徐亮亮，朱小林，蘇　麗

（江蘇先科藥業(yè)有限公司，江蘇　南通　226200）

用加校正因子的主成分自身對照法測定鹽酸去氧腎上腺素中雜質(zhì)C的含量

徐亮亮，朱小林，蘇麗

（江蘇先科藥業(yè)有限公司，江蘇南通226200）

目的建立加校正因子的主成分自身對照法測定鹽酸去氧腎上腺素中雜質(zhì)C的含量。方法采用C18柱（4.6mm×250 mm，5 μm），以乙腈∶0.325％磺酸鈉（用磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.8）（10∶90）為流動相，梯度洗脫，流速為1.5mL·min-1，柱溫為45℃，檢測波長為215 nm，進(jìn)樣量為20 μL。測定雜質(zhì)C相對于鹽酸去氧腎上腺素的相對出峰時間及校正因子，并計算其含量。結(jié)果雜質(zhì)C在0.065 1～1.626 9 μg·mL-1，鹽酸去氧腎上腺素在0.064 7～1.618 4 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系；雜質(zhì)C相對于鹽酸去氧腎上腺素的相對保留時間為1.3，校正因子為0.50。結(jié)論本方法專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，無需提供雜質(zhì)對照品，能夠準(zhǔn)確測定鹽酸去氧腎上腺素中雜質(zhì)C的含量。

鹽酸去氧腎上腺素；雜質(zhì)C；校正因子

鹽酸去氧腎上腺素為擬腎上腺素藥物，用于防治脊椎麻醉、全身麻醉、外科手術(shù)延長局療麻醉時間，鼻黏膜充血的消炎、眼科的擴(kuò)瞳以及急性低血壓的升壓、感冒等，為急救常備藥品［1～3］。為確保藥物的安全性，降低不良反應(yīng)，需對藥物的雜質(zhì)進(jìn)行有效的檢測和控制［4～7］。本文主要對鹽酸去氧腎上腺素的雜質(zhì)C［1-（3-hydroxyphenyl）-2-（methylamino）ethanone］進(jìn)行研究，建立了測定雜質(zhì)C含量的加校正因子的主成分自身對照法。經(jīng)驗證，本文建立的方法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，可用于鹽酸去氧腎上腺素雜質(zhì)C的質(zhì)量控制，并減少鹽酸去氧腎上腺素質(zhì)量控制過程中對雜質(zhì)C對照品的依賴。

1　儀器與試藥

1.1儀器Dionex P680高效液相色譜儀（UV檢測器，美國戴安公司），色譜柱（Wonda Cract ODS-2C18，4.6mm×250 mm，5 μm）組成色譜系統(tǒng) 1；Agilent 1260高效液相色譜儀（DAD檢測器，美國安捷倫公司），色譜柱（Agilent Zorbax Eclipse Plus C18，4.6mm×250 mm，5 μm）組成色譜系統(tǒng)2；DV215CD電子天平（美國Ohaus公司）；STARTER3100型pH計（美國Ohaus公司）。

1.2試藥鹽酸去氧腎上腺素（批號：140601、140602、140603，赤峰艾克制藥科技股份有限公司）；鹽酸去氧腎上腺素對照品（批號：100261-201403，含量：99.9％，中國藥品生物制品檢定所）；雜質(zhì)C對照品（批號：03045191C，含量：98.6％，英國LGC）；乙腈為色譜純（德國 Merck公司），水為超純水，其它試劑為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件C18柱（4.6mm×250 mm，5 μm），流動相A：乙腈∶0.325％磺酸鈉（用磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.8）（10∶90），流動相B：乙腈∶0.325％磺酸鈉（用磷酸調(diào)節(jié) pH值為2.8）（90∶10），梯度洗脫（見表1），流速為1.5mL·min-1，柱溫45℃，檢測波長為215 nm，進(jìn)樣量10 μL。

