張會玲，李世英△，李崢，張晉霞，賀永貴，劉斌

缺血預適應對局灶性腦缺血再灌注大鼠海馬CA1區(qū)低氧誘導因子-1α、血管內(nèi)皮生長因子表達的影響

張會玲1，李世英1△，李崢2，張晉霞1，賀永貴1，劉斌1

目的觀察缺血預適應后局灶性腦缺血再灌注大鼠缺血側(cè)海馬CA1區(qū)低氧誘導因子（HIF）-1α、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達的變化，探討缺血預適應的腦保護機制。方法雄性SD大鼠隨機分為3組：假手術(shù)（SO）組、腦缺血（MCAO）組和缺血預適應（BIP）組，后兩組按缺血后再灌注時間不同分為再灌注2、6、12、24、48、72 h 6個亞組。制備大鼠局灶性腦缺血預適應模型，采用免疫組織化學法與Western blot法觀察腦缺血后再灌注各個時間點海馬CA1區(qū)HIF-1α和VEGF的表達變化。結(jié)果SO組未見神經(jīng)功能缺損癥狀，與MCAO組相比，BIP組再灌注各時間點神經(jīng)功能缺損評分低（P＜0.05）。MCAO組、BIP組HIF-1α、VEGF陽性細胞及蛋白表達均于再灌注2 h開始增多，6～12 h表達遞增，24 h表達至高峰，隨后表達減少，72 h表達仍高于SO組。兩組各時間點HIF-1α和VEGF陽性細胞及蛋白表達均高于SO組（P＜0.05）。除再灌注2 h、6 h MCAO組與BIP組HIF-1α的陽性細胞表達差異無統(tǒng)計學意義外，2組各時間點VEGF陽性細胞表達、HIF-1α、VEGF蛋白表達均是BIP組高于MCAO組（P＜0.05）。結(jié)論腦缺血預適應可能通過上調(diào)HIF-1α、VEGF的表達，發(fā)揮腦保護作用。

缺氧缺血，腦；芳香烴受體核轉(zhuǎn)位子；血管內(nèi)皮生長因子類；低氧誘導因子1-α；血管內(nèi)皮生長因子

給予動物短暫性全腦或局灶性腦缺血，即缺血預適應，對間隔一定時間后的嚴重缺血有保護作用，可縮小缺血損傷的體積，減輕神經(jīng)功能缺損，即缺血耐受（ischemic tolerance，IT），涉及腺苷［1］、細胞自噬［2］、低氧誘導因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）［3］、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）［4］等的變化。HIF-1α對低氧極其敏感［5］，是細胞調(diào)節(jié)血管生成的主要信號蛋白，對腦缺血后血管再生以及促進側(cè)枝循環(huán)建立、挽救半暗區(qū)腦組織發(fā)揮著重要作用，其下游基因中以VEGF的成血管作用最具有代表性。研究表明，HIF-1α、VEGF作為重要分子參與IT形成，但具體機制尚未闡明［6］。本實驗采用改良線栓法建立大鼠局灶性腦缺血預適應模型，動態(tài)觀察腦缺血預適應后再灌注不同時間點HIF-1α、VEGF的表達，探討兩者的腦保護作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組雄性SD大鼠130只，清潔級，體質(zhì)量200～250 g，鼠齡8周，購自北京華阜康生物科技股份有限公司。采用隨機數(shù)字表法分為3組：假手術(shù)（SO）組10只、腦缺血（MCAO）組60只和缺血預適應（BIP）組60只。后2組按缺血后再灌注時間不同分為再灌注2、6、12、24、48和72 h 6個亞組，每組10只，其中5只用于免疫組織化學法染色，余5只用于Western blot檢測。

1.2 實驗試劑兔抗大鼠HIF-1α、VEGF多克隆抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司），兔二步法檢測試劑盒（pv-6001，北京中山金橋生物技術(shù)有限公司），β-actin（碧云天生物技術(shù)研究所），快速SDS-PAGE凝膠制備試劑盒（北京莊盟國際生物基因科技有限公司）。

