劉艷，張海欣，魏穎，林峰，蔡木易

（中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院，北京市蛋白功能肽工程技術(shù)研究中心，北京 100015）

小麥低聚肽對H2O2所致HepG2細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用

劉艷，張海欣，魏穎，林峰，蔡木易*

（中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院，北京市蛋白功能肽工程技術(shù)研究中心，北京 100015）

分析小麥低聚肽氨基酸組成和相對分子質(zhì)量分布，并對其保護(hù)過氧化氫所致人肝癌細(xì)胞（HepG2）氧化損傷的作用進(jìn)行了研究。首先采用不同濃度小麥低聚肽作用HepG2細(xì)胞4 h，然后用150 μmol/L過氧化氫氧化損傷細(xì)胞4 h，以細(xì)胞存活率、細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）及丙二醛（MDA）含量評價小麥低聚肽對HepG2細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果表明，小麥低聚肽相對分子質(zhì)量小于1 000的組分高達(dá)93.44%，谷氨酸及脯氨酸含量較高；小麥低聚肽具有增加細(xì)胞存活率、抑制細(xì)胞內(nèi)ROS生成、降低細(xì)胞內(nèi)MDA含量的活性，對減少HepG2細(xì)胞的氧化應(yīng)激及提高細(xì)胞抗氧化能力具有較好的作用效果。本研究從細(xì)胞水平上揭示了小麥低聚肽對過氧化氫所致的肝臟損傷具有一定的預(yù)防保護(hù)作用。

小麥低聚肽；HepG2細(xì)胞；過氧化氫；氧化損傷

小麥低聚肽是以小麥谷朊粉為原料，經(jīng)過酶解、提純等步驟加工制得，具有均衡的氨基酸組成的肽類混合物。其水溶性好、穩(wěn)定性高、易于消化吸收、蛋白質(zhì)含量高［1］。大量研究表明，小麥低聚肽具有免疫調(diào)節(jié)［2］、保護(hù)腸黏膜［3］、抗氧化［4］等多種功能活性。

過氧化氫是一種重要的活性氧，極易透過細(xì)胞膜，其具有易于獲得及性質(zhì)相對穩(wěn)定的特點(diǎn)，因而成為研究細(xì)胞氧化損傷的重要工具［5］。雖然HepG2細(xì)胞是一種腫瘤細(xì)胞，但其所含的生物轉(zhuǎn)化代謝酶與人正常肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞具有同源性，因此被廣泛應(yīng)用于體外實(shí)驗(yàn)的篩選。過氧化氫進(jìn)入細(xì)胞后可形成高活性的自由基，作用于生物大分子物質(zhì)，引起脂質(zhì)過氧化等反應(yīng)，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。研究表明，機(jī)體的氧化應(yīng)激及氧化損傷與炎癥［6］、免疫力降低［7］、衰老［8］、動脈粥樣硬化［9］、糖尿?。?0］、癌癥［11］等疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)中以小麥低聚肽為研究對象，對其氨基酸組成和相對分子質(zhì)量分布進(jìn)行了分析。選取H2O2為誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的工具，建立肝細(xì)胞氧化損傷模型。采用此模型評價小麥低聚肽對HepG2細(xì)胞存活率、細(xì)胞內(nèi)ROS及MDA含量的影響，旨在為小麥低聚肽在健康保健食品中的開發(fā)及利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

小麥低聚肽，樣品為淡黃色粉末，由北京中食海氏生物技術(shù)有限公司提供，由浙江海氏生物科技有限公司制造。

人肝癌細(xì)胞HepG2，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心。

DMEM（高糖）培養(yǎng)基，Hyclone公司產(chǎn)品；胎牛血清（FBS），浙江天杭生物科技有限公司產(chǎn)品；胰蛋白酶，PBS，雙抗溶液（青霉素+鏈霉素），BCA蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒（增強(qiáng)型），MDA測定試劑盒，細(xì)胞裂解液，均為碧云天生物技術(shù)研究所產(chǎn)品；DCFHDA熒光探針，3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽（MTT），Sigma公司產(chǎn)品；二甲基亞砜（DMSO），Amresco公司產(chǎn)品；乙腈（色譜純），美國Fisher公司產(chǎn)品；鹽酸（優(yōu)級純），其他分析純試劑，北京化工廠產(chǎn)品。