2.2溶液的制備供試品溶液配制：取鹽酸去氧腎上腺素，加混合溶劑［流動相B∶流動相A（20∶80，V/V）］制成每1 mL中約含鹽酸去氧腎上腺素1 mg的溶液。

對照品溶液配制：取雜質(zhì)C對照品，加混合溶劑［流動相B∶流動相A（20∶80，V/V）］制成每1 mL中約含0.001 mg雜質(zhì)C的溶液。

2.3專屬性試驗用混合溶劑配制鹽酸去氧腎上腺素供試品溶液，分別注入儀器系統(tǒng)1、系統(tǒng)2，結(jié)果見圖1～4和表2。結(jié)果顯示雜質(zhì)C相對于鹽酸去氧腎上腺素的保留時間確定為1.3，雜質(zhì)C峰前后峰分離度均大于1.5，系統(tǒng)適用性良好，專屬性試驗符合要求。

表2　鹽酸去氧腎上腺素和雜質(zhì)C在不同系統(tǒng)中的出峰時間和分離度

2.4精密度、重復(fù)性試驗取“2.2”項下雜質(zhì)C對照品溶液，在儀器系統(tǒng)1與儀器系統(tǒng)2中各連續(xù)進(jìn)樣6次，測得雜質(zhì)C峰面積的RSD分別為0.6％、0.4％。取同一批樣品，平行配制6份，測定含量，測得雜質(zhì)C平均含量分別為0.035％，RSD=0.9％（n =6）、0.036％，RSD=1.0％（n=6）。

圖1　系統(tǒng)1：鹽酸去氧腎上腺素供試品圖譜

圖2　系統(tǒng)1：雜質(zhì)C對照品圖譜

圖3　系統(tǒng)2：鹽酸去氧腎上腺素供試品圖譜

2.5溶液穩(wěn)定性試驗按“2.2”項下方法配制供試品溶液，室溫放置，分別于0、1、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果雜質(zhì)C峰面積RSD為0.4％，鹽酸去氧腎上腺素峰面積RSD為0.8％。

2.6檢測限和定量限采用逐步稀釋法，在儀器系統(tǒng)1和儀器系統(tǒng)2中測得鹽酸去氧腎上腺素的檢測限（S/N=3）均為0.39 ng，定量限（S/N=10）均為1.29 ng；雜質(zhì)C的檢測限和定量限分別為0.20 ng、0.65 ng。

圖4　系統(tǒng)2：雜質(zhì)C對照品圖譜

2.7回收率試驗取本品適量，精密稱定，置100 mL量瓶中，分別精密加入雜質(zhì)C 26.13、52.26、78.39 μg各3份，加混合溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣測定，計算得雜質(zhì)C的平均加樣回收率為99.29％，RSD為0.66％（n=9），結(jié)果見表3。

表3　雜質(zhì)C回收率試驗結(jié)果

2.8線性試驗取雜質(zhì)C對照品2.20 mg，用流動相溶解并依次稀釋制成濃度分別為0.065 1、0.271 2、0.542 3、1.084 6、1.626 9 μg·mL-1的線性溶液；取鹽酸去氧腎上腺素對照品2.15mg，用流動相溶解并依次稀釋制成濃度分別為0.064 7、0.269 7、0.539 5、1.078 9、1.618 4 μg·mL-1的線性溶液。

按“2.1”項下方法進(jìn)行測定。由峰面積對濃度進(jìn)行線性回歸，得線性方程：雜質(zhì)C：Y=268 621X-422.49，r=1。雜質(zhì)C濃度為0.0651 ～1.626 9 μg·mL-1時，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系；鹽酸去氧腎上腺素：Y=134 166X-424.83，r =0.999 9。鹽酸去氧腎上腺素濃度為0.064 7～1.618 4 μg·mL-1時，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.9雜質(zhì)C校正因子的確定由雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則可知，由于特定雜質(zhì)的不易取得，可采用加校正因子的方式對特定雜質(zhì)進(jìn)行定量，參考《中國藥典》2010年版（二部）附錄藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則，可采用校正因子法對雜質(zhì)進(jìn)行定量分析，采用斜率的比值確定并驗證雜質(zhì)C的相對校正因子［8］，結(jié)果見表4。

