王偉明，蔡智慧，劉金，梁義娟，馬幼菊，劉輝

臨床研究

聯(lián)合檢測血清DJ-1和CA125在上皮性卵巢腫瘤中的意義

王偉明1，蔡智慧1，劉金1，梁義娟1，馬幼菊1，劉輝2△

目的研究血清DJ-1蛋白聯(lián)合CA125在上皮性卵巢腫瘤診斷中的應(yīng)用價值。方法采用雙抗體夾心法和電化學(xué)發(fā)光法測定82例上皮性卵巢腫瘤患者（包括良性卵巢腫瘤16例，交界性卵巢腫瘤14例，卵巢癌52例）與80例同期住院的其他良性婦科疾病患者（對照組）血清DJ-1、CA125水平，分析兩種標(biāo)志物聯(lián)合檢測在診斷卵巢癌中的意義。結(jié)果卵巢腫瘤患者血清DJ-1和CA125水平明顯高于對照組（P＜0.05）；以對照組和非卵巢癌組進(jìn)行參照，血清DJ-1在卵巢癌中的臨界值分別為6.800 μg/L和6.965 μg/L；聯(lián)合檢測血清DJ-1和CA125的敏感度高于單項檢測指標(biāo)。結(jié)論DJ-1和CA125聯(lián)合檢測有助于卵巢癌的診斷，可作為很好的卵巢癌標(biāo)志物，提高早期卵巢癌的診斷率。

CA-125抗原；卵巢腫瘤；診斷；ROC曲線；DJ-1蛋白

卵巢腫瘤是女性生殖系統(tǒng)常見的三大惡性腫瘤之一，其中上皮性卵巢腫瘤占90%，由于該病早期癥狀不明顯且缺少特異性的早期診斷方法，多數(shù)患者在就診時已屬晚期，導(dǎo)致其成為婦科腫瘤中病死率最高的疾?。?］。因此上皮性卵巢癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷尤為重要。目前臨床主要依靠檢測患者血清CA125水平和婦科超聲來進(jìn)行診斷，但是血清CA125在靈敏度和特異度方面均存在一定的局限性。筆者前期發(fā)現(xiàn)DJ-1蛋白在上皮性卵巢癌患者血清中高表達(dá)，可以作為一種診斷卵巢癌的潛在血清標(biāo)志物［2］。本研究通過對上皮性卵巢腫瘤患者的血清CA125、DJ-1進(jìn)行聯(lián)合檢測，探討其在上皮性卵巢腫瘤診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2013年1月—2014年3月在我院住院的上皮性卵巢腫瘤患者82例為病例組，其中良性卵巢腫瘤16例，交界性卵巢腫瘤14例，卵巢癌52例（手術(shù)病理分期Ⅰ期10例，Ⅱ期12例，Ⅲ期23例，Ⅳ期7例），年齡35～

76歲。選擇同期住院的卵巢正常而患子宮肌瘤、子宮腺肌病、子宮脫垂、功能失調(diào)性子宮出血等其他良性婦科疾病的患者80例為對照組，年齡39～75歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)參考第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》教材，以病理結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分組。各組間年齡比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

1.2 檢測方法所有研究對象術(shù)前抽取空腹肘正中靜脈血4 mL，室溫下放置30 min后8℃離心15 min分離血清，置于-70℃冰箱保存。血清中DJ-1蛋白的檢測采用鼠抗人DJ-1單克隆抗體和兔抗羊生物化素二抗行雙抗體夾心法測定。其中DJ-1單克隆抗體購自Santa Cruz生物科技公司，SABC試劑盒和兔抗羊生物化素二抗購自武漢博士德生物工程公司。采用WD-2102A型全自動酶標(biāo)儀對DJ-1蛋白含量進(jìn)行檢測。CA125檢測采用美國ARCHITECT CI8200型全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，根據(jù)化學(xué)發(fā)光發(fā)射的量計算各標(biāo)志物的濃度，以≥35 IU/mL為陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)。檢測方法均參照說明書進(jìn)行。對兩種指標(biāo)的檢測結(jié)果進(jìn)行比較，用ROC曲線探討DJ-1的診斷價值并界定其臨界值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。其中計量資料呈正態(tài)分布采用表示，兩組間比較采用成組設(shè)計t檢驗，多組間比較采用完全隨機(jī)設(shè)計方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用LSD-t檢驗；計量資料呈偏態(tài)分布采用M（Q）表示，組間比較采用非參數(shù)秩和檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清中DJ-1蛋白和CA125的含量卵巢腫瘤患者血清DJ-1和CA125水平明顯高于對照組（P＜0.05）。其中卵巢癌患者血清DJ-1和CA125含量高于交界性卵巢腫瘤和良性卵巢腫瘤患者；交界性卵巢腫瘤患者血清DJ-1高于良性卵巢腫瘤患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。不同手術(shù)病理分期的卵巢癌患者血清DJ-1蛋白含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），而血清CA125含量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

