程猷，盧來春，傅若秋，盛芳芳，劉冰，王林麗

（中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所藥劑科，重慶400042）

金嗓口服液質(zhì)量標準提高研究*

程猷，盧來春，傅若秋，盛芳芳，劉冰，王林麗

（中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所藥劑科，重慶400042）

目的探討金嗓口服液的質(zhì)量標準。方法采用薄層色譜（TLC）法對處方中黃芩、薄荷、金銀花進行定性鑒別，以高效液相色譜（HPLC）法對制劑中黃芩所含黃芩苷含量進行測定。結(jié)果定性鑒別方法專屬性強。黃芩苷質(zhì)量濃度在0.019 71～0.197 1 g/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.999 9），平均加樣回收率為103.02%，RSD為1.84%（n=9）。結(jié)論該法簡便，專屬性、重復(fù)性好，可有效控制金嗓口服液的質(zhì)量。

金嗓口服液；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標準；黃芩

金嗓口服液是筆者所在醫(yī)院專家根據(jù)中醫(yī)理論，經(jīng)多年科研、臨床實踐而制成的中藥復(fù)方制劑，由黃芩、板藍根、金銀花、薄荷等8味中藥組方，具有清熱解毒、利咽喧聲之功效，主要用于治療急慢性咽喉炎、急慢性扁桃體炎、急性會厭炎，效果顯著［1］。目前該制劑的質(zhì)量標準中僅對金銀花進行了薄層色譜（TLC）鑒別，無主要中藥成分的含量測定標準。本研究中擬采用高效液相色譜（HPLC）法對該制劑黃芩中黃芩苷進行含量測定，同時對黃芩、金銀花、板藍根進行TLC鑒別，進一步完善其質(zhì)量標準，保證用藥安全?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；KQ-500E型醫(yī)用超聲波清洗器；BT 25S型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；ULUP-Ⅲ-10T型觸摸屏高端超純水器（成都優(yōu)普電子產(chǎn)品有限公司）。黃芩苷對照品（批號為110715-201318）、綠原酸對照品（批號為110753-201314），（R-S）告依春對照品（批號為111753-201304），均由中國食品藥品檢定研究院提供；金嗓口服液（本院自制，批號為140512）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；硅膠薄層色譜G板（青島海洋化工廠分廠）；聚酰胺薄膜板（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

黃芩：取樣品10m L，加50%甲醇超聲30 min，濾過，濾液蒸干，加甲醇1 mL使殘渣溶解，作為供試品溶液。精密稱取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。另按供試品溶液制備方法制備缺黃芩藥材的陰性對照品溶液。照TLC法［2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB］試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（7∶2∶0.5∶1）為展開劑展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，至薄層近濕。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的黃色斑點，陰性無干擾（見圖1 A）。

板藍根：取黃芩鑒別項下的供試品溶液作為供試品溶液。精密稱取（R-S）告依春對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。另按供試品溶液制備方法制備缺板藍根藥材的陰性對照品溶液。依法試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1）為展開劑（飽和后取上清液），展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾（見圖1 B）。

金銀花：取樣品10 mL，水浴蒸干，加入95%乙醇15 mL（熱熔），過濾，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。精密稱取綠原酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。另按供試品溶液制備方法制備缺金銀花藥材的陰性對照品溶液。依法試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層版上，以醋酸丁酯-甲酸-正丁醇-水（42∶15∶10∶15）上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾（見圖1 C）。

圖1 薄層色譜圖

2.2 黃芩苷含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸-0.1%三乙胺水溶液（57∶43）；柱溫：30℃；檢測波長：280 nm；流速：1 mL/min；進樣量：10 μL。

2.2.2 溶液制備

精密稱定黃芩苷對照品10.23 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，靜置，即得質(zhì)量濃度為0.102 3 g/L的對照品溶液。精密量取金嗓口服液5 mL，置100 mL容量瓶中，加入50%甲醇70 mL，超聲30 min，放冷，再用50%甲醇定容，搖勻，靜置，即得供試品溶液。按金嗓口服液處方比例取缺黃芩藥材制成溶液，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：分別取空白溶液（提取溶劑）、陰性對照品溶液、對照品溶液及供試品溶液各10 μL，按擬訂色譜條件進樣，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液色譜中黃芩苷與其他雜質(zhì)分離度良好，陰性對照品溶液色譜在黃芩苷相應(yīng)位置處無干擾（見圖2）。

