付靜，朱月月，聶詩(shī)明

（湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北武漢430065）

定喘止咳糖漿中麻黃堿及偽麻黃堿的含量測(cè)定

付靜，朱月月，聶詩(shī)明

（湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北武漢430065）

目的建立測(cè)定喘止咳糖漿含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Ultimate XB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為0.02 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH=3.0，0.4%的三乙胺）-甲醇（96∶4），流速0.9 mL/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm。結(jié)果鹽酸麻黃堿質(zhì)量濃度在1.934 4～30.950 0 μg/mL（r=1.000 0）與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為99.50%；鹽酸偽麻黃堿質(zhì)量濃度在2.481 3～39.700 0 μg/mL（r=0.999 9）與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為96.57%（n=5）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，適用于定喘止咳糖漿的質(zhì)量控制。

定喘止咳糖漿；高效液相色譜法；麻黃堿；偽麻黃堿

定喘止咳糖漿由麻黃、杏仁、厚樸、陳皮、柴胡、紫蘇葉、甘草等組方，具有宣肺平喘、理氣止咳的功效，臨床常用于治療風(fēng)寒喘咳、胸腹脹滿(mǎn)，亦可用于支氣管哮喘、支氣管炎［1］。麻黃辛散苦泄，為方中主藥，主要有效成分麻黃堿和偽麻黃堿的藥理作用相當(dāng)廣泛［2］，其中麻黃堿的平喘效果相當(dāng)顯著［3］。采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定麻黃堿和偽麻黃堿的含量多見(jiàn)報(bào)道［4-9］，但尚未見(jiàn)同時(shí)測(cè)定兩者含量的報(bào)道。原藥品標(biāo)準(zhǔn)僅規(guī)定了常規(guī)檢查項(xiàng)目，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)。筆者建立了可同時(shí)測(cè)定定喘止咳糖漿中麻黃堿及偽麻黃堿含量的HPLC法，以更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

DIONEX高效液相色譜儀；UVD170u LC紫外檢測(cè)器；電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）。定喘止咳糖漿（湖北端正藥業(yè)有限公司，批號(hào)為121201，121202，121203）；鹽酸麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為171237-201208，供含量測(cè)定用）；鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為171241-201007，供含量測(cè)定用）；雙蒸水（實(shí)驗(yàn)室自制），甲醇為色譜純，鹽酸、乙醚、甲醇均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Ultimate XB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.02 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH=3.0，含0.4%的三乙胺）-甲醇（96∶4）；流速：0.9 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；進(jìn)樣量：20 μL。在此條件下，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿分離效果好，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取鹽酸麻黃堿對(duì)照品3.095 mg，置10 mL容量瓶，加流動(dòng)相至刻度，得鹽酸麻黃堿對(duì)照品貯備液；精密稱(chēng)取鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品3.970 mg，置10 mL容量瓶，加流動(dòng)相至刻度，得鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品貯備液。精密量取定喘止咳糖漿5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)；精密吸取續(xù)濾液2 mL，置10 mL容量瓶，加入1 mL稀鹽酸，加流動(dòng)相至10 mL，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按定喘止咳糖漿的處方及工藝，制成不含麻黃的陰性樣品，按供試品溶液方法制成陰性對(duì)照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：將鹽酸麻黃堿對(duì)照品貯備液、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品貯備液分別稀釋為系列質(zhì)量濃度溶液，精密吸取上述溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測(cè)定色譜峰面積，以對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程，鹽酸麻黃堿Y=0.940 4X+0.059 6，r=1.000 0（n=5），質(zhì)量濃度在1.934 4～30.950 0 μg/mL與峰面積線性關(guān)系良好；鹽酸偽麻黃堿Y=0.712 3 X+0.237 4，r= 0.999 9（n=5），質(zhì)量濃度在2.481 3～39.700 0 μg/mL與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的RSD分別為1.19%和2.08%（n=5），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同批樣品5份，按供試品溶液制備方法及擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的RSD分別為3.10%和2.97%（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于1，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定峰面積。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的RSD分別為2.35%和1.85%（n=5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知含量的同一批樣品（批號(hào)為121201）5份，每份5 mL，分別加入鹽酸麻黃堿對(duì)照品500 μg、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品180 μg，按供試品溶液制備方法制備，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)3批樣品的含量結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，暫訂本品每1 mL含鹽酸麻黃堿（C10H15NO·HCl）和鹽酸偽麻黃堿（C10H15NO·HCl）的總量不得少于0.50 mg。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（g/L）