Tab.1Comparison of age and serum expressions of DJ-1 protein and CA125 between four groups表1 各組患者年齡、血清DJ-1和CA125含量比較

2.2 血清DJ-1在卵巢癌中臨界值的確定根據(jù)診斷試驗的靈敏度和特異度繪制DJ-1的ROC曲線，進(jìn)行診斷試驗效能的評價。以對照組為參照時ROC曲線下面積為0.928，選擇ROC曲線最靠近左上方的Youden指數(shù)（即正確指數(shù)）最大的切點為最佳截斷點，DJ-1診斷卵巢癌的最大Youden指數(shù)（0.894）對應(yīng)的截點是6.800 μg/L，即臨界值為6.800 μg/L。以非卵巢癌患者為參照時ROC曲線下面積為0.866，DJ-1診斷卵巢癌的最大Youden指數(shù)（0.802）對應(yīng)的截點是6.965 μg/L，即臨界值為6.965 μg/L。見圖1、2。

Tab.2Comparison of serum expressions of DJ-1 protein and CA125 in four different pathological groups of ovarian cancers表2 不同手術(shù)病理分期卵巢癌患者血清DJ-1和CA125含量比較［M（Q）］

Fig.1ROC curve of DJ-1 in prediction of ovarian cancer with control group for reference圖1 以對照組為參照時DJ-1的ROC曲線

Fig.2ROC curve of DJ-1 in prediction of ovarian cancer with nonovarian cancer group for reference圖2 以非卵巢癌患者為參照時DJ-1的ROC曲線

2.3 血清DJ-1蛋白和CA125單獨和聯(lián)合檢測對上皮性卵巢癌的診斷價值以對照組為參照，DJ-1診斷卵巢癌的敏感度和Youden指數(shù)高于CA125；而特異度低于CA125。并聯(lián)檢測（任何一項檢測結(jié)果為陽性就作為陽性）時，敏感度和Youden指數(shù)均高于單項檢測指標(biāo)。以非卵巢癌患者為參照，DJ-1的敏感度、特異度、Youden指數(shù)均高于CA125。并聯(lián)

檢測時，敏感度高于單項檢測指標(biāo)，見表3。

Tab.3 The value of serum DJ-1 protein and CA125 in diagnosis of ovarian cancer表3 血清DJ-1蛋白和CA125對上皮性卵巢癌的診斷價值（%）

3 討論

目前臨床中最常用的診斷上皮性卵巢腫瘤的血清標(biāo)志物是CA125，但有少數(shù)卵巢癌患者不表達(dá)，且在早期檢出率較低，同時CA125在盆腔炎癥、子宮內(nèi)膜異位癥等良性疾病及其他臟器腫瘤中也會出現(xiàn)升高，因此應(yīng)用CA125診斷卵巢癌時敏感度和特異度都有一定的局限性［3-5］。尋找一種能夠早期診斷卵巢癌的方法一直是醫(yī)學(xué)界所關(guān)注的熱點。