1.3 模型制備（1）BIP組：參照Longa線栓法進行造模，10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）腹腔注射麻醉大鼠成功后，頸部正中行約3 cm縱行切口，逐層分離組織，暴露右側(cè)頸總動脈（CCA），分離CCA、頸內(nèi)動脈（ICA）、頸外動脈（ECA）。經(jīng)ECA-ICA插入栓線，阻斷大腦中動脈起始部。以分叉處為標記，栓線插入深度為（18.0±0.5）mm，感覺到阻力時停止插線。缺血10 min作為預適應，然后拔出栓線形成再灌注。24 h后再次栓至大腦中動脈，缺血2 h，拔出栓線形成第2次再灌注，實現(xiàn)2次缺血再灌注，分別于再灌注2、6、12、24、48和72 h后取材。（2）MCAO組：除第1次栓線插入深度小于10 mm外，余步驟同BIP組。（3）SO組：2次栓線插入深度均小于10 mm，再灌注24 h后取材。

1.4 神經(jīng)功能評分參照Zea-Longa評分法進行大鼠神經(jīng)功能評分。0分：正?；顒印?分：提尾時左前肢呈內(nèi)收屈曲位。2分：爬行時向左轉(zhuǎn)圈。3分：行走時向左側(cè)傾倒。4分：不能自發(fā)行走，意識喪失。處死大鼠前各組均行神經(jīng)功能缺損評分，1～3分為造模成功。手術(shù)過程中死亡或術(shù)后發(fā)現(xiàn)腦出血者剔除。

1.5 免疫組織化學檢測取前囟前1 mm至前囟后2 mm之間的腦組織切塊，4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明、浸蠟，石蠟包埋，取厚度4 μm冠狀腦組織切片。采用pv-6001二步法染色，DAB顯色，HIF-1α、VEGF陽性表達呈棕黃色，VEGF陽性表達主要位于胞漿；HIF-1α陽性表達主要位于胞核，胞漿也可表達。每只大鼠取相似部位3張腦組織切片，首先低倍鏡下選擇互不重疊的6個視野，然后高倍鏡下計數(shù)陽性細胞，取平均數(shù)作為該大鼠陽性細胞的表達數(shù)量。

1.6 Western blot檢測大鼠麻醉后立即斷頭取腦，取蛋白上樣量50 μg，經(jīng)SDS-PAGE濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜，脫脂奶粉封閉。HIF-1α、VEGF一抗工作液（1∶100），4℃孵育過夜后，加入辣根過氧化物酶標記的二抗工作液（1∶2 000）室溫孵育2 h，ECL試劑顯影。以β-actin作對照，目的蛋白表達量=目的條帶灰度值/β-actin條帶灰度值。

1.7 統(tǒng)計學方法采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。采用均數(shù)±標準差表示。2組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD-t法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分結(jié)果術(shù)后，SO組大鼠活動正常，無神經(jīng)功能缺損癥狀（評分為0分）；MCAO組與BIP組于再灌注不同時間點均出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損癥狀。與MCAO組比較，BIP組各時間點神經(jīng)功能缺損評分均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

Tab.1Comparison of neural function defect score between two groups of rats表1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較（n=10，分）

Tab.1Comparison of neural function defect score between two groups of rats表1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較（n=10，分）

*P＜0.05，**P＜0.01

組別M C A O組B I P組t 2 h 1 . 7 0 ± 0 . 4 8 1 . 2 0 ± 0 . 4 2 2 . 4 6 6 * 6 h 2 . 2 0 ± 0 . 6 3 1 . 6 0 ± 0 . 5 2 2 . 3 2 4 * 1 2 h 2 . 6 0 ± 0 . 5 2 1 . 9 0 ± 0 . 5 7 2 . 8 8 5 *組別M C A O組B I P組t 2 4 h 2 . 8 0 ± 0 . 4 2 2 . 2 0 ± 0 . 6 3 2 . 4 9 6 * 4 8 h 2 . 5 0 ± 0 . 5 3 1 . 9 0 ± 0 . 5 7 2 . 4 4 9 * 7 2 h 2 . 2 0 ± 0 . 7 9 1 . 3 0 ± 0 . 4 8 3 . 0 7 7 * *

