微生物學

FM4-64和Hoechst染料在活細菌胞膜和擬核標記定位中的條件優(yōu)化與應用

王凈，韓延平，楊瑞馥，等

目的：為了觀察細菌細胞膜和擬核的形態(tài)結構，準確對亞細胞進行定位。方法：本文利用FM4-64和Hoechst兩種染料，分別采用不同濃度和不同時間對大腸桿菌活細胞進行染色和熒光共聚焦顯微成像，并對7種細菌的活細胞（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、鼠疫耶爾森菌、軍團菌、霍亂弧菌和炭疽芽孢桿菌）進行染色觀察。結果：相同觀察條件下，不同染料濃度和不同的染色時間影響了細胞膜、擬核的熒光強度；確定了FM4-64染色通用條件（濃度20 μg/mL染色1 min）和Hoechst的最佳條件（濃度20 μg/mL染色20 min）。上述條件下，Hoechst對8種細菌染色效果均較理想，然而FM4-64對細菌染色效果不同，革蘭氏陰性菌（大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、鼠疫耶爾森菌、霍亂弧菌、銅綠假單胞菌和軍團菌）表現(xiàn)較好的細胞膜輪廓，革蘭氏陽性菌（炭疽芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌）效果較差。結論：FM4-64和Hoechst兩種染料共染8種細菌，對細胞膜和擬核的染色觀察，可為原核細胞結構染色提供借鑒，并為大分子的亞細胞定位研究奠定基礎。

兩種染料FM4-64和Hoechst；活細菌；細胞膜；擬核；標記定位

來源出版物：微生物學報，2015，55（8）： 1068-1073聯(lián)系郵箱：韓延平，yanpinghan@gmail.com