作為新發(fā)現(xiàn)的一種絲裂原依賴性癌基因，DJ-1基因已經(jīng)成為近來研究的焦點［6-7］。DJ-1基因位于染色體1p36PARK7點，故又名PARK7，含有8個外顯子，長度24 ku，可編碼一個含189個氨基酸的DJ-1蛋白，分子質(zhì)量為21 ku。國外最新研究表明DJ-1蛋白在多種腫瘤中高表達(dá)，且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)［8-10］。為了解血清DJ-1蛋白在上皮性卵巢腫瘤中的診斷作用，本研究比較了卵巢癌、交界性卵巢腫瘤、良性卵巢腫瘤、其他婦科良性疾病患者血清中DJ-1蛋白水平的差異，發(fā)現(xiàn)卵巢腫瘤患者血清DJ-1水平明顯高于對照組，且卵巢癌患者血清DJ-1含量高于交界性卵巢腫瘤和良性卵巢腫瘤患者，交界性卵巢腫瘤患者血清DJ-1高于良性卵巢腫瘤患者。表明血清DJ-1在卵巢良、惡性腫瘤分布不同，對篩查卵巢惡性腫瘤有顯著的作用。相對于CA125的應(yīng)用，本研究發(fā)現(xiàn)無論是以對照組還是以非卵巢癌患者為參照，血清DJ-1蛋白診斷卵巢癌的敏感度和Youden指數(shù)均高于CA125，且不同手術(shù)病理分期的卵巢癌患者血清DJ-1蛋白含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示DJ-1蛋白在卵巢癌的早期診斷中就表現(xiàn)出較高的診斷價值，可以作為一種新的血清學(xué)標(biāo)志物來提高卵巢癌診斷的敏感性，與前期研究結(jié)論相同［2，11］。但是由于DJ-1蛋白并非僅在卵巢腫瘤組織表達(dá)，其他組織和類型的腫瘤中也有表達(dá)［12-14］，因此其診斷特異度并未較CA125的特異度有較大幅度的提高。為進(jìn)一步提高診斷卵巢癌的敏感度，本研究對血清中DJ-1和CA125的含量進(jìn)行了并聯(lián)檢測，發(fā)現(xiàn)血清DJ-1和CA125聯(lián)合檢測的敏感度高于單項檢測指標(biāo)，可以更大限度減少漏診率，提高卵巢癌早期診斷的能力，在卵巢癌早期無創(chuàng)性診療中具有廣闊的應(yīng)用前景。

由于血清DJ-1試劑的開發(fā)及臨床研究均在國外，我國人群中還沒有明確的參考值范圍。本研究應(yīng)用ROC曲線來探尋DJ-1診斷卵巢惡性腫瘤的最佳界值點，表明參考人群的選擇對診斷臨界點的確定非常重要，以所有非卵巢癌患者為參照時DJ-1診斷臨界點高于以對照組作參考人群的診斷界值點，差別可能由于所選擇樣本的疾病種類不同，且所檢測血清標(biāo)本均為凍存標(biāo)本而非新鮮血清，導(dǎo)致血清DJ-1發(fā)生降解影響最終結(jié)果。因此在以后的研究中將充分考慮到不同人群、不同疾病的個體差異來進(jìn)行更大規(guī)模的臨床試驗，以確立血清DJ-1診斷卵巢癌的最佳診斷區(qū)間。

［1］Hirata Y，Murai N，Yanaihara N，et al.MicroRNA-21 is a candi?date driver gene for 17q23-25 amplification in ovarian clear cell carcinoma［J］.BMC Cancer，2014，14（1）:799.doi:10.1186/1471-2407-14-799.

［2］Liu H，Wang WM，Cai ZH，et al.The expression of serum DJ-1 pro?tein and its significance in ovarian cancer［J］.Tianjin Med J，2014，42（9）:920-922.［劉輝，王偉明，蔡智慧，等.DJ-1在卵巢癌患者血清中的表達(dá)及意義［J］.天津醫(yī)藥，2014，42（9）:920-922］.doi: 10.3969/tjyy.j.issn.0253-9896.2014.09.019.

［3］Karadag B，Kocak M，Kayikcioglu F，et al.Risk for malignant and borderline ovarian neoplasms following basic preoperative evaluation by ultrasonography，ca125 level and age［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2014，15（19）:8489-8493.doi:10.7314/APJCP.2014.15.19.8489.

［4］Cohen JG，White M，Cruz A，et al.In 2014，can we do better than CA125 in the early detection of ovarian cancer［J］？World J Biol Chem，2014，5（3）:286-300.doi:10.4331/wjbc.v5.i3.286.

［5］Gulec UK，Paydas S，Guzel AB，et al.The relationship between ovarian volume and serum CA-125 levels［J］.Eur J Gynaecol Oncol，2014，35（3）:280-283.doi:10.1093/jnci/dju262.

［6］Zhu XL，Wang ZF，Lei WB，et al.DJ-1:a novel independent prognostic marker for survival in glottic squamous cell carcinoma［J］.Cancer Sci，2010，101（5）:1320-1325.doi:10.1111/j.1349-7006.2010.01531.x.