2.2 各組HIF-1α、VEGF陽性細胞表達結(jié)果MCAO組、BIP組HIF-1α、VEGF陽性細胞表達均于再灌注2 h即增多，6～12 h逐漸增多，24 h表達至高峰，隨后表達減少，72 h仍有較高水平表達。SO組有少量HIF-1α陽性細胞表達，24 h表達量為（4.36±0.30）個/視野。與MCAO組比較，除2 h、6 h外，余時間點BIP組HIF-1α陽性細胞表達明顯增多（P＜0.05）；2組各時間點表達均高于SO組，差異有統(tǒng)計學意義

（P＜0.05），見表2。SO組有少量VEGF陽性細胞表達，24 h表達量為（5.27±0.45）個/視野。與MCAO組比較，BIP組2、6、12、24、48和72 h VEGF陽性細胞表達明顯增多（P＜0.05）；2組各時間點表達均高于SO組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

Tab.2Comparison of HIF-1α positive cells between two groups of rats表2 各組HIF-1α陽性細胞比較（n=5，個/視野）

Tab.2Comparison of HIF-1α positive cells between two groups of rats表2 各組HIF-1α陽性細胞比較（n=5，個/視野）

*P＜0.05，**P＜0.01；a與2 h比較，b與6 h比較，c與12 h比較，d與24 h比較，e與48 h比較，P＜0.05；表3～5同

組別M C A O組B I P組t 2 h 1 6 . 0 8 ± 2 . 3 1 1 9 . 1 5 ± 3 . 0 0 1 . 8 2 9 6 h 2 5 . 6 7 ± 1 . 0 6 a 2 7 . 6 3 ± 1 . 7 8 a 2 . 1 0 8 1 2 h 2 8 . 7 3 ± 1 . 7 3 a b 3 3 . 1 4 ± 2 . 4 7 a b 3 . 2 6 8 * 2 4 h 3 9 . 8 4 ± 2 . 5 7 a b c 4 7 . 6 3 ± 1 . 9 9 a b c 5 . 3 3 6 * *組別M C A O組B I P組t 4 8 h 3 1 . 9 6 ± 2 . 6 4 a b c d 3 7 . 3 2 ± 1 . 2 9 a b c d 4 . 0 8 4 * * 7 2 h 2 2 . 3 9 ± 1 . 3 7 a b c d e 2 5 . 6 4 ± 1 . 7 7 a c d e 3 . 2 4 6 * F 1 8 4 . 5 3 0 * * 2 4 6 . 9 8 5 * *

Tab.3Comparison of VEGF positive cells between two groups of rats表3 各組VEGF陽性細胞比較（n=5，個/視野，）

Tab.3Comparison of VEGF positive cells between two groups of rats表3 各組VEGF陽性細胞比較（n=5，個/視野，）

組別M C A O組B I P組t 2 h 1 5 . 3 8 ± 1 . 1 7 1 7 . 6 9 ± 1 . 2 6 3 . 0 0 9 * 6 h 1 9 . 0 5 ± 1 . 1 4 a 2 2 . 7 2 ± 1 . 5 8 a 4 . 2 2 5 * * 1 2 h 2 6 . 0 0 ± 0 . 5 1 a b 2 9 . 6 4 ± 1 . 4 0 a b 5 . 4 6 4 * *組別M C A O組B I P組t 2 4 h 4 2 . 1 1 ± 4 . 2 7 a b c 4 8 . 2 4 ± 3 . 0 9 a b c 2 . 6 0 1 * 4 8 h 3 5 . 9 1 ± 4 . 2 0 a b c d 4 3 . 4 1 ± 3 . 9 6 a b c d 2 . 9 0 6 * 7 2 h 1 9 . 0 3 ± 2 . 4 7 a c d e 2 4 . 1 0 ± 3 . 4 2 a c d e 2 . 6 8 6 * F 1 2 2 . 1 3 1 * * 1 6 9 . 2 4 1 * *