1.2 儀器與設(shè)備

CKX-41型倒置相差顯微鏡，日本奧林巴斯公司制造；240i二氧化碳培養(yǎng)箱，美國Thermo公司制造；AC2-6S1型生物安全柜，新加坡ESCO公司制造；Spectra MR型酶標(biāo)儀，美國Dynex公司制造；Accuri C6型流式細(xì)胞儀，美國BD生物科學(xué)儀器及軟件公司制造；LC-20A高效液相色譜儀，日本島津公司制造；A300型氨基酸分析儀，德國Membrapure公司制造；3K-15型冷凍離心機(jī)，德國Sigma公司制造。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 氨基酸組成分析依據(jù)GB/T 5009.124-2003《食品中氨基酸的測定》，采用氨基酸自動分析儀對小麥低聚肽中的氨基酸組成進(jìn)行測定。

1.3.2 相對分子質(zhì)量分布分析采用高效液相色譜法對小麥低聚肽相對分子質(zhì)量進(jìn)行分析，色譜條件如下。色譜柱：TSK gel G2000 SWXL 300 mm× 7.8 mm；流動相：V（乙腈）∶V（水）∶V（三氟乙酸）=45∶55∶0.1；檢測波長：UV 220 nm；體積流量0.5 mL/ min，柱溫30℃，進(jìn)樣體積10 μL。4種不同相對分子質(zhì)量的肽標(biāo)準(zhǔn)品為：細(xì)胞色素C（MW12 500），桿菌酶（MW1 450），乙氨酸-乙氨酸-酪氨酸-精氨酸（MW451），乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸（MW189）。

1.3.3 HepG2細(xì)胞培養(yǎng)將HepG2細(xì)胞按3×105個/ mL接種于含有質(zhì)是分?jǐn)?shù)10%FBS、100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素的DMEM（高糖）培養(yǎng)基中（pH 7.2），37℃、質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%CO2及充分飽和濕度條件下孵育。待細(xì)胞融合至培養(yǎng)瓶的80%后，棄去舊培養(yǎng)液，用PBS沖洗一次，加入適量質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.25%胰蛋白酶消化，按照1∶3傳代培養(yǎng)。

1.3.4 實(shí)驗(yàn)分組及藥物處理實(shí)驗(yàn)分為：正常對照組；損傷模型組；小麥低聚肽實(shí)驗(yàn)組。其中小麥低聚肽作用質(zhì)量濃度為0.05、0.1、0.5、1、5、10 g/L。將處于對數(shù)生長期、狀態(tài)良好的細(xì)胞接種于培養(yǎng)板中孵育24 h；待細(xì)胞生長穩(wěn)定后，實(shí)驗(yàn)組加入含有不同濃度小麥低聚肽、不含F(xiàn)BS的DMEM（高糖）培養(yǎng)基溶液，對照組及模型組均加入不含F(xiàn)BS的DMEM（高糖）培養(yǎng)基溶液，孵育4 h；棄去培養(yǎng)液，模型組及實(shí)驗(yàn)組加入不含F(xiàn)BS、含有150 μmol/L H2O2的DMEM（高糖）培養(yǎng)液，對照組加入不含F(xiàn)BS的DMEM（高糖）基礎(chǔ)培養(yǎng)液，孵育4 h；棄上清液，取細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)檢測。

1.3.5 MTT法檢測細(xì)胞存活率調(diào)整HepG2細(xì)胞懸液濃度為1.2×105個/mL，接種于96孔板，每孔加入100 μL懸液。孵育24 h待細(xì)胞完全貼壁后，分別用含有不同濃度小麥低聚肽的培養(yǎng)液處理細(xì)胞，每個低聚肽濃度設(shè)置5復(fù)孔，同時設(shè)不加低聚肽的對照孔及模型孔，另設(shè)調(diào)零孔，置于培養(yǎng)箱中孵育4 h，隨后用150 μmol/L H2O2進(jìn)行損傷處理4 h。棄上清液，每孔加入100 μL含有0.5 g/L MTT的DMEM溶液，溫育4 h；去除培養(yǎng)液及MTT，加入DMSO 100 μL/孔，震蕩使結(jié)晶物充分溶解。570 nm和630 nm雙波長測定各孔光吸收值。細(xì)胞存活率：