表4　校正因子測定結(jié)果

2.10樣品測定取鹽酸去氧腎上腺素，按“2.1”、“2.2”項下的方法分別用外標(biāo)法和加校正因子（f= 0.50）的主成分自身對照法測定雜質(zhì)C的含量，結(jié)果見表5。

表5　樣品（雜質(zhì)C）測定結(jié)果

3　討論

以上研究結(jié)果顯示，本文建立的雜質(zhì)C色譜系統(tǒng)具有良好的專屬性，相對出峰時間和校正因子在不同儀器系統(tǒng)有較好的重現(xiàn)性，因此可作為測定雜質(zhì)C的有效方法。

本文建立了鹽酸去氧腎上腺素雜質(zhì)C的加校正因子（f=0.50）的主成分自身對照法，為控制鹽酸去氧腎上腺素中雜質(zhì)C的含量提供了有效的檢測方法，并為解決產(chǎn)品質(zhì)量控制過程中雜質(zhì)C對照品的不易獲得性問題提供了一個可行的解決方案。

［1］韓加怡，李會林.RP-HPLC測定復(fù)方麻黃堿噴鼻液中鹽酸麻黃堿、鹽酸林可霉素和地塞米松磷酸鈉含量的方法學(xué)研究［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2008，25（2）：131-133.

［2］郭曉明，宮曉光，范洪濤，等.RP-HPLC法測定復(fù)方托吡卡胺滴眼液中鹽酸去氧腎上腺素與托吡卡胺兩組分含量［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2005，22（6）：438-440.

［3］孫克剛，施建國，蔣宇丹.HPLC法同時測定鹽酸異丙腎上腺素注射液和鹽酸腎上腺素注射液的含量及有關(guān)物質(zhì)［J］.上海醫(yī)藥，2012，33（5）：41-44.

［4］孟昭仁，奚洪民.示波極譜滴定法測定鹽酸腎上腺素和重酒石酸去甲腎上腺素［J］.分析化學(xué)，2001，29（3）：371.

［5］倪永年，桂懌.微分脈沖伏安法測定藥物中鹽酸去氧腎上腺素的含量［J］.南昌大學(xué)學(xué)報（理科版），2009，33（1）：35-37.

［6］孫玉靜，周麗，王婷婷，等.HPLC法同時測定鹽酸去氧腎上腺素、托吡卡胺的含量［J］.藥物分析雜志，2009，29（11）：1944-1946.

［7］黃滔敏，段更利，王東蕾，等.HPLC測定復(fù)方鹽酸去氧腎上腺素噴鼻液中鹽酸去氧腎上腺素、地塞米松磷酸鈉和鹽酸林可霉素的含量［J］.復(fù)旦學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2010，37（5）：598-600.

［8］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（二部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄204-206.

Determination of the impurity C in phenylephrine hydrochloride by main constituent own control method with correction factor

XU Liang-liang，ZHU Xiao-lin，SU Li
（Jiangsu Ascendia Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nantong 226200，China）

Objective To establish a method for the determination of impurity C in phenylephrine hydrochloride by main constituent own control method with correction factor.Methods The assay was carried out on a C18column（4.6mm ×250 mm，5 μm）with the mobile phase of acetonitrile-0.325％sodium sulfonate solution（with phosphoric acid to adjust pH value of 2.8）（10∶90）at a flow rate of 1.5 mL·min-1.The column temperature，the detection wave length and the injection volume were set at 45℃，215 nm，and 20 μL.The relative retention time and the correction factor between impurity C and phenylephrine hydrochloride were determined.Results The linear ranges of impurity C and phenylephrine hydrochloride were 0.065 1～1.626 9 μg·mL-1，0.064 7～1.618 4 μg·mL-1，respectively.The relative retention time between impurity C and phenylephrine hydrochloride was 1.3，the correction factor between impurity C and phenylephrine hydrochloride was 0.50.Conclusion This method was simple，accurate and reliable to determine impurity C in phenylephrine hydrochloride.without standard substances.

Phenylephrine hydrochloride；Impurity C；Correction factor

R927.11

A

2095-5375（2015）12-0706-004

徐亮亮，男，主管藥師，研究方向：藥物制劑開發(fā)與質(zhì)量研究，E-mail：XLL@assendia.cn