2.3 各組HIF-1α、VEGF蛋白量測定結(jié)果MCAO組、BIP組隨再灌注時間的延長，HIF-1α、VEGF蛋白表達呈現(xiàn)規(guī)律性變化，再灌注2 h表達增加，6～12 h表達遞增，24 h達各時間峰值，72 h仍有較高水平表達。SO組有少量HIF-1α蛋白表達，24 h表達量為0.12±0.05。與MCAO組比較，BIP組2、6、12、24、48和72 h HIF-1α蛋白表達明顯升高（P＜0.05）；2組各時間點表達均高于24 h的SO組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表4，圖1、2。SO組有少量VEGF蛋白表達，24 h表達量為0.31±0.04。與MCAO組比較，BIP組2、6、12、24、48和72 h VEGF蛋白表達明顯升高（P＜0.05）；2組各時間點表達均高于SO組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表5，圖3、4。

Tab.4Comparison of HIF-1α protein between two groups of rats表4 各組HIF-1α蛋白表達比較（n=5，）

Tab.4Comparison of HIF-1α protein between two groups of rats表4 各組HIF-1α蛋白表達比較（n=5，）

組別M C A O組B I P組t 2 h 0 . 9 3 ± 0 . 0 2 1 . 0 3 ± 0 . 0 5 3 . 5 5 3 * * 6 h 0 . 9 9 ± 0 . 0 3 a 1 . 0 9 ± 0 . 0 9 a 2 . 3 5 7 * 1 2 h 1 . 2 0 ± 0 . 0 2 a b 1 . 2 6 ± 0 . 0 4 a b 2 . 6 8 2 *組別M C A O組B I P組t 2 4 h 1 . 3 5 ± 0 . 0 7 a b c 1 . 4 8 ± 0 . 1 0 a b c 2 . 3 3 0 * 4 8 h 1 . 1 7 ± 0 . 0 2 a b c d 1 . 2 9 ± 0 . 1 1 a b c d 2 . 4 7 2 * 7 2 h 1 . 0 0 ± 0 . 0 5 a c d e 1 . 0 9 ± 0 . 0 4 a c d e 3 . 0 3 7 * F 7 9 4 . 4 4 6 * * 6 7 0 . 7 9 3 * *

Fig.1The expression of HIF-1α protein in CA1 region of hippocampus in MCAO group圖1 MCAO組海馬CA1區(qū)HIF-1α蛋白表達

Fig.2The expression of HIF-1α protein in CA1 region of hippocampus in BIP group圖2 BIP組海馬CA1區(qū)HIF-1α蛋白表達

Tab.5Comparison of VEGF positive cells between two groups of rats表5 各組VEGF蛋白表達比較（n=5，）

Tab.5Comparison of VEGF positive cells between two groups of rats表5 各組VEGF蛋白表達比較（n=5，）

組別M C A O組B I P組t 2 h 0 . 9 1 ± 0 . 0 2 0 . 9 7 ± 0 . 0 3 3 . 5 7 9 * * 6 h 0 . 9 6 ± 0 . 0 4 a 1 . 0 3 ± 0 . 0 5 a 2 . 7 0 1 * 1 2 h 1 . 0 4 ± 0 . 0 5 a b 1 . 1 3 ± 0 . 0 7 a b 2 . 5 0 5 *組別M C A O組B I P組t 2 4 h 1 . 2 2 ± 0 . 0 3 a b c 1 . 3 0 ± 0 . 0 7 a b c 2 . 3 2 0 * 4 8 h 1 . 0 6 ± 0 . 0 4 a b d 1 . 1 4 ± 0 . 0 5 a b d 2 . 8 9 0 * 7 2 h 0 . 8 6 ± 0 . 1 0 b c d e 0 . 9 8 ± 0 . 0 2 c d e 2 . 7 7 7 * F 1 6 2 . 1 8 8 * * 1 9 3 . 1 5 8 * *

Fig.3The expression of VEGF protein in CA1 region of hippocampus in MCAO group圖3 MCAO組海馬CA1區(qū)VEGF蛋白表達

3 討論

3.1 腦缺血預適應腦缺血預適應是一種強大的內(nèi)源性腦保護機制，可以有效對抗腦缺血缺氧損傷，

促使機件產(chǎn)生一系列適應性、防御性反應［7］。HIF-1α是此保護作用的一個重要介導者，組織缺氧時，HIF-1α表達增加，誘導VEGF和血小板源性生長因子B等一系列基因的轉(zhuǎn)錄［8］，促進新生血管生成及微循環(huán)重建，抗細胞凋亡，改善局部能量代謝障礙等，從而改善腦組織缺血，減少組織再灌注損傷。本研究應用免疫組織化學法和Western blot法，從蛋白水平對HIF-1α和VEGF在局灶腦缺血預適應模型中的表達進行動態(tài)觀察。