式中，ODs和ODd分別為實(shí)驗(yàn)組與對照組的吸收值。

1.3.6 細(xì)胞內(nèi)ROS含量測定［12］調(diào)整HepG2細(xì)胞懸液濃度為1.0×105個/mL，接種于6孔板，每孔加入2 mL懸液。孵育24 h待細(xì)胞生長穩(wěn)定后，按實(shí)驗(yàn)分組方法處理細(xì)胞。待H2O2損傷4 h后，棄培養(yǎng)液，每孔加入終濃度10 μmol/L的DCFH-DA熒光探針，37℃避光反應(yīng)20 min后吸去探針，用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞2次，隨后采用胰酶消化細(xì)胞，離心除去上清液，PBS重懸細(xì)胞，并采用流式細(xì)胞儀測定活細(xì)胞的ROS相對強(qiáng)度。

1.3.7 MDA含量測定調(diào)整HepG2細(xì)胞懸液濃度為1.0×105個/mL，接種于24孔板，每孔加入500 μL懸液。孵育24 h后，按實(shí)驗(yàn)分組方法處理細(xì)胞。待H2O2損傷4 h后，棄上清液，用PBS洗1次細(xì)胞，每孔加入100 μL細(xì)胞裂解液使細(xì)胞裂解，于4℃、1 600 g離心10 min，取上清液作為樣本，參照碧云天生物技術(shù)研究所提供的MDA測定試劑盒和BCA蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒說明書對細(xì)胞內(nèi)的MDA和蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。結(jié)果以nmol/mg表示。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，組間比較采用t檢驗(yàn)，若P＜0.05，兩者有顯著性差異；若P＜0.01，兩者有極顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 小麥低聚肽氨基酸組成

表1結(jié)果顯示，小麥低聚肽中谷氨酸（Gln+Glu）含量最高，質(zhì)量分?jǐn)?shù)34.9%；其次是脯氨酸，質(zhì)量分?jǐn)?shù)13.05%；而堿性氨基酸含量較少。

小麥低聚肽中的谷氨酰胺是一種重要的具有特殊營養(yǎng)作用的條件性必需氨基酸及腸道必需氨基酸。研究表明，谷氨酰胺在保護(hù)細(xì)胞膜的完整性、維持細(xì)胞活力及降低細(xì)胞氧化損傷方面具有積極的作用［13］。

表1 小麥低聚肽氨基酸含量Table 1Amino acid composition of WOP

2.2 小麥低聚肽相對分子質(zhì)量分布

小麥低聚肽主要由小分子肽構(gòu)成。由表2結(jié)果可知，相對分子質(zhì)量小于1 000的組分占94.33%，其中500～1 000的組分占21.10%，140～500的組分占60.55%。

表2 小麥低聚肽相對分子質(zhì)量分布情況Table 2Relative molecular weight distribution of WOP

按照氨基酸平均相對分子質(zhì)量為137計(jì)算，小麥低聚肽主要由八肽以下的小分子肽段構(gòu)成。研究表明，小肽的吸收具有耗能低、轉(zhuǎn)運(yùn)速度快、載體不易飽和等特點(diǎn)，吸收效率比氨基酸高，更容易、更快通過小腸薄膜被人體吸收利用，進(jìn)而發(fā)揮其保健功能［14］。

2.3 小麥低聚肽對H2O2誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞存活率的影響

如圖1所示，模型組細(xì)胞存活率為88.66%，與對照組相比呈極顯著性差異，即150 μmol/L H2O2作用4 h，可顯著降低HepG2細(xì)胞活力。

圖1 小麥低聚肽對H2O2誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞存活率的影響Fig.1Effect of WOP on cell viability of HepG2 injured by H2O2