［7］Wilhelmus MM，Nijland PG，Drukarch B，et al.Involvement and in?terplay of Parkin，PINK1，and DJ1 in neurodegenerative and neuro?inflammatory disorders［J］.Free Radic Biol Med，2012，53（4）:983-992.doi:10.1016/j.freeradbiomed.2012.05.040.

［8］He XY，Liu BY，Yao WY，et al.Serum DJ-1 as a diagnostic marker and prognostic factor for pancreatic cancer［J］.J Dig Dis，2011，12

［9］Bande MF，Santiago M，Blanco MJ，et al.Serum DJ-1/PARK 7 is a potential biomarker of choroidal nevi transformation［J］.Invest Oph?thalmol Vis Sci，2012，53（1）:62-67.doi:10.1167/iovs.11-7948.

［10］Osman WM，Abd El，Atti RM，et al.DJ-1 and androgen receptor im?munohistochemical expression in prostatic carcinoma:a possible role in carcinogenesis［J］.J Egypt Natl Canc Inst，2013，25（4）:223-230.doi:10.1016/j.jnci.2013.08.001.

［11］Wang WM，Liu H，Cai ZH，et al.Expression of DJ-1 and its signifi?cance in ovarian cancer［J］.Maternal and Child Health Care of Chi?na，2014，29（14）:2243-2245.［王偉明，劉輝，蔡智慧，等.DJ-1在卵巢癌中的表達(dá)及意義［J］.中國婦幼保健，2014，29（14）:2243-2245］.doi:10.7620/zgfybj.j.issn.1001-4411.2014.14.42.

［12］Tsiaousidou A，Lambropoulou M，Chatzitheoklitos E，et al.B7H4， HSP27 and DJ-1 molecular markers as prognostic factors in pancre?atic cancer［J］.Pancreatology，2013，13（6）:564-569.doi:10.1016/j. pan.2013.10.005.

［13］Kawate T，Iwaya K，Kikuchi R，et al.DJ-1 protein expression as a predictor of pathological complete remission after neoadjuvant che?motherapy in breast cancer patients［J］.Breast Cancer Res Treat，2013，139（1）:51-59.doi:10.1007/s10549-013-2523-0.

［14］Merikallio H，P??kk? P，Kinnula VL，et al.Nuclear factor erythroidderived 2-like 2（Nrf2）and DJ1 are prognostic factors in lung can?cer［J］.Hum Pathol，2012，43（4）:577-584.doi:10.1016/j.hump?ath.2011.05.024.

（2014-11-21收稿 2015-05-29修回）

（本文編輯 魏杰）

The significance of detecting serum DJ-1 protein combined with CA125 in epithelial ovarian tumors

WANG Weiming1，CAI Zhihui1，LIU Jin1，Liang Yijuan1，Ma Youju1，LIU Hui2△
1 Department of Obstetrics and Gynecology，Affiliated Hospital of Hebei University，Baoding 071000，China；2 College of Public Health of Hebei University△

ObjectiveTo explore the diagnostic value of detecting serum DJ-1 protein combined with CA125 for epi?thelial ovarian tumors.MethodsDouble antibody sandwich method and electrochemiluminescence immunoassay were used to determine the serum levels of DJ-1 protein and CA125 in 82 cases of epithelial ovarian tumors and 80 non-ovarian tumor cases（control group）.The clinical significance of detecting serum DJ-1 protein combined with CA125 was analyzed. ResultsThe expression levels of DJ-1 and CA125 were significantly higher in ovarian tumor group than those in the con?trol group（P＜0.05）.The critical value of serum DJ-1 was 6.800 μg/L and 6.965 μg/L in ovarian cancer group compared with the control group and non-ovarian tumor group.The sensitivity of combined detection of DJ-1 and CA125 was higher than that of any marker alone.ConclusionThe detecting serum levels of DJ-1 combined with CA125 are helpful to the diagnosis of ovarian cancer，which can be a good marker of ovarian cancer and may improve the early diagnosis rate of ovarian cancer.

CA-125 antigen；ovarian neoplasms；diagnosis；ROC curve；DJ-1

R737.31

A DOI：10.11958/j.issn.0253-9896.2015.11.022

）:131-137.

10.1111/j.1751-2980.2011.00488.x.

河北省科技支撐計劃項目（132777163）；河北省計生委2013年計劃項目（2013-B05）

1河北大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科（郵編071000）；2河北大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院

王偉明（1977），女，副主任醫(yī)師，副教授，碩士，主要從事婦科臨床研究

△通訊作者E-mail:liuhui@hbu.cn