Fig.4The expression of VEGF protein in CA1 region of hippocampus in BIP group圖4 BIP組海馬CA1區(qū)VEGF蛋白表達

3.2 HIF-1α與腦缺血預適應本研究顯示，再灌注2 h開始，HIF-1α陽性細胞及蛋白表達即可增加，再灌注2～12 h持續(xù)增加，并于再灌注24 h表達至各時間點峰值，而后表達逐漸減少。HIF-1是一種調(diào)節(jié)細胞內(nèi)氧代謝的關(guān)鍵因子，由氧調(diào)節(jié)亞單位α和結(jié)構(gòu)亞單位β兩個蛋白亞基組成。HIF-1β在細胞內(nèi)穩(wěn)定表達，而HIF-1α的表達受細胞內(nèi)氧濃度的精確調(diào)控。在氧濃度正常的情況下，HIF-1α通過26s蛋白酶體降解。在氧濃度降低的情況下（包括全身缺氧、全腦或局灶性腦缺氧等），HIF-1α被激活表達，并在一定氧濃度內(nèi)持續(xù)表達，待缺血半暗區(qū)供氧得到改善，HIF-1α對缺氧的敏感性降低，則HIF-1α的表達也隨之減少［9］。因此，HIF-1α的表達呈現(xiàn)一種先升高后降低的表達趨勢。有研究發(fā)現(xiàn)，在短暫性大腦中動脈閉塞模型中靜脈注射二甲基草酰甘氨酸，間接上調(diào)HIF-1α的表達，能有效減小梗死體積，改善腦組織局部供血［10］。本研究中，給予10 min的預缺血，BIP組HIF-1α陽性細胞表達除2 h、6 h較MCAO組無明顯差異外，余各時間點HIF-1α陽性細胞及蛋白表達均較MCAO組明顯增多，提示腦缺血預適應可刺激HIF-lα表達增加，發(fā)揮保護作用。

3.3 VEGF與腦缺血預適應VEGF是促進血管內(nèi)皮細胞有絲分裂的生長因子，能夠選擇性作用于內(nèi)皮細胞膜上的血管內(nèi)皮生長因子受體，誘發(fā)血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移；VEGF能夠增加內(nèi)皮細胞的間隙，引起血漿蛋白外滲，誘導間質(zhì)產(chǎn)生，從而促進血管新生，改善局部血液循環(huán)，延緩組織壞死［11］。VEGF能夠通過下調(diào)凋亡基因的表達，抑制反應性凋亡途徑的激活而發(fā)揮神經(jīng)保護作用。有學者證實，體外培養(yǎng)的細胞在無血清、低氧等環(huán)境中的存活率與VEGF表達上調(diào)密切相關(guān)［12］。低氧是刺激VEGF分泌的重要因素，缺血預適應可增加缺血半暗區(qū)細胞存活機會。曹巖巖等［13］提前給予大鼠Tem?pol預處理后發(fā)現(xiàn)，預處理組腦損傷程度低于缺血組，而且VEGF于相應時間點表達顯著增加，提示

VEGF的表達增加具有腦保護作用。本研究BIP組提前缺血10 min后發(fā)現(xiàn)，VEGF陽性細胞及蛋白表達明顯增加，提示VEGF的表達上調(diào)可能在腦缺血預適的腦保護作用中發(fā)揮重要作用。

3.4 HIF-1α與VEGF在腦缺血預適應中的相互作用VEGF作為HIF-1α的下游靶基因，受HIF-1α調(diào)控，參與腦缺血后血管形成、微循環(huán)重建及神經(jīng)細胞保護。Tsuzuki等［14］發(fā)現(xiàn)，缺乏缺氧反應元件啟動子的VEGF基因在低氧時表達并不增加，提示VEGF的表達是通過HIF-1α調(diào)控實現(xiàn)的。本研究顯示，VEGF的陽性細胞及蛋白表達趨勢與HIF-1α表達一致。Bernaudin等［15］在研究大鼠局灶性腦缺血時發(fā)現(xiàn)，給予正常壓力性低氧作為預適應，可使梗死體積減少約30%，且HIF-1α的含量及其靶基因VEGF在蛋白水平的表達升高，提示HIF-1α、VEGF可從蛋白水平誘導缺血預適應的腦保護作用形成。