相比模型組，在H2O2損傷前4 h加入0.05、0.1、0.5、1 g/L的小麥低聚肽的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率均有所提高，分別為95.47%、95.34%、102.93%、96.94%；而添加5 g/L及10 g/L小麥低聚肽的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率比模型組低，顯示出毒性作用。為了保證細(xì)胞正常生長，加樣濃度應(yīng)在其毒性濃度之下。因此，本研究選用0.05、0.1、0.5、1 g/L為后續(xù)實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度。

2.4 小麥低聚肽對H2O2誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞ROS生成的影響

模型組與對照組比較可知，150 μmol/L H2O2作用4 h可引起熒光強(qiáng)度的變化，增加了40.39%，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；加入0.05、0.1、0.5、1 g/L小麥低聚肽可降低細(xì)胞熒光強(qiáng)度，相比模型組分別下降了51.23%、44.50%、34.15%、64.94%，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

需氧細(xì)胞在代謝過程中由于受到內(nèi)外環(huán)境的刺激而會產(chǎn)生一系列活性氧，包括：O2-、H2O2及·OH等［15］。活性氧極不穩(wěn)定，中、高濃度的ROS通過細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡甚至導(dǎo)致其壞死。由圖2結(jié)果可知，150 μmol/L H2O2可顯著增加細(xì)胞內(nèi)活性氧的含量，而小麥低聚肽可抑制由H2O2引起的細(xì)胞內(nèi)活性氧的增加，推測其所含部分肽段可與細(xì)胞內(nèi)活性氧分子發(fā)生反應(yīng)，降低細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。

圖2 小麥低聚肽對H2O2誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞ROS生成的影響Fig.2Effect of WOP on ROS generation in HepG2 injured by H2O2

2.5 小麥低聚肽對H2O2誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞MDA含量的影響

需氧細(xì)胞在代謝中產(chǎn)生的ROS，可與生物膜的磷脂、酶和膜受體相關(guān)的多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物如丙二醛。丙二醛是細(xì)胞氧化損傷的一個重要指標(biāo)。圖3結(jié)果顯示，150 μmol/L H2O2作用HepG2細(xì)胞4 h后，與對照組比較，模型組細(xì)胞內(nèi)MDA含量明顯升高（P＜0.01），為對照組的128.36%。在H2O2損傷前4 h加入0.1、0.5、1 g/L小麥低聚肽可顯著降低HepG2細(xì)胞內(nèi)MDA的累積，分別為對照組的100.54%、106.42%、96.88%，相比模型組下降了27.82%、21.94%、31.48%。

圖3 小麥低聚肽對H2O2誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞內(nèi)MDA含量的影響Fig.3Effect of WOP on MDA generation in HepG2 injured by H2O2

汪飛［4］研究表明，小麥低聚肽能顯著降低低氧暴露大鼠心肌線粒體內(nèi)MDA含量，從而有效保護(hù)低氧暴露心肌線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)及功能。佘琦［16］研究顯示，小麥低聚肽能顯著降低長期低氧暴露或高原訓(xùn)練大鼠腸組織中MDA含量。本研究結(jié)果與上述結(jié)果相似，即小麥低聚肽可抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減少丙二醛的產(chǎn)生。

3 結(jié)語

在肝炎、酒精肝等多種肝病中，氧化應(yīng)激是它們共同的損傷機(jī)制［17］。H2O2可直接或轉(zhuǎn)變?yōu)椤H作用于肝細(xì)胞［18］，引起細(xì)胞氧化損傷。本研究中對小麥低聚肽的氨基酸組成和相對分子質(zhì)量分布進(jìn)行了分析，并對其提高H2O2損傷HepG2細(xì)胞存活率、抑制細(xì)胞ROS產(chǎn)生、減少M(fèi)DA生成作用進(jìn)行了研究。研究結(jié)果表明，小麥低聚肽屬于小分子肽段混合物，蛋白質(zhì)含量高，富含谷氨酸、谷氨酰胺及脯氨酸；可提高H2O2損傷HepG2細(xì)胞存活率，抑制ROS產(chǎn)生及細(xì)胞內(nèi)MDA累積。此研究結(jié)果表明，小麥低聚肽通過減少細(xì)胞內(nèi)ROS的含量可降低氧自由基對細(xì)胞產(chǎn)生的損傷，通過抑制過氧化反應(yīng)減少M(fèi)DA生成，進(jìn)而可有效保護(hù)肝臟免受氧化應(yīng)激損傷。本研究成果為小麥低聚肽應(yīng)用于保肝護(hù)肝及抗氧化功能食品的開發(fā)提供了理論依據(jù)，而小麥低聚肽肽段結(jié)構(gòu)與保肝活性及抗氧化功能之間的關(guān)系還有待于進(jìn)一步深入研究。