圖2 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：稱取黃芩苷對照品19.71 mg，精密稱定，用甲醇定溶于100 mL容量瓶中，超聲1 mim，使其完全溶解，搖勻，靜置，即得質(zhì)量濃度為0.197 1 g/L的黃芩苷對照品溶液，精密吸取，置10 mL容量瓶中，配制成6個不同梯度的對照品溶液（0.1576 8，0.098 55，0.078 84，0.059 13，0.039 42，0.019 71 g/L），依法測定。以峰面積（Y）為縱坐標、質(zhì)量濃度（X，g/L）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=318 075.5 X-22.3，r=0.999 9（n=7）。結(jié)果表明，黃芩苷質(zhì)量濃度在0.019 71～0.197 1 g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復(fù)進樣6次。結(jié)果的RSD為0.71%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：取同一批樣品，依法制備供試品溶液，分別精密量取4，5，6 mL，平行3份。結(jié)果的RSD＜2.0%（n=9），表明該方法重復(fù)性良好。

定量限：將黃芩苷對照品溶液進行稀釋，信噪比約為10∶1確定其定量限。結(jié)果定量限為2.98 ng。

穩(wěn)定性試驗：精密量取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12 h時按擬訂色譜條件測定。結(jié)果的RSD為0.75%（n=6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為140512），按低、中、高3個濃度精密量取4，5，6 mL，置100 mL容量瓶中，平行3份，分別精密加入黃芩苷對照品（0.102 3 g/L）3 mL，用50%甲醇定容，按供試品溶液方法制備，再按擬訂色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗結(jié)果（n=9）

2.2.4 樣品含量測定

分別精密量取3批樣品溶液5 mL，置100 mL容量瓶，按供試品溶液方法制備，按擬訂色譜條件測定。結(jié)果批號為140512，140721，140825的3批樣品中黃芩苷含量分別為1.592，1.593，1.594 g/L。

3 討論

本制劑由多味中藥材提取而成，成分復(fù)雜，本試驗中選擇了起主要功效的藥材進行TLC法定性鑒別，并作了陰性對照試驗，結(jié)果表明陰性對照品無干擾。本方法專屬性較強，簡單易行，重復(fù)性好，可作為全面、準確的質(zhì)量控制方法。作板藍根定性鑒別時，對比了正丁醇-冰醋酸-水（19∶5∶5）［2］、乙酸乙酯-冰醋酸-石油醚（10∶5∶2）的展開效果，發(fā)現(xiàn)前者Rf較大，后者幾乎展不開，綜合考慮，最終選擇正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1）作為展開劑。

黃芩為唇形科植物黃芩的干燥根，為本制劑的君藥，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效［2］，有抗呼吸道合胞病毒作用［3］，2010年版《中國藥典（一部）》規(guī)定黃芩苷為黃芩的指標成分［4］。目前對黃芩苷的質(zhì)量控制方法主要為HPLC法［5］、紫外檢測法［6］、液-質(zhì)聯(lián)用法等［7］。本試驗中采用HPLC法對黃芩苷進行定量測定，對流動相進行了考察，發(fā)現(xiàn)甲醇-水時目標峰拖尾嚴重，采用甲醇-磷酸水-三乙胺系統(tǒng)時峰形較好，經(jīng)篩選，最終確定最佳流動相為甲醇-0.1%磷酸0.1%三乙胺水溶液（57∶43）。在樣品前處理方法考察中，對比了加熱回流提?。?］和超聲提取方法［9-10］，發(fā)現(xiàn)二者對黃芩苷含量并無影響。還對超聲時間進行考察，發(fā)現(xiàn)30 min時樣品已提取完全，因此確定超聲時間為30 min。該方法前處理無需凈化，操作簡便、快速，測定結(jié)果準確可靠，重復(fù)性好，實用性強，可用于金嗓口服液中黃芩苷的定量測定。下一步擬建立板藍根的含量測定方法，更好地保證金嗓口服液藥品質(zhì)量。

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Improve Study on Quality Standards of Jinsang Oral Solution

Cheng You,Lu Laichun,Fu Ruoqiu,Sheng fangfang,Liu Bing,Wang Linli
（Department of Pharmacy,The Third Affiliated Hospital of the Third Military Medical University,Chongqing,China400042）

ObjectiveTo study the quality standards of Jinsang Oral Solution.MethodsTLC method was used for the qualitative identification of Scutellaria baicalensis,Mentha haplocalyx,Lonicera japonica.The content of Baicalin was determined by HPLC.ResultsThe identification method was specific.Linear range of determination of Baicalin was 0.019 71-0.197 1 g/L（r=0.999 9）.The average recovery rate was 103.02%,RSD=1.84%（n=9）.ConclusionThe method is simple,accurate and reproducible for the quality control of Jinsang Oral Solution.

Jinsang Oral Solution；TLC；HPLC；quality standands；scutellariae

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）20-0081-03

程猷（1987-），男，碩士研究生，研究方向為中藥質(zhì)量控制，（電話）023-68757098（電子信箱）cy67100971@163.com；王林麗（1964-），女，大學(xué)本科，副主任藥師，研究方向為中藥制劑研究，本文通訊作者，（電話）023-68757195。

2015-01-07；

2015-03-24）

*軍隊醫(yī)療機構(gòu)制劑標準提高科研專項課題，項目編號：13ZJZ01-6。