綜上所述，預缺血10 min處理后，當機體再次遭受嚴重缺血時，HIF-1α被激活上調(diào)，進一步促進靶基因VEGF的表達，促進新生血管生成及側(cè)支循環(huán)建立，改善局部缺氧微循環(huán)，抑制神經(jīng)元凋亡，減輕再次缺血所致的神經(jīng)損傷，這可能是腦缺血預適應的腦保護機制之一。

［1］Rytk?nen KT，Renshaw GM，Vainio PP，et al.Transcriptional re?sponses to hypoxia are enhanced by recurrent hypoxia（hypoxia pre?conditioning）in the epaulette shark［J］.Physiol Genomics，2012，44（22）：1090-1097.doi：10.1152/physiolgenomics.00081.2012.

［2］Sheng R，Liu XQ，Zhang LS，et al.Autophagy regulates endoplas?mic reticulum stress in ischemic preconditioning［J］.Autophagy，2012，8（3）：310-325.doi：10.4161/auto.18673.

［3］Wacker BK，Perfater JL，Gidday JM.Hypoxia preconditioning in?duces stroke tolerance in mice via a cascading HIF，sphingosine ki?nase，and CCL2 signaling pathway［J］.J Neurochem，2012，123（6）：954-962.doi：10.1111/jnc.12047.

［4］Huang X，Su K，Zhou L，et al.Hypoxia preconditioning of mesen?chymal stromal cells enhances PC3 cell lymphatic metastasis ac?companied by VEGFR-3/CCR7activation［J］.J Cell Biochem，2013，114（12）：2834-2841.doi：10.1002/jcb.24629.

［5］Gupta B，Chiang L，Chae K，et al.Phenethyl isothiocyanate inhibits hypoxia-induced accumulation of HIF-1α and VEGF expression in

human glioma cells［J］.Food Chem，2013，141（3）：1841-1846.

［6］Guo XY，Mei YW.Advances in brain ischemic tolerance mechanisms［J］.Neural Injury and Functional Reconstruction，2012，7（6）：451-454.［郭曉燕，梅元武.腦缺血耐受機制的研究進展［J］.神經(jīng)損傷與功能重建，2012，07（6）：451-45］.doi：10.3870/sjsscj.2012.06.016.

［7］Branco Pricec，Zhang N，Schnelle M，et al.Endothelial cell HIF-1α and HIF-2α differentially regulate metastatic success［J］.Cancer Cell，2012，21（1）：52-65.doi：10.1016/j.ccr.2011.11.017.

［8］Sia D，Alsinet C，Newell P，et al.VEGF signaling in cancer treat?ment［J］.Curr Pharml Des，2014，20（17）：2834-2842.

［9］Wacker BK，Perfater JL，Gidday JM.Hypoxic preconditioning in?duces stroke tolerance in mice via a cascading HIF，sphingosine ki?nase and CCL2 signaling pathway［J］.J Neurochem，2012，123（6）：954-962.doi：10.1111/jnc.12047Source:PubMed.

［10］Nagel S，Papadakis M，Chen R，et al.Neuroprotection by dimethylox?alylglycine following permanent and transient focal cerebral isch?emia in rats［J］.J Cereb Blood Flow Metab，2011，31（1）：132-143. doi:10.1038/jcbfm.2010.60.

［11］Greenberg DA，Jin K.Vascular endothelial growth factors（VEGFs）and stroke［J］.Cell Mol Life Sci，2013，70（10）：1753-1761. doi:10.1007/s00018-013-1282-8.

［12］Cui W，Li W，Han R，et al.PI3-K/Akt and ERK pathways acti?vated by VEGF play opposite roles in MPP-induced neuronal apop? tosis［J］.Neurochem Int，2011，59（6）：945-953.doi:10.1016/j. neuint.2011.07.005.