［1］金振濤，馬永慶，劉艷，等.小麥低聚肽粉中谷氨酰胺含量測定方法及其臨床應(yīng)用前景［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2011，37（11）：130-134.

JIN Zhentao，MA Yongqing，LIU Yan，et al.Research of the determination method of glutamine content in wheat oligo-peptide products and discussion of relatively clinical application prospect［J］.Food and Fermentation Industries，2011，37（11）：130-134.（in Chinese）

［2］代卉，施用暉，韓芳，等.小麥肽免疫活性及抗氧化作用的研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2009（3）：473-476.

DAI Hui，SHI Yonghui，HAN Fang，et al.Study on wheat peptides on immune modulating and antioxidant effect［J］.Natural Product Research and Development，2009（3）：473-476.（in Chinese）

［3］金其貫，佘奇，金愛娜，等.模擬高原訓(xùn)練對大鼠小腸粘膜屏障的影響及其小麥肽的干預(yù)作用［J］.西安體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2014（2）：225-230.

JIN Qiguan，SHE Qi，JIN Aina，et al.The effects of simulated altitude training on intestinal mucosa barrier in rats and the intervention of wheat peptide［J］.Journal of Xi'an Physical Education University，2014（2）：225-230.（in Chinese）

［4］汪飛.小麥肽對模擬高原訓(xùn)練大鼠心肌線粒體的影響及其機(jī)制的研究［D］.揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2012.

［5］韓飛，周孟良.過氧化氫誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激細(xì)胞模型的建立［J］.食品科學(xué)，2011，32（5）：55-57.

HAN Fei，ZHOU Mengliang.An experimental HepG2 cell model of hydrogen peroxide induced DNA oxidative injury［J］.Food Science，2011，32（5）：55-57.（in Chinese）

［6］Jens Lykkesfeldt，Ove Svendsen.Oxidants and antioxidants in disease：Oxidative stress in farm animals［J］.Veterinary Journal，2007，173（3）：502-511.

［7］Da Silva R.，Dos Santos-Valente E C.，Burim Scomparini F，et al.The relationship between nutritional status，vitamin A and zinc levels and oxidative stress in patients with ataxia-telangiectasia［J］.Allergologia et Immunopathologia，2014，42（4）：329-335.

［8］Elizabeth Head，Jaime Rofina，Steven Zicker.Oxidative stress，aging，and central nervous system disease in the canine model of human brain aging［J］.Veterinary Clinics of North America：Small Animal Practice，2008，38（1）：167-178.

［9］Anna Zampetaki，Katarzyna Dudek，Manuel Mayr.Oxidative stress in atherosclerosis：The role of microRNAs in arterial remodeling［J］.Free Radical Biology and Medicine，2013，64（9）：69-77.

［10］Luc Rochette，Marianne Zeller，Yves Cottin，et al.Diabetes，oxidative stress and therapeutic strategies［J］.Biochimica et Biophysica Acta（BBA）-General Subjects，2014，1840（9）：2709-2729.

［11］Daniela Zanini，Luana Paula Pelinson，Roberta Schmatz，et al.δ-aminolevulinate dehydratase activity in lung cancer patients and its relationship with oxidative stress［J/OL］.Biomedicine&Pharmacotherapy，2014，28.DOI：10.1016/j.biopha.2014.04.005.

［12］葉志華，邢雅玲，田琳琳，等.原兒茶醛對叔丁基過氧化氫損傷HepG2細(xì)胞的保護(hù)作用［J］.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2007，31（2）：126-129.

