見(jiàn)封三彩圖圖1。

3 討論

高血壓是引起腎功能損傷等疾病的重要危險(xiǎn)因素，由于其復(fù)雜性，大多數(shù)患者需要聯(lián)合治療和終生用藥，ACEI（如卡托普利）為高血壓治療的一線藥物[7]，單用本品能使大多數(shù)高血壓患者血壓控制在理想水平[1]，聯(lián)用利尿劑氫氯噻嗪能增強(qiáng)降血壓作用，但臨床研究表明長(zhǎng)期運(yùn)用卡托普利及利尿藥可能導(dǎo)致尿蛋白升高等腎損害現(xiàn)象[2]，而多項(xiàng)臨床研究表明建瓴湯具有良好的降壓效果[3-4]，故本實(shí)驗(yàn)通過(guò)探究建瓴湯聯(lián)合卡托普利對(duì)高血壓大鼠的降壓效應(yīng)及減輕腎的損害，為中西醫(yī)結(jié)合治療高血壓提供一個(gè)安全有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

腎臟既是血壓調(diào)節(jié)的重要器官，又是高血壓損害的主要靶器官之一。 高血壓的腎損害機(jī)制為動(dòng)脈內(nèi)高壓造成的血管病變，以局灶階段性腎小球硬化和缺血性腎小球萎縮為常見(jiàn)的病理改變，同時(shí)伴腎小管的萎縮和腎間質(zhì)纖維化等改變[8]。 腎小球?yàn)V過(guò)膜具有濾過(guò)血液功能，尿mALB 的排泄增加提示腎小球?yàn)V過(guò)膜損害，是腎損害的早期表現(xiàn)[9]，NAG 酶是一種位于溶酶體內(nèi)的酸性水解酶，當(dāng)腎近曲小管上皮細(xì)胞受損時(shí)，尿NAG 酶活性顯著升高，且早于其他尿酶。 因此尿NAG 酶是反映腎小管敏感且特異的指標(biāo)[10]。 兩者聯(lián)合測(cè)定可作為療效判斷的依據(jù)。

高血壓屬于中醫(yī)學(xué)中 “眩暈”、“頭痛”、“肝風(fēng)”等病癥范疇，血脈瘀阻、肝風(fēng)內(nèi)動(dòng)是本病的基本病機(jī)[11]，應(yīng)用中醫(yī)學(xué)辨證治療高血壓病能夠起到顯著的降壓效果[12]。 建瓴湯原方出自清末民初名醫(yī)張錫純所著《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》，用于治療肝陽(yáng)上亢或肝火上炎之頭痛、震顫等癥狀。 懷牛膝能活血通經(jīng)、引血下行、 兼補(bǔ)肝腎， 代赭石平肝潛陽(yáng)、重鎮(zhèn)降逆，二藥合用，平肝同時(shí)兼顧補(bǔ)益肝腎，共為君藥；龍骨、牡蠣助君藥潛陽(yáng)降逆，還兼有安神功效，共為臣藥；加用生地黃、懷山藥滋陰降火，白芍平肝木之火，三者共為佐藥；柏子仁甘平可養(yǎng)心安神而為佐使藥。 以上八味藥，配伍使用，共奏平肝潛陽(yáng)、補(bǔ)益肝腎、養(yǎng)心安神之功，從而調(diào)和陰陽(yáng)、和暢氣血，可以達(dá)到降壓同時(shí)顧護(hù)肝腎的療效。 何婷等[3]及佟文浩[4]發(fā)現(xiàn)建瓴湯對(duì)于陰虛陽(yáng)亢型原發(fā)性高血壓有良好的降壓及改善臨床癥狀的作用。

本研究結(jié)果表明： 單用建瓴湯達(dá)3月時(shí)對(duì)高血壓大鼠具有顯著降壓效應(yīng)； 建瓴湯與卡托普利聯(lián)用無(wú)協(xié)同降壓作用， 但能拮抗卡托普利對(duì)高血壓大鼠的腎臟損害作用， 其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1]楊寶峰.藥理學(xué)[M].第7 版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：240-244.

[2]郭桂軍.卡托普利聯(lián)用利尿藥治療高血壓的不良反應(yīng)[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2012，19（11）：63.

[3]何 婷，朱意球，許世雄.建瓴湯治療陰虛陽(yáng)亢型原發(fā)性高血壓30 例臨床觀察[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，18(6)：50-51.

[4]佟文浩.建瓴湯對(duì)陰虛陽(yáng)亢型原發(fā)性高血壓的臨床療效分析[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2013，11(3)：259.

[5]黃國(guó)均，黃勤挽.醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型——制作與應(yīng)用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007：185.

[6]顧德官，顧天華，宋代軍，等.實(shí)驗(yàn)性高血壓大鼠的血壓觀察[J].上海第二醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1985，2(5)：102.

[7]陶 蓉.腎素——血管緊張素系統(tǒng)抑制劑治療高血壓的研究進(jìn)展[J].上海醫(yī)藥，2013，19（1）：10-13.

[8]呂留強(qiáng)，趙 立，李曉波，等.厄貝沙坦/氫氯噻嗪對(duì)原發(fā)性高血壓伴早期腎損害尿微量白蛋白和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影響[J].實(shí)用心腦肺血管雜志，2012，20(1)：36.

[9]梁繼鐵，石延科.血清胱抑素C 和尿微量白蛋白聯(lián)合檢測(cè)對(duì)高血壓早期腎損害的診斷價(jià)值[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2014，9(4)：4.

[10]趙慶高，李 浩，楊惠民，等.不同中醫(yī)證型原發(fā)性高血壓病患者早期腎功能損害指標(biāo)比較[J].中醫(yī)雜志，2012，53(3)：318-320.

[11]安桐志，張明雪.高血壓病的病因病機(jī)淺析[J].湖南中醫(yī)雜志，2014，30（6）：129-130.

[12]施 暕.中成藥治療高血壓病用藥探析[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，33（12）：25-26.