［13］Cao YY，Ding XD，Meng LX，et al.Effects of tem poi precondition?ing on the expression of hypoxia inducible factor-1α and vascular endothelial growth factor after brain injure induced by cardiac ar?rest in rat［J］.Guangdong Medical Journaml，2014，35（4）：497-500.［曹巖巖，丁旭東，孟凌新，等.Tempol預處理對大鼠心肺復蘇后腦內(nèi)缺氧誘導因子-1α及血管內(nèi)皮生長因子變化的影響［J］.廣東醫(yī)學，2014，35（4）：497-500］.

［14］Tsuzuki Y，F(xiàn)ukumura D，Oosthuyse B，et al.Vascular endothelial growth factor（VEGF）modulation by targeting hypoxia-inducible factor-1a hypoxia response element VEGF cascade differentially regulates vascular response and growth rate in tumors［J］.Cancer Res，2000，60（22）：6248-625.

［15］Bernaudin M，Nedelec AS，Divoux D，et al.Normobaric hypoxia in?duces tolerance to focal permanent cerebra lischemia in association with an increased expression of hypoxia inducible factor-1 and its target genes，eryth ropoietin and VEGF，in the adult mouse brain［J］. J Cereb Blood Flow Metab，2002，22（4）：393-403.doi:10.1097/ 00004647-200204000-00003.

（2015-01-30收稿 2015-05-25修回）

（本文編輯 李鵬）

Effects of focal ischemic preconditioning on the expression of HIF-1α and VEGF in ischemia hippocampus CA1 region after focal cerebral ischemia/reperfusion in rats

ZHANG Huiling1，LI Shiying1△，LI Zheng2，ZHANG Jinxia1，HE Yonggui1，LIU Bin1
1 Department of Neurology，The Affiliated Hospital of Hebei Unite University，Tangshan 063000，China；2 Department of Neurology，Yutian County Hospital△

ObjectiveTo observe the changes of ischemic preconditioning on the expression of hypoxia inducible fac?tor（HIF）-1α and vascular endothelial growth factor（VEGF）in ischemia hippocampus CA1 region after focal cerebral isch?emia/reperfusion（I/R）in rats，and the mechanisms of brain protection from brain ischemia preconditioning（BIP）thereof. MethodsThe male SD rats were randomly divided into three groups：sham operation（SO）group，middle cerebral artery oc?clusion（MCAO）group and brain ischemia preconditioning（BIP）group.The MCAO group and BIP group were further divid?ed into six subgroups according to perfusion time after I/R including 2 h，6 h，12 h，24 h，48 h and 72 h.The ischemia pre?conditioning model rats were established.Immunohistochemistry and Western blot assay were used to observe the expres?sions of HIF-1α and VEGF in ischemia hippocampal CA1 region.ResultsNeurological function deficit was not observed in SO group.Compared with MCAO group，there was a lower neurological function deficit score in BIP group.In MCAO group and BIP group，the expressions of HIF-1α and VEGF positive cells and protein increased at 2 h after I/R，then gradu?ally increased from 6 h to12 h and reached the maximum level at 24 h，then gradually decreased.The levels were still higher at 72 h than those of SO group.The number of HIF-1α and VEGF positive cells and protein were significantly increased in MCAO group and BIP group than that of SO group（P＜0.05）.The number of HIF-1α positive cells was higher in BIP group than that in MCAO group except 2 h and 6 h reperfusion groups.The expression of VEGF positive cells，HIF-1α and VEGF protein were significantly higher in BIP group than those in MCAO group at different time points（P＜0.05）.Conclusion Ischemic preconditioning plays a protective role in brain，which may be related to up-regulation of HIF-1α and VEGF.

hypoxia-ischemia，brain；aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator；vascular endothelial growth fac?tors；HIF-1α；VEGF

R743.3

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.11.017

河北省2013年醫(yī)學科學研究重點課題計劃（20130382）

1河北聯(lián)合大學附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)一科（郵編063000）；2唐山玉田縣醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科

張會玲（1988），女，研究生在讀，主要從事腦血管疾病研究

△通訊作者E-mail：lishiying1970@sohu.com