YE Zhihua，XING Yaling，TIAN Linlin，et al.Protection of protocatechuic aldehyde against HepG2 cells injury induced by tertbutyl hydroperoxide［J］.Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences，2007，31（2）：126-129.（in Chinese）

［13］Frédéric Ziegler，Lamia Seddiki，Rachel Marion-Letellier，et al.Effects of l-glutamine supplementation alone or with antioxidants on hydrogen peroxide-induced injury in human intestinal epithelial cells［J/OL］.e-SPEN，the European e-Journal of Clinical Nutrition and Metabolism，2011，6（4）：e211-e216.

［14］蔡木易.食源性肽研究進(jìn)展［J］.北京工商大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2012，30（5）：1-10.

CAI Muyi.Progress of research on food-derived peptide［J］.Journal of Beijing Technology and Business University：Natural Science Edition，2012，30（5）：1-10.（in Chinese）

［15］劉小兵，樸建華.生物活性物質(zhì)的抗氧化能力評價方法及其研究進(jìn)展［J］.中國食品衛(wèi)生雜志，2008，20（5）：440-444.

LIU Xiaobing，PIAO Jianhua.Progress in evaluation methods of antioxidant capacity of bioactive substances［J］.Chinese Journal of Food Hygiene，2008，20（5）：440-444.（in Chinese）

［16］佘琦.模擬高原訓(xùn)練對大鼠小腸粘膜屏障的影響及其小麥肽的干預(yù)作用［D］.揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2012.

［17］Aguilar-Delfin I，López-Barrera F，Hemández-Munoz R.Selective enhancement of lipid peroxidation in plasma membrane in two experimental models of liver regeneration：Partial hepatectomy and acute CCl4administration［J］.Hepatology，1996，24（3）：657-662.

［18］歐瑜，鄭姍，林琳.藻藍(lán)蛋白對體外誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞損傷的保護(hù)作用［J］.藥物生物技術(shù)，2009，16（5）：435-438.

OU Yu，ZHENG Shan，LIN Lin.Protective effects of C-Phycocyanin on hepatoma cell HepG2 injury in vitro［J］.Pharmaceutical Biotechnology，2009，16（5）：435-438.（in Chinese）

Protective Effect of Wheat Oligopeptides on Hydrogen Peroxide-Induced HepG2 Cell Injury

LIU Yan，ZHANG Haixin，WEI Ying，LIN Feng，CAI Muyi*
（Beijing Engineering Research Center of Protein&Functional Peptides，China National Research Institute of Food and Fermentation Industries，Beijing 100015，China）

Amino acid composition and molecular weight distribution of wheat oligopeptides（WOP）were analyzed，and the protective effect of WOP on hydrogen peroxide（H2O2）-induced HepG2 cell oxidative injury was investigated.After treated with different concentrations of WOP for 4 h，HepG2 cells were injured by 150 μmol/L of H2O2for 4h，and then the cell viability and contents of intracellular reactive oxygen species（ROS）and malondialdehyde（MDA）were determined.Results showed that the percentage of WOP with molecular weight below 1，000 Da reached up to 93.44%and the contents of glutamic acid，glutamine and proline were relatively high.Furthermore，WOP increased the cell viability and inhibited the production of intracellular ROS and MDA，indicating beneficial effects of WOP on the reduction of oxidative stress and the improvement of cell antioxidant capacity.Thus，WOP could protect liver cells against the injury caused by peroxides.

wheat oligopeptides，HepG2 cells，H2O2，oxidative injury

TS201.4

A

1673—1689（2015）06—0599—06

2014-07-11

國家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2012BAD33B04-02）；國家863計(jì)劃項(xiàng)目（2013AA102205-02）；科技北京百名領(lǐng)軍人才培養(yǎng)工程項(xiàng)目（Z131110000513026）；北京市科技計(jì)劃項(xiàng)目（Z131100003113010）。

劉艷（1986-），女，內(nèi)蒙古烏海人，工學(xué)碩士，工程師，主要從事功能性食品研究。E-mail：liuyan39259@163.com

*通信作者：蔡木易（1962-），男，北京人，教授級高級工程師，主要從事功能食品研究。E-mail：caimuyi@vip.sina.com