3 討論

關(guān)于色譜柱的選擇，曾用Thermo hypersil ODS C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm），Agilent Extend C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），Welch（月旭）Ultimate XB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），結(jié)果Welch（月旭）Ultimate XB-C18柱更適合于鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的分離，被測(cè)組分離度更好。

關(guān)于流動(dòng)相的緩沖液選擇，曾選用pH分別為1.5，2.0，2.5，3.0的0.02 mol/L磷酸二氫鈉（含0.4%的三乙胺）緩沖液，結(jié)果pH=3.0的0.02 mol/L磷酸二氫鈉（含0.4%的三乙胺）緩沖液有較好分離效果，故選用甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鈉（pH= 3.0含0.4%的三乙胺）緩沖液（4∶96）。

HPLC法能分離中藥中復(fù)雜成分，本試驗(yàn)中建立的HPLC法分離效果好、回收率高，適用于定喘止咳糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿含量的測(cè)定。

［1］WS3-B-2548-97.中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第十三冊(cè)）［S］.

［2］鄭萍，戴貴東，李漢青.麻黃堿及偽麻黃堿藥理作用研究進(jìn)展［J］.寧夏醫(yī)學(xué)，2002，24（2）：126-127.

［3］劉賾，石倩，楊洋，等.麻黃堿與偽麻黃堿平喘效果及機(jī)制比較研究［J］.中草藥，2009，40（5）：771-774.

［4］馬毅，晉玲，王振恒，等.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地麻黃中麻黃堿和偽麻黃堿的含量［J］.西部中醫(yī)藥，2012，25（7）：14-16.

［5］成紅娟，曲婷麗，劉銳玲，等.HPLC同時(shí)測(cè)定止嗽立效口服液中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿含量［J］.中成藥，2009，31（2）：240-242.

［6］金陽(yáng).HPLC法測(cè)定小兒咳喘靈顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量［J］.安徽醫(yī)藥，2007，11（11）：992-993.

［7］王玲，高曉黎.麻黃及其復(fù)方制劑中麻黃堿含量測(cè)定的研究進(jìn)展［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，29（10）：1 005-1 007.

［8］付莉，張淼.HPLC法測(cè)定麻黃浸膏中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量［J］.中國(guó)藥事，2012，26（6）：611-616.

［9］余翔，夏平.高效液相色譜法測(cè)定咳立停糖漿中鹽酸麻黃堿含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2010，19（19）：24-25.

Determination of Ephedrine and Pseudoephedrine in Dingchuan Zhike Syrup

Fu Jing,Zhu Yueyue,Nie Shiming
（The School of Pharmacy,Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan,Hubei,China 430065）

ObjectiveTo formulate the HPLC method of content determination of the Dingchuan Zhike Syrup.MethodsThe chromatography：Ultimate-XB C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）；Mobile phase：methanol-0.02 mol/L sodium dihydrogen phosphate buffer（pH=3.0,containing 0.4%of triethylamine）（96∶4）；flow rate：0.9 mL/min；column temperature：30℃；detection wavelength：210 nm. ResultsEphedrine hydrochloride was linear in the range of 1.934 4-30.950 0 μg/mL（r=1.000 0）,the average recovery was 99.50%.Pseudoephedrine hydrochloride was linear in the range of 2.481 3～39.700 0 μg/mL（r=0.999 9）,the average recovery was 96.57%（n=5）.ConclusionThe method is simple and accurate,it also has good reproducibility.This method can be applied to control the quality of the dingchuan zhike syrup.

Dingchuan Zhike Syrup；HPLC；ephedrine hydrochloride；pseudoephedrine hydrochloride

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）20-0079-02

付靜（1991-），女，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幮轮苿?、新劑型及新技術(shù)，（電子信箱）565403063@qq.com；聶詩(shī)明（1962-），男，教授，主要從事中藥新制劑、新劑型研究，本文通訊作者，（電子信箱）163nsm@163.com。

2015-01-27；

2015-03-16）